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新生儿trRNA独立阳性的HBV感染状态
目的:探讨新生儿trRNA独立阳性的HBV感染状态的稳定性及影响因素.方法:跟踪随访85例HBsAg阳性孕妇及所生新生儿, 孕妇在接受HBIG治疗前和分娩前各采血1次, 新生儿在出生后24 h内、1、3、6、9、12、18、24 mo各采血1次, 检测trRNA、fRNA、乙型肝炎五项和HBV DNA定量, 按新生儿trRNA分组比较新生儿HBV活动性感染的发生率, 按母亲HBIG治疗、HBeAg、HBVDNA定量分别分组比较母婴trRNA、fRNA的检出率.结果:随访的新生儿无HBV活动性感染发生,新生儿fRNA均阴性. 分别以母婴是否行HBIG治疗分组, 比较新生儿trRNA检出率, 差别均无统计学意义; 以母亲HBeAg分组, 分别比较母婴trRNA检出率, 差别无统计学意义, 而母亲fRNA检出率差别有统计学意义(χ2 = 8.119,P = 0.004); 以孕妇产前HBV DNA定量分组,同样分别比较母婴trRNA检出率, 差别无统计学意义, 而母亲fRNA的检出率差别有统计学意义(χ2 = 21.948, P = 0.000).结论:在随访的近2年时间内, 新生儿trRNA独立阳性的HBV感染状态是稳定的, trRNA的检出不受母婴是否行HBIG治疗、HbeAg及HBV-DNA定量的影响.
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实时定量RT-PCR对乙型肝炎病毒全长RNA(fRNA)的定量检测
目的:建立一种简便的定量检测慢性乙型肝炎患者血清中终止于聚腺苷酸化位点的乙型肝炎病毒全长RNA(fRNA)的方法.方法:选取53例未治疗的乙型肝炎患者及22例HBsAg阴性的健康者为研究对象,使用锚定oligo-dT的引物对其血清中fRNA进行实时定量反转录PCR检测,统计分析其与HBV DNA、HBcrAg和HBeAg的相关性.结果:对fRNA进行实时荧光定量RT-PCR检测的下线为2.3 log copies/ml,标准曲线的相关系数为0.99(P＜0.0001).53例乙型肝炎患者中,29例(54.7％)可以检测到fRNA,22例正常对照中没有检测到fRNA.27例HBeAg阳性和/或高水平HBV DNA的患者全部检测到fRNA,26例HBeAg阴性并且低水平HBV DNA的乙型肝炎患者中有2例(7.7％)检测到fRNA (P＜0.0001).HBeAg阳性患者血清中fNA水平高于HBeAg阴性患者(5.0±0.3 vs.2.9± 0.4 log copies/ml,P＜0.001).fRNA与HBV DNA/HBcrAg具有显著相关性(闻.905、0.881,P＜0.0001).Hayashi's定量分析法Ⅰ显示fRNA与HBV DNA相关性强于其与HBcrAg的相关性.结论:与HBV DNA和HBeAg一样,fRNA可作为常规检测判断HBV的复制水平并指导用药.
关键词： HBV RNA 实时荧光定量 fRNA Hayashi's定量法 -
PCR在HBV核酸定量检测中的应用
目的:探索一种简便定量分析系统,通过检测HBV携带者血清中的HBVX区DNA,fRNA和trRNA拷贝数,为提高隐匿性感染期低复制状态HBV检测效果提供可能.方法:从血清中提取HBV DNA和RNA,对Core区、X区DNA进行PCR扩增,使用半巢式PCR法对fRNA 、trRNA在同一离心管中进行反转录并扩增,选取大小相近的质粒作为竞争模板对其进行定量.并对拉米夫定干预治疗14周前后的患者血清中HBV XDNA、Core DNA、fRNA和trRNA拷贝数进行检测与比较.所有检测结果均通过southern杂交进行验证.结果:建立了针对DNA的定量分析系统及针对RNA的RT-PCR定量分析系统,并且阐明了阿米夫定治疗前后HBV DNA和X区RNA结构和数量的变化.治疗前治疗后DNA和RNA的拷贝数均下降.Core DNA下降显著,为103-104倍,而XDNA拷贝数下降102倍.而fRNA和trRNA仅有小幅下降,为10倍左右.结论:可以通过竞争性PCR方法对血清中HBV DNA和RNA进行定量检测,以期为HBV病毒的诊断提供更充足依据.
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乙型肝炎病毒转录体的检测及与隐源性肝病的研究
目的:探讨不同肝病患者血清中乙型肝炎病毒转录体的表达及与隐匿性感染的关系.方法: 用血清核酸提取试剂盒从不同肝病患者血清中提取核酸,PCR及RT-PCR扩增HBVxDNA、fRNA和trRNA,琼脂糖电泳及Southern 杂交验证显示结果.结果: HBVxDNA和fRNA在HBsAg(+) 血清中检出率显著高于HBsAg(-)者,(P<0.05).trRNA在HBsAg(+)血清中检出率和HBsAg(-)者无显著差异,(P>0.05).trRNA在HBsAg(-)的肝癌、肝硬化血清中有高检出率,分别为66.7%、70.0%.此外,在丙肝和其他肝病中trRNA的检出率比HBVxDNA和fRNA的检出率高.结论: HBV病毒转录体与隐匿性感染密切相关.trRNA是某些HBsAg(-)肝病HBV感染的唯一指标,这将为把trRNA作为诊断特殊HBV感染的诊断标志物打下基础.
