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G蛋白耦联受体激酶4对肾脏胃泌素受体的调节及其在高血压发生中的作用
目的 研究G蛋白耦联受体激酶4(GRK4)对肾脏胃泌素受体(CCKBR)的调节作用及对高血压发病的影响.方法 以WKY(Wistar-Kyoto)大鼠及自发性高血压大鼠(SHR)为研究对象,采用大鼠单肾胃泌素灌注模型,分析胃泌素诱导的尿钠排泄作用在二者的差异.分别利用免疫印迹法和免疫沉淀法检测不同表型大鼠肾脏CCKBR的蛋白表达和磷酸化的差异.比较用GRK4siRNA敲降WKY大鼠及SHR肾脏近曲小管(RPT)上皮细胞的GRK4后CCKBR磷酸化和CCKBR介导的Na+ -K+ -ATP酶活性抑制作用的变化;通过免疫共沉淀的方法分析GRK4和CCKBR结合在WKY大鼠和SHR RPT细胞上的差异.结果 胃泌素呈剂量依赖性地促进WKY大鼠肾脏的尿钠排泄,这一作用在SHR丧失.与WKY大鼠相比,SHR肾脏CCKBR磷酸化水平升高(WKY大鼠组0.85±0.14比SHR组1.11±0.16,P<0.05).胃泌素(10-9 mol/L,15min)激活WKY大鼠RPT细胞CCKBR后,Na+ -K+ -ATP酶活性显著下降,而这一作用在SHR RPT细胞上丧失;利用siRNA 降低SHR RPT 细胞上GRK4表达后,胃泌素可以明显抑制Na+ -K+ -ATP酶活性.同时,GRK4siRNA降低了SHR RPT细胞CCKBR磷酸化水平(对照组1.19±0.14比干扰组0.85±0.13,P<0.01).免疫共沉淀发现GRK4和CCKBR的结合在SHRRPT细胞上增加(WKY大鼠RPT细胞0.35±0.12比SHR RPT细胞0.57±0.15,P<0.05).结论 GRK4对CCKBR磷酸化和功能具有调节作用,此作用影响了水钠排泄.
关键词： 胃泌素受体 G蛋白耦联受体激酶4 肾脏 高血压
