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转化生长因子β1/Smads表达在高盐饮食致Wistar大鼠心肌纤维化中的作用及替米沙坦干预
目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)/Smads表达在高盐(8％ NaCl)诱导Wistar大鼠左心室心肌纤维化中的作用及替米沙坦的干预效应.方法 雄性Wistar大鼠49只随机分为对照组(n=13,饲0.5％ NaCl),模型组(n=24,饲8％ NaCl),干预组(n=12,饲8％NaCl+替米沙坦2 mg/kg灌胃),喂养24周.每两周测一次尾动脉压.Masson染色观察左心室心肌纤维化程度.运用实时荧光定量聚合酶链反应技术检测左心室TGF-β1、Smad2、Smad3及Smad7的mRNA表达,同时采用免疫印迹法检测左心室α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、TGF-β1、磷酸化Smad2/3 (P-smad2/3)、Smad7蛋白的表达.结果 与对照组比较,模型组血压升高(P＜0.05),左心室心肌间质、心肌内血管周围及血管壁胶原容积分数增大,α-SMA蛋白的表达水平升高(P＜0.05)；TGF-β1、Smad2、Smad3的mRNA与蛋白表达水平升高(均P＜0.05),而Smad7的mRNA与蛋白的表达水平降低(均P＜0.05).与模型组比较,干预组血压降低(P＜0.05),左心室心肌间质、心肌内血管周围及血管壁胶原容积分数减少[(7.94±0.93)％比(17.38±1.37)％;(17.88±5.97)％比(52.32±9.93)％,(21.26±6.83)％比(61.31±9.25)％；均P＜0.05],α-SMA蛋白表达水平下调[(0.146±0.012)比(0.206±0.018),P＜0.05]；TGF-β1的蛋白表达水平下调[(0.035±0.005)比(0.084±0.010),P＜0.05],Smad2、Smad3的mRNA表达量降低[Smad2(146.8±21.7)比(304.2±34.0)；Smad3(139.2±15.1)比(354.1±52.4),均P＜0.05],而Smad7的mRNA与蛋白表达水平均上调[分别(171.6±13.9)比(43.7±1.7)；(0.607±0.115)比(0.298±0.045),均P＜0.05].结论 长期高盐饮食可诱导Wistar大鼠血压升高及心肌纤维化,其机制与TGF-β1/Smads表达异常相关；替米沙坦抗高血压及左心室纤维化的作用可能部分是通过阻断血管紧张素Ⅱ1型受体影响TGF-β1/Smads表达实现的.
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高血压家族史与高盐对人脐动脉平滑肌细胞转化生长因子β1/Smads及钙离子调控相关基因表达的析因分析
目的 研究高血压家族史与高盐对人脐动脉平滑肌细胞(hUASMC)转化生长因子β1(TGF-β1)/Smads及钙离子调控相关基因表达的效应分析.方法 取高血压阴性家族史(FH)和阳性家族史(FH+)胎儿脐带各7例,按照析因设计采用组织块贴壁法培养hUASMC:培养基Na-终浓度为139 mmol/L(FH-正常盐组和FH+正常盐组)和164 mmol/L(FH高盐组和FH+高盐组),用平滑肌细胞特异性a肌动蛋白进行免疫细胞化学方法鉴定;实时逆转录聚合酶链反应检测4组hUASMC TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7、细胞膜钠泵-α1、亚型(α1-subunit)、α2-subunit、α3-subunit、细胞膜钙泵亚型1(PMCA1)、PMCA4、瞬时受体电位通道C亚族(TRPC) TRPC1、TRPC3、TRPC6 mRNA表达;采用析因分析高血压家族史与高盐在TGF β1/Smads及钙离子调控相关基因表达中的效应.结果 高血压家族史和高盐对TGF-β1/Smads、α3-subunit、PMCA4、TRPC1、TRPC6 mRNA表达无交互效应(均P＞0.05),主效应分析显示高血压家族史增加TGF-β1、α3-subunit、TRPC6的表达(均P＜0.05),减少Smad7的表达(均P＜0.05),而高盐增加Smad3、TRPC1的表达(均P＜0.05),减少PMCA4、Smad7的表达(均P＜0.05).高血压家族史和高盐对α1-subunit、α2-subunit、PMCA1、TRPC3 mRNA表达有交互效应(均P＜0.05).高血压家族史为阳性时,高盐组较正常盐组TRPC3表达增加(P＜0.05),α1-subunit、α2-subunit、PMCA1表达减少(P＜0.05);高血压家族史为阴性时,高盐组较正常盐组TRPC3表达增加(P＜0.05),对α1-subunit、α2-subunit、PMCA1表达无影响(均P＞0.05);此外,在高盐水平下,高血压家族史阳性组较阴性组α1-subunit、TRPC3表达增加(P＜0.05),PMCA1表达减少(P＜o.05),在正常盐水平下,高血压家族史阳性组较阴性组α1-subunit、α2-subunit、PMCA1表达增加(P＜0.05),对TRPC3表达无影响(均P＞0.05).结论 家族史影响α3-subunit、TRPC6基因表达,而高盐影响PMCA4、TRPC1基因表达,高盐和家族史共同参与调节TGF-β1/Smads、α1-subunit、α2-subunit、PMCA1、TRPC3基因表达.
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AAV9介导的CTRP9过表达对糖尿病大鼠心肌纤维化的抑制作用
目的:探讨AAV9介导的CTRP9过表达对糖尿病大鼠心肌纤维化的作用及其机制.方法:45只6周龄健康SD大鼠分为对照组、GFP组和CTRP9组,每组15只.GFP组和CTRP9组腹腔注射链脲佐菌素(STZ)造模,对照组腹腔注射生理盐水;2周后,GFP组和CTRP9组分别经尾静脉缓慢注射携带GFP和CTRP9基因的AAV9,对照组同法给予生理盐水.转染12周后检测血糖及血清CTRP9水平,进行心肌Masson染色并计算胶原容积分数(CVF)以评价大鼠心肌纤维化程度,应用RT-PCR和Western blot分别检测3组大鼠心肌TGF-β1/Smads通路中各因子mRNA和蛋白水平.结果:转染12周后,与GFP组相比,CTRP9组大鼠血清CTRP9上升,血糖降低,CVF也降低(P<0.05);同时TGF-β1、Smad2和Smad3 mRNA表达水平降低,Smad7 mRNA表达水平升高(P<0.05),α-SMA、TGF-β1和p-Smad2/3蛋白表达水平降低,Smad7蛋白表达升高(P<0.05).结论:AAV9介导的CTRP9过表达可能通过调节TGF-β1/Smads信号通路来抑制糖尿病大鼠的心肌纤维化.
