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红细胞生成素对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮-间充质细胞转化的抑制作用及其与VEGF和TSP-1表达变化的关系
目的 探讨红细胞生成素(EPO)对单侧输尿管梗阻(UUO)模型大鼠肾小管上皮-间充质细胞转化的作用,以及这种作用与肾组织血管内皮细胞生长因子(VEGF)和血管形成抑制因子(TSP-1)表达变化的关系.方法 将60只雄性Wistar大鼠分为假手术组(n=20)、UUO对照组(n=20)及EPO治疗组(n=20),分别于手术后第3、7、14、21天处死动物留取肾组织标本.应用免疫组化方法和Western blot方法测定肾组织中α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E钙黏蛋白(E-cadherin)、VEGF和TSP-1的表达程度.结果 手术后第3、7天EPO治疗组较UUO对照组α-SMA表达明显减少(P<0.05),E-cadherin表达明显增加(P<0.05).术后第3、7、14天,EPO治疗组TSP-1表达明显低于UUO对照组(P<0.05),而VEGF表达明显高于UUO对照组(P<0.05).结论 EPO具有抑制UUO模型大鼠早期肾小管上皮-间充质细胞转化作用,该作用可能与EPO下调肾组织TSP-1表达,上调VEGF表达有关.
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MCP-1诱导的肾小管上皮-间充质细胞转化与整合素连接激酶表达变化的关系
目的 探讨单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)诱导体外培养的肾小管上皮细胞转分化的作用及其与细胞整合素连接激酶(ILK)表达变化的关系.方法 体外培养的HKC,以未处理的HKC为阴性对照,以8ng/ml TGF-β1处理的HKC为阳性对照,以不同浓度的MCP-1(0.1、1.0、10、100 ng/ml)处理细胞,或以同一浓度的MCP-1(1 ng/ml)在不同时间点(0h、12h、24h、36h、48h、72h)处理细胞.用半定量RT-PCR方法测定各组HKC细胞α-SMA mRNA的表达,Western blot方法测定各组HKC细胞α-SMA及ILK表达.在上述实验基础上进一步观察MEK抑制剂(PD98059,10μmol/L),p38 MAPK抑制剂(SB203580,5μmol/L)和ROCK抑制剂(Y27632,500μmol/L)对HKC细胞ILK表达的影响.结果 MCP-1(0.1、1.0ng/ml)作用后HKC细胞α-SMA mRNA和α-SMA、ILK蛋白表达显著高于阴性对照组(P<0.01),但低于阳性对照组(P<0.01);其中以1.0ng/ml MCP-1组作用后α-SMA mRNA和α-SMA、ILK蛋白表达水平增高更为显著(P<0.001).1.0ng/ml MCP-1作用后细胞α-SMA mR-NA和α-SMA、ILK蛋白表达在0～48h内逐渐增加,48h达高峰(P<0.01),72h时呈下降趋势.分别加入阻断剂PD98059、SB203580和Y27632后,HKC细胞ILK蛋白表达水平与MCP-1单独作用无显著性差异(P>0.05).结论 MCP-1可诱导肾小管上皮细胞转分化并呈时间浓度依赖性,该作用可能与MCP-1上调ILK的表达有关;本研究未发现MCP-1上调ILK的信号传导途径与MEK1、p38 MAPK、ROCK途径有关.
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褐藻多糖硫酸酯抑制大鼠肾间质纤维化的实验研究
目的 观察褐藻多糖硫酸酯(FPS)对慢性肾衰竭大鼠肾间质纤维化及肾小管上皮-间充质细胞转化(EMT)的作用,并探讨该作用与肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、血小板反应蛋白1(TSP-1)和血管内皮生长因子(VEGF)表达变化的关系.方法 将6周龄Wistar雄性大鼠随机分为3组,即正常对照组(n=15),进食普通饲料;CRF模型组(n=24),进食含0.75%腺嘌呤的饲料;CRF+FPS组(n=24),进食含0.75%腺嘌呤饲料的同时,每天给予FPS 200mg/kg灌胃.分别于第2、4、6周末处死大鼠,留取肾组织.采用免疫组化方法检测肾组织肌动蛋白α(α-SMA)的表达,分别采用免疫组化方法和逆转录酶PCR法(RT-PCR)检测肾组织TGF-β1、MCP-1、TSP-1及VEGF的蛋白和mRNA表达情况.结果 第2、4、6周时CRF+FPS组大鼠肾组织α-SMA蛋白表达均明显低于同期CRF模型组(P＜0.05).CRF+FPS组大鼠肾组织第2、4周时TGF-β1、MCP-1、TSP-1表达明显低于同期CRF模型组(P＜0.05),而第2周时TGF-β1、MCP-1、TSP-1的mRNA表达明显低于同期CRF模型组(P＜0.05),第4周时MCP-1的mRNA表达明显低于同期CRF模型组(P＜0.05).CRF+FPS组第2、4周时肾组织VEGF蛋白和mRNA表达明显高于同期CRF模型组(P＜0.05).结论 FPS对慢性肾衰竭大鼠肾小管上皮-间充质细胞转化具有抑制作用,该作用与肾组织TGF-β1、MCP-1及TSP-1的表达下调和VEGF表达上调有关,这可能部分解释FPS的肾保护作用机制.
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肾小管上皮-间充质细胞转化过程中细胞迁移率的变化
目的 了解肾小管上皮-间充质细胞转化(EMT)过程中肾小管上皮细胞迁移能力的动态变化及对细胞周期的影响.方法 通过体外培养大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E),转化生长因子(TGF)-β1(5μg/L)诱导肾小管上皮细胞向间充质细胞转化,利用Transwell小室法以及采用流式细胞术分别观察EMT过程中细胞迁移能力的动态变化规律和细胞周期变化.结果 1.TGF-β1成功诱导EMT:TGF-β1(5μg/L)干预后,NRK-52E细胞发生形态学改变,表现为细胞排列松散,部分细胞胞体伸长,呈梭形改变；Western blot发现干预后的NRK-52E细胞上皮标志物E-cadherin表达明显下调(P＜0.05),间质细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达增强(P＜0.05),且两者均呈时间依赖性变化.2.TGF-β1体外诱导大鼠肾小管上皮细胞EMT过程中,TGF-β1干预后12 h细胞迁移能力明显增强,且随着时间的推移细胞迁移能力增强更为显著(与空白对照组比较,P＜0.01).3.EMT过程中,细胞周期S期的比例随时间变化并未发生明显改变(与空白对照组比较,P＞0.05).结论 TGF-β1体外诱导NRK-52E发生EMT过程中其细胞迁移能力不断增强,而细胞周期并未发生明显改变.
