首页 > 文献资料
-
人骨髓间充质干细胞靶向纳米基因载体制备及体外细胞磁共振成像
目的 探讨靶向纳米基因载体单链神经节苷脂抗体-聚乙二醇-聚乙烯亚胺-超顺磁性氧化铁(scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION)转染人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)的可行性、效率及体外细胞MR显像能力.方法 合成scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION后,采用凝胶阻滞实验评估其复合外源性基因的能力;动态光散射法测量scAbGD2-PEG-g-PEI-SPI-ON/pDNA纳米复合物的粒径大小及表面电位;体外细胞毒性实验检测其对hBMSCs的细胞毒性.采用流式细胞仪检测scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION靶向转染hBMSCs的效率,并设置PEG-g-PEI-SPION组、cAbGD2-PEG-g-PEI-SPION组、抗体竞争抑制(scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION+ free AbGD2)组和同型抗体(scAbIgG2 a-PEG-g-PEI-SPION)组,通过激光共聚焦显微镜及普鲁士蓝染色观察hBMSCs对纳米复合物的摄入.通过体外细胞MR扫描验证scAbGD2-PEG-g PEI-SPI-ON的MR成像功能.结果 scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION细胞毒性小,复合外源性基因后能够形成稳定的纳米复合物,粒径80～100 nm.在相同的N/P比值下,scAbGD2-PEG-g-PEI-SPION组的转染率明显高于其他组(P＜0.001).N/P=20时,靶向组具有高转染率[(59.60±4.50)％].同时,scAbGD2-PEG-g PEI-SPION中的SPION可有效标记hBM-SCs,在MR T2/T2*加权图像上呈低信号.结论 scAbGD2-PEG-g-PEI SPION是一种MRI可视的、可有效转染hBM-SCs的靶向纳米基因载体.
-
表皮生长因子介导的基因转移载体蛋白的制备
目的制备一种表皮生长因子(EGF)受体介导的、完全非病毒基因转移载体.方法通过PCR分别扩增出人类组蛋白第一功能域(H1)基因的编码序列和EGF的受体结合结构域(C环)基因的编码序列:将它们以EcoR I位点连接后作为模板,PCR扩增出融合蛋白HIEGFc的基因.在对此融合基因进行克隆、测序之后,构建原核表达载体PLYI-H1EGFc,并转化大肠杆菌DH5α进行诱导表达.将表达出的融合蛋白利用SDS-PAGE电泳凝胶切割法进行纯化.结果表达出的目的蛋白与设计的融合蛋白分子量相符;经SDS-PAGE扫描,纯化后的目的蛋白纯度达94.02%.结论表达并纯化了融合蛋白HIEGFc.
