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骨髓细胞胸腺内注射对大鼠小肠移植急性排斥反应的影响
目的了解异基因骨髓注射在大鼠小肠移植中的免疫耐受作用和意义.方法选用近交系大鼠F344/N和Wistar/A进行全小肠异位移植,试验组在行异基因移植前7 d取供体骨髓细胞(BMC)行受体胸腺内注入,对照单纯同基因及异基因大鼠移植模型了解异基因供体骨髓在受体胸腺内注射能否减少移植后急性排斥反应的发生.结果异基因大鼠异位全小肠移植术后第3、5、7天可出现典型的轻、中、重度排斥反应,而同基因组和试验组未出现排斥反应.异基因移植组术后3 d血清可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平明显高于其他组(P＜0.01),且随排斥反应的加重,进一步增高.而异基因骨髓胸腺内注射组血清sIL-2R及TNF-α水平仅在第3、5天轻度升高,并呈下降趋势,与同基因移植组无显著性差异(P＞0.05).结论 移植术前7 d异基因供体骨髓在受体胸腺内注射能明显减少小肠移植后急性排斥反应的发生;血清sIL-2R和TNF-α检测有可能作为早期诊断小肠移植急性排斥反应的敏感免疫指标.
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高频超声引导注射实现主要组织相容性(抗原)合物基因大鼠胸腺转移
目的 探索高频超声引导注射技术实现主要组织相容性(抗原)复合物(MHC)基因大鼠胸腺转移的新方法.方法 应用分子生物学技术获得供体Balb/c小鼠异种MHC-I类抗原(H-2Kd)基因,并构建pCI-neo- H-2Kd质粒.对20只成年SD大鼠应用高分辨力超声影像系统获得胸腺标准切面超声声像图,同时使用Vevo轨道系统和超声引导注射针装置,在超声引导下将质粒注人大鼠胸腺内.应用流式细胞仪检测H-2Kd基因在转染大鼠胸腺细胞上的表达.结果 超声引导下注射质粒后全部大鼠存活.H-2Kd基因成功转入受体大鼠胸腺,流式细胞仪检测H-2Kd在大鼠胸腺内的表达阳性率为60.73％(56.04％～62.49％).结论 高频超声引导注射技术定位准确,方法简便,对组织损伤轻微,注射成功率较高,可代替手术胸腺内注射法诱导免疫耐受.
关键词： 超声检查 胸腺内注射 基因转移 主要组织相容性复合体 -
异基因供体骨髓细胞胸腺内注射对肠移植大鼠的影响
目的:观察异基因骨髓注射在大鼠小肠移植中的免疫耐受作用.方法:实验于2006-09/2007-03在平凉市第二人民医院及兰州大学第二医院完成.①将大鼠分为空白对照组(Wistar)、同基因移植组(FK344/N)、异基因移植组(Wistar)、骨髓胸腺内注射组(Wistar,),空白对照组18只,其余每组18只受体大鼠,供体为18只FK344/N大鼠.除空白对照组外,各组选用供受体大鼠进行全小肠异位移植,骨髓胸腺内注射组在行异基因小肠移植前7 d取供体骨髓细胞行受体胸腺内注入,同基因移植组、异基因移植组大鼠不注射异基因骨髓细胞,只进行全小肠移植.②每组大鼠分别于术后3,5,7 d观察排斥反应,于各时间点每次处死6只,检测血清可溶性白细胞介素2受体表达,并取出移植肠进行苏木精一伊红染色后观察组织学变化.结果:纳入受体大鼠54只及空白对照组大鼠18只均进入结果分析.①排斥反应:异基因移植组大鼠异位全小肠移植术后3,5,7 d可出现典型的轻、中、重度排斥反应,而同基因组和骨髓胸腺内注射组中未出现排斥反应.②可溶性白细胞介素2受体水平:术后3 d,同基因移植组、骨髓胸腺内注射组可溶性白细胞介素2受体表达水平高于空白对照组(P＜0.01),而第5,7天与空白对照组差异不显著(P＞0.05),异基因移植组受体大鼠各时间点血清可溶性白细胞介素2受体表达均高于同基因移植组(P＜0.01).结论:移植术前7 d异基因供体骨髓在受体胸腺内注射能显著减少小肠移植后急性排斥反应的发生.血清可溶性白细胞介素2受体的检测可能作为小肠移植急性排斥反应的早期诊断敏感的免疫指标.
关键词： 胸腺内注射 骨髓细胞 小肠移植 免疫耐受 可溶性白细胞介素2受体 -
胸腺内注射异基因骨髓细胞对大鼠异位心脏移植影响的研究
本文采用同种大鼠颈部异位心脏移植模型研究受体胸腺内注射异基因骨髓细胞对移植心脏存活时间的影响及免疫学功能变化。实验分4组。对照组(Control组)、环磷酰胺组(CP组)、单纯胸腺内注射异基因骨髓细胞组(IT组)、胸腺内注射异基因骨髓细胞辅以短期环磷酰胺组(IT+CP组)。结果显示：移植心脏存活时间长的是IT+CP组为68．3±13．4 d，CP组移植心脏存活时间为18．3±2．4 d，两组间移植心脏存活时间差异显著(P<0．01)，而二者分别与Control组比较差异显著(P<0．01，P<0．05)，Control组、IT组移植心脏存活时间较短，分别为8．5±1．4 d、7．8±1．2 d，受体接受实验处理因素1个月后免疫功能测定表明：各组大鼠脾细胞的淋巴细胞转化试验无明显差异(P>0．05)。IT+CP组大鼠脾细胞对供体脾细胞的单向混合淋巴细胞培养有明显抑制作用(P<0．01)，对供体靶细胞的细胞介导的细胞毒试验呈明显抑制作用(P<0．01)，说明受体对供体产生特异性免疫无反应性，即免疫耐受。
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胸腺内注射异基因抗原诱导免疫耐受的实验研究①
目的:探讨胸腺内注射异基因抗原在建立特异性移植免疫耐受中的作用.方法:自供体C57BL/6小鼠脾细胞中提取的H-2抗原,注入受体Balb/c小鼠胸腺内,1 w后移植供体C57BL/6小鼠皮肤及无关供体C3H小鼠皮肤.观察皮肤存活时间,同时做单向混合淋巴细胞培养(mixed lymphocyte culture,MLC)、细胞介导的淋巴细胞毒(cell mediate lymphocytotoxic,CML)、迟发型超敏反应(delayed tape hypersensitivity,DTH)的检测. 结果:实验组移植皮肤平均存活时间(median survival times,MST)＞70 d,对照组MST为12.6±1.69 d,移植C3H皮肤的无关供体组MST为13.4±1.42 d.耐受小鼠淋巴细胞对供体淋巴细胞刺激的反应性减弱,而对无关供体淋巴细胞的刺激呈正常反应,耐受小鼠对供体靶细胞的CML作用、DTH反应特异性降低.显示出胸腺内注射抗原诱导耐受的特异性.结论:胸腺注射异基因H-2抗原可以诱导特异性皮肤移植耐受.
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胸腺内注射同种异体抗原抑制坐骨神经移植排斥反应的免疫学研究
目的:探讨胸腺内注射同种异体MHC抗原对同种异体坐骨神经移植的效应.方法:以C57BL/6(H-2b)为供体,BALB/c(H-2d)为受体,将受体鼠分为4组:Ⅰ:自体移植组、Ⅱ:异体移植组、Ⅲ:异体移植加用免疫抑制剂组、Ⅳ:胸腺内注射组:坐骨神经移植前2周将供体MHC抗原提取物注射到受体鼠的胸腺内,移植后3周进行IL-2R、TNF-α、MLR、细胞凋亡等免疫学的检测.结果:胸腺内注射组小鼠的各项免疫指标与异体移植组相比具有统计学意义.结论:胸腺内注射同种异体抗原对抑制同种异体神经移植排斥反应具有一定作用.
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胸腺内注射供体BMSCs对同种异体腹部皮瓣移植排斥的影响
目的:将供体骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)胸腺内注射(intrathymic injection,IT)至受体胸腺,探讨其对同种异体腹部皮瓣移植排斥的影响及机制.方法:全骨髓贴壁培养法培养并纯化BN大鼠BMSCs,流式细胞术对其表型进行鉴定.受体Lewis鼠随机分为A组(空白对照组)、B组BMSCs组)、C组(60Coγ射线4Gy全身照射组)、D组(全身照射+BMSCs组),每组6只.各组大鼠第0天进行同种异体腹部皮瓣移植,A组移植前14天IT PBS,B组移植前14天IT供体BMSCs,C组移植前15天给予60Coγ射线4Gy全身照射,移植前14天IT PBS,D组除移植前15天4Gy全身照射外,移植前14天IT供体BMSCs.大体观察移植皮瓣存活情况并绘制生存曲线,排斥终点流式检测脾细胞调节性T细胞(Treg)比例变化,体外混合淋巴细胞反应检测受体脾淋巴细胞对供体抗原反应性变化.结果:全骨髓贴壁培养法能够很好培养出BMSCs,其P3代流式细胞术表型鉴定结果为CD11b/c、CD45阴性,CD29、CD90阳性.B组的移植皮瓣存活时间与A组相比无明显差异(P＞0.05),而D组的移植皮瓣平均存活时间较C组延长3.4天,差异具有统计学意义(P＜0.01),脾细胞Treg比例显著增高(P＜0.01),脾淋巴细胞对供体抗原反应性显著降低(P＜0.05).结论:IT供体BMSCs联合60Coγ射线4Gy全身照射通过上调受体脾细胞Treg比例能有效降低受体脾淋巴细胞对供体抗原的反应性,显著延长同种异体腹部皮瓣移植物存活时间.
关键词： 胸腺内注射 骨髓间充质干细胞 同种异体腹部皮瓣移植 免疫耐受 -
胸腺内注射供体MHC抗原对同种异体肢体移植的影响
目的 探讨胸腺内注射异基因抗原对同种异体肢体移植存活的影响.方法 Wistar大鼠为供体,SD大鼠为受体.将SD大鼠随机分成3组,A组;自体肢体移植组；B组:异体肢体移植组；C组:胸腺内注射组.术后观察肢体的存活时间,并在术后7d进行移植肢体皮肤苏木精-伊红染色检查及血清IFN-γ细胞因子的检测.结果 C组肢体存活时间长于B组,差异具有统计学意义(P＜0.05).组织学检查发现,C组出现的炎症排斥反应以及组织的改变明显较B组轻,与A组相接近.IFN-γ的检测,C组低于B组,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 胸腺内注射异基因抗原可以对异体肢体移植产生特异性免疫耐受作用.
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胸腺内抗原注射抑制小鼠神经移植排斥反应
目的探讨胸腺内注射异基因抗原在同种异基因神经移植免疫耐受中的作用.方法自供体鼠C57BL/6(H-2b)的脾细胞中提取MHC(H-2b)抗原,注入受体鼠Balb/c(H-2d)胸腺内,两周后移植供体坐骨神经.共设4组:胸腺内注射组(Ⅰ组)、自体移植组(Ⅱ组)、异体移植组(Ⅲ组)和异体移植加用免疫抑制剂组(Ⅳ组).移植后3周做单向混合淋巴细胞培养(MLC),诱导迟发型超敏反应(DTH).结果Ⅰ组小鼠淋巴细胞对供体淋巴细胞刺激的反应性减弱,DTH反应性降低.结论胸腺内注射异基因H-2抗原可以诱导特异性神经移植耐受.
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诱导免疫耐受抑制小鼠异体坐骨神经移植排斥反应的实验研究
目的探讨胸腺内注射异基因抗原对异体鼠坐骨神经移植存活的作用.方法自供体C57BL/6小鼠脾细胞中提取MHC抗原,注入受体Balb/c小鼠胸腺内,2周后移植供体C57BL/6小鼠坐骨神经.同时另设4组对照组,即自体神经移植组,异体神经移植组,冷冻后异体神经移植组,应用免疫抑制剂异体神经移植组;3周后进行神经电生理检查、组织学的检测.结果实验组优于异体神经移植组及冷冻后异体神经移植组;接近于自体神经移植组及应用免疫抑制剂异体神经移植组.结论胸腺内注射供体MHC抗原可诱导特异性坐骨神经移植耐受.
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胸腺内注射异基因脾细胞诱导移植心免疫耐受的实验研究
目的通过大鼠同种异体心脏异位移植,探讨胸腺内注射异基因脾细胞对移植心的影响.方法用供体脾细胞(SC)在心脏移植前21d预处理受体鼠,术后1周每日腹腔注射环孢素A(CsA)10mg/kg.检测移植心存活时间、混合淋巴细胞反应(MLR)及细胞介导的细胞毒试验(CML).结果胸腺注射脾细胞抗原联合短期应用CsA组的移植心平均存活时间较其他组显著延长(P＜0.05),移植心耐受的受体鼠中MLR增殖活跃,产生免疫耐受的受体鼠的T细胞对供体鼠的靶细胞无明显的细胞毒作用.结论胸腺内注射供体脾细胞抗原预处理受体同时联合短期应用CsA,可诱导产生移植心脏的免疫耐受,且诱导移植耐受的抗原量以2.5×107脾细胞为好.
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骨髓细胞胸腺内注射对移植肠CD4、 CD8和CD25的影响
目的 探讨异基因骨髓注射在大鼠小肠移植中的免疫耐受作用和意义.方法 选用近交系大鼠F344/N和Wistar/A进行全小肠异位移植,实验组在异基因移植前7d取供体BMC行受体胸腺内注入,对照单纯同基因及异基因大鼠移植模型了解异基因供体骨髓在受体胸腺内注射能否减少移植后急性排斥反应的发生,观察其生存时间、病理结果及CD4、CD8、CD25的变化.结果 (1)A组移植大鼠平均存活时间为(7.33±1.03) d;B组为(43.76 ±4.57) d;C组为(55.28±7.48)d.(2)异基因大鼠异位全小肠移植术后3、7、15 d可出现典型的轻、中、重度排斥反应,而同基因组和实验组中未出现排斥反应.(3)异基因移植组术后CD4、CD25+,高于其他组(P＜0.05).而CD8的变化差异无统计学意义(P＞0.05).结论 移植术前7d异基因供体骨髓在受体胸腺内注射能显著减少小肠移植后急性排斥反应的发生,并可以抑制移植肠CD4、CD25细胞的表达.
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胸腺内注射异基因骨髓细胞诱导特异性免疫耐受的实验研究
目的:探索通过胸腺内注射异基因骨髓细胞加腹腔注射环磷酰胺,以小鼠皮肤移植为模型,诱导移植免疫耐受,为免疫耐受提供理论和实验依据.方法:提取供体B6小鼠(H-2b)骨髓细胞,注入受体BALB/C(H-2d)小鼠胸腺内,48 h后腹腔注射200 mg/kg的环磷酰胺,2周后移植供体小鼠(H-2b)和无关供体C3H(H-2k)小鼠皮肤.共设空白对照组、CP对照组、BM对照组、实验组、第三方供体组5个组.观察皮肤存活时间;皮肤移植2周后对受体小鼠作单向混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction,MLR)、脾细胞增值反应及迟发型超敏反应(delayed type hypersensitivity,DTH)耐受状态的检测.结果:受体小鼠获得了对供体小鼠的特异性皮肤移植耐受,实验组移植皮肤平均存活时间(MST)为(22.00±2.51)d,对照组MST为(8.75±1.04)d,耐受的受体小鼠对第三供体C3H小鼠的移植皮肤仍正常排斥,MST为(10.25±1.91)d.单向混合淋巴细胞反应和迟发型超敏反应证明耐受的BALB/C小鼠对B6小鼠的脾细胞的反应性特异性降低,而仍保持对第三方供体C3H小鼠的免疫反应.耐受的受体小鼠脾细胞对丝裂原(ConA)的增殖反应在正常范围.结论:使用胸腺内注射供体异基因骨髓细胞,结合腹腔应用环磷酰胺的方法,可在成年动物诱导出对供体移植物的特异性免疫耐受,无非特异性免疫抑制.小鼠皮肤移植模型是观察免疫耐受状态的可靠动物模型.
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心脏移植免疫耐受研究进展
免疫排斥反应是影响心脏移植术后存活率的重要因素,应用免疫抑制剂具有不同的毒副作用,诱导免疫耐受是解决心脏移植术后排斥反应的佳手段.目前诱导免疫耐受的方法有:胸腺内注射、供者特异性输血、主要组织相容性复合物作用、阻断T细胞活化协同刺激信号、调节性T细胞作用等.现就以上几方面的新进展进行综述.
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两种诱导免疫耐受的方法在大鼠→兔异种心脏移植模型中的尝试
0 引言异种器官移植的主要障碍就是受者对异种移植物的超急性排斥. 同种移植免疫耐受的诱导成功,使得诱导对异种供体的永久性耐受变得十分吸引人. 我们对建立造血嵌合体及供者特异性抗原受者胸腺内注射等诱导免疫耐受的方法在大鼠→兔异种心脏移植模型中进行了尝试.
关键词： 异种移植 超急性排斥(HAR) 嵌合体 胸腺内注射
