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以慢病毒为载体介导aggrecanase-2 shRNA转染类风湿关节炎患者软骨细胞对aggrecanase-2 mRNA表达的干扰作用
目的 研究以慢病毒为载体介导aggrecanase-2 shRNA转染类风湿关节炎(RA)患者软骨细胞对aggrecanase-2 mRNA表达的干扰作用.方法 回顾性分析2015 ～2016年确诊为活动期或者是中晚期的RA患者30例,并在关节置换术中切除患者膝关节的软骨块,冲洗软骨块,并使用0.25％胰酶和0.20％的Ⅱ型胶原酶模拟体温在36.8℃C的恒温水浴箱内让其自行消化25～35 min,离心,取其沉淀并加入一定量的10.00％胎牛血清的DMEM培养基内培养,终取其培养的第2～3代软骨组织.将设计好的慢病毒载体介导的aggrecanase-2 shRNA转染进RA患者的软骨细胞中.按照慢病毒剂量,将细胞分为200 μl(A组)、100μl(B组)、50μl(C组).其中,A组分为空白对照组、阴性对照组、aggrecanase-2 shRNA1组(shRNA1组)、aggrecanase-2 shRNA2组(shRNA2组)、aggrecanase-2 shRNA3组(shRNA3组)、aggrecanase-2 shRNA4组(shRNA4组).各孔加入促转染剂约3～7 κm/ml,其中阴性对照为含杂乱序列的病毒液,空白对照组则用培养基来代替病毒.利用PCR技术定量检测转染之后由各种转染复数转染的aggrecanase-2和ag-grecanase mRNA在各种的时间段内的表达系数.结果 加入慢病毒之后的A、B、C三组RA患者的感染复数分别为100、50、25,转染效率分别为91.21％、59.98％、31.09％.以慢病毒为载体介导aggrecanase-2 shRNA转染的RA患者的软骨细胞的aggrecanase-2 mRNA的表达水平明显有所降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).随着时间的增加,各组aggrecan蛋白表达水平出现明显的变化,其中shRNA4组升高为明显,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 以慢病毒为载体介导的aggrecanase-2 shRNA转染的RA患者的软骨细胞中的aggrecanase-2 mRNA的表达受到明显的抑制,但是其对RA患者的软骨组织没有实质上和功能上的伤害;同时其还可以通过抑制aggrecanase-2 mRNA的表达来促进aggrecan蛋白的表达,从而起到保护软骨组织退化的作用.
