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用噬菌体抗体库分离NK细胞抑制受体特异性的ScFv片段
目的 探讨从噬菌体抗体库分离杀伤细胞抑制受体(KIRs)特异性ScFv(singlechain Fv)的可行性及其特征.方法 所用KIR为NKAT2,其可溶性形式为NKAT2-IgG1.噬菌体抗体库为Nissim等报道的半合成抗体库.抗体库经包被免疫管的NKAT2-IgG1 5次筛选后,可溶性ScFv由IPTG诱导细菌而获得,筛选效果由测定噬菌体的菌落形成单位及DNA酶切图谱分析.ELISA、聚丙烯酰胺凝胶电泳及免疫印迹分析ScFv特异性及免疫学特征,并进行DNA的序列测定.结果 5次筛选后,噬菌体得到200倍的富集,酶切图谱也显示某种构型噬菌体的富集.40个克隆的细菌上清经测试,37个显示与NKAT2有较强的反应.ScFv经聚丙烯酰胺凝胶电泳及免疫印迹显示相对分子质量为30×103,其DNA序列完全相同,重链CDR3区编码氨基酸为ESNLVTC,重链其它部分与DP35一致.结论 研究初步结果表明,用噬菌体抗体库可以快速、简便地产生用于KIR研究的较高特异性的试剂.
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自然杀伤细胞及其抑制受体在妊娠中的作用
自然杀伤细胞通过其表达的不同类型的受体选择性识别细胞表面的相应配体,提供自然杀伤细胞反应的自我调节信号.正常妊娠时,蜕膜自然杀伤细胞的杀伤细胞抑制受体介导的抑制作用占主导地位,表现为自然杀伤细胞失活,对半同种异体胎儿耐受;而在某些病理情况下,杀伤细胞抑制受体的效应机制发生障碍,可能导致妊娠丢失.