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ClpP免疫小鼠可抵抗TIGR4型肺炎链球菌的侵袭性感染
目的 原核表达肺炎链球菌毒力因子ClpP,探讨其作为肺炎链球菌候选蛋白疫苗的价值.方法 分离培养TIGR4型肺炎链球菌,获取其染色体DNA,采用基因体外重组的方法将完整的ClpP开放读码框架克隆到pET-32a原核表达载体内,经测序鉴定、原核表达及纯化,ClpP主动和阳性抗体血清被动免疫小鼠,TIGR4型肺炎链球菌攻击后,监测其生存时间.结果 获得了高表达的重组抗原蛋白,表达的抗原蛋白用Western blot鉴定,镍柱纯化并透析复性可得到纯度达90%以上的重组蛋白.主动和被动免疫BALB/c小鼠,与未免疫组相比,产生的保护性作用具有统计学意义.结论 ClpP蛋白免疫小鼠可抵抗肺炎链球菌侵袭性感染,ClpP蛋白可作为肺炎链球菌的候选蛋白疫苗.
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结核分枝杆菌Rv2461c基因的克隆、表达、纯化及其抗原性的初步检测
目的:探索结核分枝杆菌Rv2461c基因编码的elpP蛋白作为结核检测抗原的可行性.方法:克隆结核分枝杆菌clpP蛋白的编码基因Rv2461e,构建pET30a-Rv2461c重组质粒,并将其成功的转化到大肠杆菌JF1125克隆栽体中,测序鉴定结果正确.将pET30a-Rv2461c重组质粒转化到大肠杆茵BL21中,表达纯化目的蛋白进行质谱分析.制备clpP蛋白的多克隆抗体,通过亚细胞分离及Western检测分析蛋白的亚细胞定位,纯化的clpP蛋白通过间接ELISA实验进行抗原性的初步检测.结果:结核分枝杆茵clpP蛋白大量存在于细胞质中,少量存在于细胞壁和细胞膜中.重组抗原在检测肺结核病人中的检出率为38.3%(23/60),检测敏感性为38-3%,特异性为90%.结论:为后续深入研究clpP蛋白的生物功能、clpP作为诊断靶标、药靶候选蛋白的可行性提供了基础.
