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HIV-1 黑龙江省分离株CHNHLJ03009包膜克隆及分析
目的分析黑龙江省Ⅰ型人免疫缺陷病毒 (human immunodeficiency virus type 1, HIV-1)原代分离株包膜糖蛋白的变异性及表型特征.方法从一名HIV阳性但未发病的感染者外周血单个核细胞提取DNA,采用保守引物进行HIV包膜直接克隆,进行序列分析及系统树分析.构建了一株带该包膜蛋白的伪病毒并利用表达CXCR4和CCR5的靶细胞进行了感染实验,观察该病毒包膜利用辅助受体的表型特征.结果共获得2个有功能全长env克隆,分别命名为CHNHLJ03009c34 (GenBank 序列号为AY905493)和CHNHLJ03009c33.用全长env氨基酸序列与国内外分离株进行同源性比较分析发现,与分离株CHNHLJ03009c34的包膜同源性高的病毒为云南的HIV-1 B'亚型分离株RL42,同源性为91.52%.系统发育分析结果表明,该株为泰国B'亚型,与云南分离株RL42的遗传距离近.对包膜蛋白结构分析结果显示,分离株CHNHLJ03009c34包膜在抗原性和亲水性上与RL42没有明显差别.感染性检测结果显示该病毒只能感染U87.CD4.CCR5细胞, 不能感染U87.CD4.CXCR4细胞.结论本研究从黑龙江省一名HIV-1阳性者克隆到HIV-1 CHNHLJ03009病毒的包膜基因,该病毒属于B'亚型(泰国亚型),为R5亲嗜性毒株.该包膜基因克隆为首次报道的黑龙江分离株.
关键词： Ⅰ型人免疫缺陷病毒(HIV-1) 包膜 变异性 亚型 感染 -
一个细胞融合实验体系的建立及初步应用
目的 建立一个细胞融合实验体系,观察凝血酶(thrombin,Th)对I型人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus type I,HIV-1)包膜糖蛋白(envelope glycoproteins,Env)介导的细胞融合的影响.方法 采用携带HIV-1 JRFL株env基因的表达质粒pSV-Ⅲ-JRFL-dCT与携带HIV-1 tat基因的表达质粒pcTat共转染293T细胞,检测到细胞膜表面Env表达后,将pSV-Ⅲ-JRFL-dCT与pcTat分别按1∶2、2∶3、1∶1、2∶1、5∶1、10∶1共转染293T细胞,然后再与Magic 5A细胞进行融合实验,计数融合细胞数目并确定适宜的融合条件,建立稳定的细胞-细胞融合实验体系.在所建立融合体系基础上利用Th处理Env表达细胞,观察对融合作用的影响.结果 pSV-Ⅲ-JRFL-dCT与pcTat按1∶1、2∶1共转染293T细胞,可建立稳定的细胞-细胞融合实验体系.Th能够增强细胞融合,且融合细胞数随着Th浓度增高而逐渐增加.Th处理10 min与处理30 min比较,融合增强作用更加显著.结论 质粒pSV-Ⅲ-JRFL-dCT与pcTat按1∶1、2∶1共转染293T细胞,与Magic5A细胞进行融合实验可得到稳定的细胞-细胞融合实验体系,Th对HIV-1包膜介导的细胞融合有促进作用.
关键词： Ⅰ型人免疫缺陷病毒(HIV-1) 包膜糖蛋白 细胞融合 凝血酶
