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卡波济肉瘤相关疱疹病毒K12基因诱导裸鼠体内肿瘤的形成
目的证实卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)K12基因在体外可以转化小鼠成纤维细胞系NIH3T3细胞,体内可以诱导肿瘤的形成. 方法采用PCR法构建含KSHV K12基因的重组反转录病毒表达质粒,将该质粒转染NIH3T3细胞,嘌呤霉素筛选获得稳定细胞.采用软琼脂集落形成试验和裸鼠成瘤试验,分别证实K12基因体外转化细胞和体内致瘤特性.免疫组化(IHC)染色进一步评价转化细胞及其诱导的肿瘤组织中血管内皮细胞生长因子(VEGF)、Fas和FasL的表达水平. 结果K12基因转化的NIH3T3细胞在软琼脂中可以形成集落、在裸鼠体内可以形成肿瘤;转化的细胞及其诱导的肿瘤组织中可观察到VEGF、Fas和FasL的表达,其中,Fas和FasL的表达较高. 结论 KSHV K12基因具有体外转化细胞、体内诱导肿瘤形成的能力.
关键词： 卡波济肉瘤相关疱疹病毒 K12基因 转化 肿瘤 -
含绿色荧光蛋白基因与人疱疹病毒8型K12基因重组真核表达载体的构建
目的:构建含绿色荧光蛋白(GFP)基因与人疱疹病毒8型K12基因的重组真核表达载体.方法:将人疱疹病毒8型(HHV-8)K12基因插入到真核表达质粒pCR3.1的EcoRI和Xhol位点,构建重组质粒pCR-K12;PCR扩增GFP基因,将GFP基因插入到重组质粒pCR-K12中K12上游的KpnI和EcoRI位点中,获得重组表达质粒pCR-GFP-K12.结果:重组表达质粒pCR-GFP-K12的酶切鉴定符合预期结果,此重组质粒中的K12与GFP融合表达并受上游启动子pCMV控制.结论:重组表达质粒pCR-GFP-K12已构建成功,为研究K12的生物学活性及其作用机制打下基础.
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人疱疹病毒8型K12基因在大肠杆菌中的克隆和表达
目的:将人疱疹病毒8型(HHV-8)K12基因在大肠杆菌中进行融合表达.方法:设计一对PCR引物,在引物的5′端分别引入EcoRI和XhoI酶切位点,用此引物从质粒pCR-K12中扩增出HHV-8的K12基因,PCR产物经双酶切后按正确阅读框连接到原核表达载体pGEX-6p-1上相应酶切位点,并转化BL21感受态细胞.结果:重组菌经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后,菌体SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)显示有一个大小为33ku的融合表达蛋白产生.结论:初步表明K12基因在大肠杆菌中获得正确表达.
