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免疫相关性血细胞减少症患者外周血淋巴细胞线粒体DNA D-LOOP区多态性的研究
目的:研究免疫相关性血细胞减少症(IRP)患者外周血淋巴细胞线粒体DNA (mtDNA) D-LOOP区多态性的意义及其与免疫指标的相关性.方法:提取43例初治IRP患者外周血淋巴细胞mtDNA,对其D-LOOP区序列进行PCR扩增,通过正反向直接测序法对PCR扩增产物基因序列进行检测,将检测结果与人线粒体DNA文库记录的剑桥序列以及mtDB数据库的Polmorphic Sites子数据库的相关数据库进行对比.结果:43例IRP患者的外周血淋巴细胞mtDNA D-LOOP区中共有110个变异位点,其中62个为多态位点(SNP).48个为突变位点,其中14个位点为数据库中未提及的新突变位点.在110个变异位点中共发现516个碱基改变,主要的改变是410个碱基置换,常见的碱基置换为T/C(184/410)和A/G(113/410);110个变异位点中高频变异位点73和263,其变异率为43/43,位点311的变异率为32/43,位点310和16 224的变异率为27/43,16 519的变异率为25/43,位点489和16 362为24/43.对IRP患者外周血淋巴细胞mtDNA D-LOOP区多态性与患者骨髓单个核细胞的相关性统计发现,以年龄18岁为界的35例成年组中淋巴细胞mtDNA D-LOOP区多态性与患者骨髓单个核细胞的CD15 IgM、GLYCoA+细胞IgM、CD34+细胞IgG、CD34+细胞IgM存在显著相关性.结论:IRP患者外周血淋巴细胞的mtD-NA D-LOOP区存在高频突变,且在成年组(年龄≥18岁)中与骨髓单个核细胞膜结合自身抗体显著相关,这可能是免疫相关性血细胞减少症发病机制中的重要环节.
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巴龙霉素对携带线粒体DNA C1494T突变的细胞系生长的影响
目的用细胞学方法,分析线粒体DNA 12S rRNA基因中C1494T突变在氨基糖甙类抗生素聋发病机理中的作用.方法从携有线粒体DNA C1494T突变的母系遗传性氨基糖甙类抗生素性耳聋的中国大家系选择部分成员,另外从遗传背景相同的正常中国人群选择对照个体,分别建立淋巴细胞系;并通过细胞融合技术,将淋巴细胞系的线粒体分别融合到缺乏线粒体DNA的p0206细胞中,建立相应的转线粒体细胞系;家系成员与对照个体的淋巴细胞系和转线粒体细胞系,分别在不含/含有氨基糖甙类抗生素(巴龙霉素)的培养液中培养,以倍增时间(doublingtime,DT)作为细胞生长特性的评价标准,通过计算在正常和含有氨基糖甙类抗生素的培养液中倍增时间的比值,比较氨基糖甙类抗生素对细胞生长的影响.结果携有线粒体DNA C1494T突变家系成员较对照个体的淋巴细胞系的倍增时间比值平均增加了24%,但不同家系成员的细胞倍增时间比值的增加程度不同,自10%至50%不等;而当细胞核遗传背景相同后,家系成员较对照个体的转线粒体细胞系的倍增时间比值增长30%,并且来自不同表型的家系成员的细胞倍增时间比值基本相同.结论线粒体DNA C1494T突变可以造成细胞对氨基糖甙类抗生素的超敏性,但其效应要受到核基因的调控.
关键词： 巴龙霉素 聋 细胞倍增时间 线粒体DNA(mtDNA) -
药物性聋和非综合征性聋相关的线粒体DNA C1494T突变对细胞功能的影响
目的 通过细胞学.方法 ,分析药物性聋和非综合征性聋相关的线粒体DNA C1494T突变对细胞功能的影响.方法 将从携带C1494T突变的中国家系成员的淋巴细胞中的线粒体分别转移到线粒体DNA缺乏的ρ0206细胞中.分别形成融合细胞系,然后对耳聋相关的线粒体12S rRNA C1494T突变进行生化特性的研究.其中,来自2名听力正常者的6个融合细胞系,来自听力下降者的9个融合细胞系,均有线粒体DNA C1494T突变.结果 来自听力下降者的融合细胞系的线粒体DNA标记速率分别比对照组4名成员的12个融合细胞系下降了38%和43%,这一缺陷显然造成了携带C1494T突变的融合细胞(不论来自听力正常者还是来自听力下降者)的细胞总体呼吸率下降,或苹果酸/谷氨酸、琥珀酸/3-磷酸甘油及TMPD/抗坏血酸所始动的呼吸率下降.而且,和对照组的细胞系相比,有C1494T突变的听力正常者或听力下降者的融合细胞系在含有(或不含)高浓度巴龙霉素的DMEM培养液中.细胞倍增时间有非常显著的一致增加.结论 我们的试验结果首次以直接的生化学证据证明:线粒体12S rRNA的A位点是氨基糖甙类药物性聋的主要作用位点;而且细胞核背景在线粒体DNA 12S rRNAC1494T突变导致的非综合征性聋和氨基糖甙类耳毒性的发病中起着关键性的作用.
关键词： 聋 细胞功能 线粒体DNA(mtDNA) -
胃癌线粒体DNA D-loop区碱基突变的检测分析
目的 研究胃癌患者的癌组织线粒体DNA (mtDNA)D-loop区碱基突变情况,以探讨mtDNA D-loop区碱基突变与胃癌发生发展的相关性.方法 采用聚合酶链反应和DNA测序相结合的方法,对75例胃癌患者癌组织线粒体D-loop 区进行扩增并测序分析.结果 在75例胃癌组织中共有130个位点发生了变化,其中属于基因多态性有101个,基因突变有29个.75例胃癌组织中39例mtDNA D-loop区存在突变,突变率为52%.结论 mtDNA D-loop 区碱基突变可能在胃癌发生发展中发挥重要作用.
关键词： 线粒体DNA(mtDNA) 基因突变 D-loop区突变 胃癌 -
线粒体功能与精子活力
精子活力是衡量精液质量和男性生育力的一个重要指标,在男性不育患者中约19%为精子活力低下所致.精子运动所需能量来自线粒体呼吸链的氧化磷酸化,各种原因导致的线粒体结构和功能改变,如膜电位的降低,酶活性或表达量异常以及线粒体DNA(mtDNA)的突变或缺失等均可导致线粒体能量合成障碍,精子活力降低.对近年有关线粒体功能与精子活力相关性研究进展综述,旨在探讨精子活力低下的发病机制以及临床治疗弱精子症的可能途径.
关键词： 精子 活力 线粒体 线粒体DNA(mtDNA) -
姜黄素致人结肠癌HT-29细胞DNA损伤作用
目的 探讨姜黄素致人结肠癌HT-29细胞线粒体DNA(mtDNA)和核DNA(nDNA)损伤作用.方法 人结肠癌HT-29细胞暴露于不同质量浓度的姜黄素(0.0,2.5,5.0,10.0 20.0 μg/ml)2 h后,采用长链PCR方法分别扩增mtDNA和nDNA片段,琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物量.结果 mtDNA扩增产物在5.0 μg/ml姜黄素作用下明显下降,在5.0,10.0 20.0 μg/ml作用下mtDNA损伤频率分别为(1.23±0.10),(1.97±0.24)和(5.78±0.62)/10 kb,与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);nDNA扩增产物在20.0 μg/ml姜黄素作用下才明显下降,在5.0,10.0,20.0 μg/ml作用下nDNA损伤频率分别为(0.27±0.04),(0.61±0.11)和(1.61±0.12)/10 kb,与对照组比较,除5.0 μg/ml作用组外差异均有统计学意义(P<0.01).结论 姜黄素对HT-29细胞的mtDNA和nDNA损伤均呈剂量依赖关系,并且对mtDNA的损伤作用明显大于nDNA.
关键词： 姜黄素 线粒体DNA(mtDNA) DNA损伤 人结肠癌 -
二氯乙烯对体外培养人皮肤角质形成细胞的氧化损伤作用
目的 探讨二氯乙烯(dichloroethylene,DCE)对体外培养的人皮肤角质形成细胞(keratinocyte,KC)的氧化损伤作用.方法 使用2.800、1.400、0.700、0.350、0.175 mmol/L的DCE对体外培养的人KC染毒4 h,检测细胞活力和细胞内MDA、ROS含量、SOD活性,以及线粒体内8-羟基脱氧鸟嘌呤(8-hydfoxy-2-deoxyguanosine,8-OHdG)水平.结果 经不同浓度DCE作用4 h后,细胞活力无明显改变.随着DCE浓度升高,细胞内MDA和ROS水平呈上升趋势,而SOD活性呈下降趋势,与溶剂对照组相比较差异有统计学意义;线粒体内8-OHdG水平也随着DCE浓度增加而呈现上升趋势.结论 DCE对人KC有氧化损伤作用.
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烧伤早期大鼠心肌线粒体DNA 4.8 kb大片段缺失的检测及其意义
目的观察严重烧伤早期大鼠心肌组织线粒体DNA (mtDNA) 4.8 kb大片段缺失的规律,探讨线粒体参与烧伤后"休克心"形成的基本机制.方法 Sprague Dawley(SD)大鼠36只随机分为假烫伤组、30%TBSA Ⅲ度烫伤1、3、6、12、24 h组,半定量PCR法检测烧伤前后心肌线粒体DNA缺失率,并测定各组大鼠心肌线粒体中ATP、ADP、AMP以及血清中肌钙蛋白I(Tn I)含量变化.结果①大鼠烧伤后1、3、24 h分别发生了线粒体DNA(mtDNA)的部分或全部4.8 kb大片段缺失.②大鼠烧伤后1、3、6、24 h时心肌线粒体中ATP含量下降,结果有显著性意义(P<0.05,P<0.01).③大鼠烫伤后血清中Tn I含量急剧上升,至伤后6 h达高峰,变化有显著性意义(P<0.05,P<0.01).结论烧伤早期心肌mtDNA发生了严重缺失,可能诱发线粒体氧化磷酸化障碍,促进了烧伤早期心肌损伤.
关键词： 烧伤 心肌 线粒体DNA(mtDNA) ATP Tn I -
卵巢衰老与线粒体相关的研究进展
伴随生育年龄推迟及全面开放“二孩”政策,有生育需求的高龄女性显著增多.而与其他器官相比,卵巢易受年龄的影响.女性年龄相关的卵母细胞数量减少和质量下降共同决定了卵巢衰老.线粒体与卵胞质成熟密切相关,是卵巢衰老的决定要素.进一步了解线粒体与卵巢衰老的关系及探索改善卵母细胞质量的可能措施,将有助于为高龄女性提供更好的治疗策略,提高高龄女性的妊娠率.
关键词： 线粒体 线粒体DNA(mtDNA) 卵母细胞 卵巢衰老 -
线粒体疾病的诊疗策略——生殖细胞基因治疗
线粒体疾病是由基因突变导致电子传递链损伤而引起的疾病,其诊断需要结合临床与实验多方面综合评估,包括实验室检查、影像学检查、病理组织检查、生物化学检测及基因检测.目前为止,对线粒体疾病的治疗仅限于症状的缓解和对可治疗症状的治疗,例如癫痫,心脏疾病以及糖尿病的早期发现,包括饮食疗法、抗氧化剂治疗、对症治疗、药物治疗及基因治疗.近年来,线粒体置换技术越来越受到关注,该技术包括卵胞质移植(OT)、原核移植(PNT)、中期染色体移植(CT)、生发泡移植(GVT)技术以及极体移植(PBT)等.
关键词： 线粒体疾病 线粒体DNA(mtDNA) 线粒体置换 治疗 -
中国汉族人群的线粒体DNA控制区多态性研究
探讨mtDNA多态性在法庭科学中个体识别的理论基础.应用PCR扩增产物直接测序方法,对111名中国北方地区汉族人群无血缘关系个体的mtDNA控制区(HVI和HVⅡ)进行测序分析.在高变区I 15998～16400之间发现102处碱基变异,103个mtDNA单倍型;在高变区Ⅱ00035～00369之间的发现36处碱基变异,69个mtDNA单倍型.其可变碱基的变异形式主要为碱基替代(转换和颠换)、插入和缺失;碱基转换(78.9%)明显高于颠换(14.3%)、插入(3.4%),缺失(3.4%).分析表明,人群个体mtDNA控制区碱基序列,基因多样性为99.9%,两个无关个体的偶合概率为0.92%,具有高度序列的多态性.
关键词： 线粒体DNA(mtDNA) 单倍型 多态性 个体识别 -
人类线粒体DNA异质性研究进展及在法医学中的应用
线粒体DNA(mtDNA)异质性的存在使其在法医学应用变得复杂.本文对mtDNA异质性形成的可能原因、异质性的分布和遗传特点、异质性的筛查和定量方法、异质性对法医学的影响以及异质性的研究和展望等方面进行综述,探讨异质性在法医学上的应用价值.
关键词： 法医物证学 线粒体DNA(mtDNA) 异质性 -
人线粒体DNA序列分析在法医学中的应用研究及其进展
综述人线粒体DNA(mtDNA)序列分析在法医学种属鉴别、个体识别,以及个体年龄推断中的应用研究及其进展,展望对mtDNA异质性的研究及建立人mtDNA数据库,并具有重要的法医学实践意义.
关键词： 法医物证学 线粒体DNA(mtDNA) 序列分析 -
线粒体DNA和端粒与年龄相关性的研究进展
用DNA技术从分子水平上推断年龄,已成为法医学和人类学研究领域的新热点.目前用于年龄推断研究的DNA标记主要是线粒体和端粒.本文从线粒体DNA和端粒的概念、线粒体DNA的缺失和突变、端粒长度变化与年龄的相关性等方面对该领域的研究进展进行了综述.旨在为法医实践及进一步的研究提供新的方法和思路.
关键词： 法医物证学 线粒体DNA(mtDNA) 端粒 年龄推断 -
混合血样品检测的克隆测序法研究
在法医生物物证检验的DNA分析中,经常会遇到多个个体的混合血样的检测,如受害人与犯罪嫌疑人的混合血,受害人阴道上皮细胞与犯罪嫌疑人精子细胞或男性上皮细胞的混合斑等.
关键词： 法医物证学 混合样品 线粒体DNA(mtDNA) 克隆测序 个人识别 -
DHPLC-mtDNA控制区多态性分析系统的建立
目的基于变性高效液相色谱技术,建立一种不需测序和杂交的新的mtDNA控制区多态性分析系统.方法 mtDNA控制区序列(包括HV Ⅰ,HVⅡ和HVⅢ)被分为4个扩增片段,采用配对分析突变检测模式进行DHPLC分析.对DHPLC检测条件(包括柱温和洗脱梯度等)进行优化.对100个不同类型差异序列的组合配对以检验该方法的检测效力.结果 10组序列相同的样本配对DHPLC图谱均只显示1个样品峰.对序列相差1个碱基～7个碱基、插入(/缺失)1个碱基、插入(/缺失)2个碱基等类型的90个扩增片段组合,用DHPLC进行分析,均得到≥2个样本峰的DHPLC图谱,序列差异检出率达100%.该技术可检测的异质性DNA成分的小百分含量为10%.结论 DHPLC-mtDNA控制区多态性分析系统快速、经济和实用,在检测mtDNA异质性方面较直接测序更灵敏.
