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血小板整合素β3文献资料
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造血干细胞移植建立血小板整合素β3胞内段截短体转基因小鼠模型
本研究通过逆转录病毒感染整合素β3缺陷小鼠(β3-/-)骨髓造血干细胞再进行骨髓移植建立β3及其胞内段不同截短体的转基因小鼠模型,为进一步研究整合素β3胞内段在血小板双向信号转导途径中的作用提供基础.将整合素β3野生型、β3-△759(缺失R760 GT762氨基酸片段)和β3-△754(缺失T755 NITYRGT7622氨基酸片段)的cDNA分别克隆至带有GFP编码基因的MSCV MigR1逆转录病毒载体质粒中,用质粒转染BOSC23包装细胞株包装出带有β3全长及不同突变体的逆转录病毒,再感染β3-/-供体小鼠骨髓细胞,尾静脉注射移植入经致死剂量辐照的野生型C57BL/6小鼠体内,移植后6-8周流式细胞术检测GFP和β3的表达率以评估转基因效率.结果表明,成功建立了空载(Vector)、β3野生型和截短突变β3-△759、β3-△754等4种小鼠模型,血小板转基因成功的比率(即GFP阳性率)为18％-66％,转基因血小板β3表达可达到β3+/-水平.结论:利用逆转录病毒感染的造血干细胞移植建立血小板转基因小鼠模型是一种高通量快速有效的建立转基因小鼠模型的方法,这为进一步研究整合素β3胞内不同区段对血小板整合素信号转导途径的影响及体内对血小板进行基因操作和基因治疗奠定了基础.
