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铁过载骨髓造血细胞体外模型的建立及其对造血的影响
本研究通过铁与骨髓单个核细胞共培养,建立铁过载骨髓造血细胞模型并观察其对造血功能的影响.在体外培养骨髓单个核细胞的过程中,在培养液中添加枸橼酸铁铵(FAC),使细胞铁过载,建立铁过载骨髓造血细胞模型,然后检验这一过程中造血细胞的凋亡水平、造血集落形成(CFU-E、CFU-GM、BFU-E和CFU-mix)和CD34+细胞的计数变化.再用去铁胺(DFO)祛铁,观察上述指标的变化.结果发现:在不同时间加入培养液中不同浓度FAC,骨髓造血细胞内可变铁池(LIP)水平升高,且具有时间和浓度依赖性,在含400 μmol/L FAC的培养液中培养24小时时LIP水平达到高.骨髓细胞造血功能检测表明,FAC组细胞凋亡比例(24.8 ±2.99%)较对照组(8.9±0.96%)显著升高(P＜0.01);造血集落形成单位计数明显低于对照组(P＜0.05);CD34+细胞比例(0.39±0.07%)与对照组(0.91±0.12%)相比也显著降低(P＜0.01).这些损伤影响可以通过DFO的处理部分消除.结论:在体外培养过程中添加铁能诱导骨髓单个核细胞铁过载,建立铁过载骨髓造血细胞模型,并能引起骨髓造血功能损伤,而这种损伤作用可以通过祛铁法减轻.本模型为深入研究铁过载对骨髓细胞造血功能的作用机制提供实验方法,并为骨髓造血功能低下的铁过载病人治疗提供新的靶点.
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铁过载对骨髓损伤小鼠造血功能的作用及机制研究
目的 探讨铁过载对骨髓损伤小鼠造血功能的作用及可能机制.方法 将20只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、铁剂组、照射组、照射+铁剂组,每组5只.通过给予小鼠4Gyγ射线照射及腹腔注射右旋糖酐铁建立骨髓损伤小鼠铁过载模型,观察各组小鼠铁负荷情况及骨髓单个核细胞(BMMNC)内可变铁池水平,检测各组小鼠外周血常规的改变;检测BMMNC数,红系、粒-单核系细胞比例及造血干/祖细胞功能改变;分析骨髓细胞,红系和粒-单核系细胞活性氧物质(ROS)水平.结果 ①骨髓活检及流式细胞术检测均显示发生铁过载.②与对照组相比,照射组小鼠血小板计数显著降低[(801.9±81.2)×10/9L对(926.0±28.2)×109/L],BMMNC数及红系、粒-单核系细胞比例明显降低,骨髓造血集落形成单位(CFU)数和造血干细胞单克隆培养数明显减少(P值均＜0.05).③与照射组相比,照射+铁剂组小鼠血小板计数显著降低[(619.0±60.9)×109/L对(801.9±81.2)×109/L],红系、粒-单核系细胞比例明显降低,骨髓造血CFU数和造血干细胞单克隆形成数明显减少(P值均＜0.05).④照射+铁剂组BMMNC、红系和粒-单核系细胞ROS水平较照射组分别升高1.94、1.93和2.70倍(P值均＜ 0.05).结论 4Gyγ射线照射可造成小鼠骨髓损伤,在骨髓损伤基础上发生铁过载会加重损伤造血干/祖细胞功能,进一步研究发现可能由铁过载引起BMMNC内ROS水平升高所致.
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铁过载诱导活性氧物质生成对骨髓造血功能影响的体外实验研究
目的 建立体外铁过载骨髓造血细胞模型，检验铁过载对细胞活性氧物质(ROS)水平的影响以及ROS升高对骨髓造血功能的影响。方法 在骨髓单个核细胞培养的过程中添加枸橼酸铁铵(FAC)，使细胞铁过载，检验这一过程中细胞ROS水平、细胞凋亡水平、造血细胞集落形成和CD 34+细胞计数的变化。再用去铁胺(DFO)祛铁或抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)清除过多的ROS后，检测上述指标的变化。结果 ①在培养液中加入不同浓度FAC培养不同时间，发现骨髓造血细胞内可变铁池(LIP)水平升高，且具有时间和浓度依赖性，在含400μmoL/L FAC的培养液中培养24h时LIP水平达到高。②在400μmol/L FAC浓度下，培养骨髓造血细胞24h后骨髓造血细胞内总的ROS、粒细胞和红细胞内ROS显著升高，分别为对照组的1.77、1.75和2.12倍。与对照组比较，DFO和NAC处理后均能明显降低细胞内ROS水平(P＜0.05)。③对骨髓细胞造血功能的检测发现FAC组细胞凋亡比例[(24.80±2.99)％]较对照组[(8.90±0.96)％]显著升高;造血细胞集落形成单位(CFUE、CFU-GM、BFU-E和CFU-mix)计数明显低于对照组(P值均＜0.05);CD34+细胞比例[(0.39±0.07)％]较对照组[(0.91±0.12)％]也显著降低。且这些损伤都可以通过DFO和NAC处理而部分恢复。结论 铁过载通过诱导ROS生成影响骨髓造血功能，这种损伤可以通过祛铁和抗氧化处理减轻。可能为治疗铁过载患者骨髓造血功能低下寻找新的靶点。
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可变铁池:细胞氧化应激损伤与心血管疾病
可变铁池是体内一种特殊的铁存在形式,细胞内可变铁池水平可通过流式细胞技术检测.可变铁池参与氧化还原反应产生氧自由基,导致细胞氧化应激损伤,进而参与多种心血管疾病的发生、发展过程.
