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293T细胞模型中整合素β3胞浆尾段不同氨基酸基序对αⅡbβ3介导的细胞功能的影响
目的:建立含有Calpain切割相关的β3胞浆尾段突变体的293T细胞模型,研究β3胞浆尾段不同氨基酸基序对αⅡbβ 3介导的细胞功能的影响.方法:利用293T细胞模型建立共表达人类野生型整合素αⅡb和野生型β3或突变型β3(β3△NITY(β3胞浆段截去NITY基序)、β3△754(β3胞浆段截去羧基末端后8个氨基酸TNITYRGT)、β3△759(β3胞浆段截去羧基末端后3个氨基酸RGT)的稳转细胞株,通过细胞在固相化纤维蛋白原上的黏附及伸展试验检测各稳转细胞株的黏附及伸展功能.结果:成功建立了293T-αⅡbβ3△NITY、293T-αⅡbβ3△754、293T-αⅡbβ3△759、293T-αⅡbβ3细胞株,稳定表达野生型整合素β3全长的293T-αⅡb β3细胞株较293T细胞具有良好的在固相化纤维蛋白原上的黏附和伸展能力,可以作为血小板的替代模型,而293T-αⅡbβ3△NITY稳转细胞株的黏附和伸展能力稍低于293T-αⅡbβ3稳转细胞株,但293T-αⅡbβ3△754细胞、293T-αⅡbβ3△759细胞株的黏附和伸展能力均明显受损.结论:对整合素β3介导的细胞伸展功能,RGT基序至关重要,而NITY并非必不可少,同时所建β3胞浆尾段不同突变体的293T细胞株也为进一步的质谱分析数据库比对奠定了基础.
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釉基质蛋白对猪骨髓基质细胞生物学特性的影响
目的 研究釉基质蛋白(enamel matrix proteins,EMPs)对体外培养的猪骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)生物学特性的影响.方法 抽取猪髂骨骨髓,全血培养法获得骨髓基质细胞.培养液中EMPs的浓度分别为25、50、100、200ug/ml,以不加EMPs为对照.用比色法检测不同浓度EMPs对BMSCs粘附性的影响.通过计数预定视野中伸展的细胞数,计算BMSCs在1h、3.5h、6.5h的伸展率.MTT法测定各组细胞的增殖活性.结果 猪BMSCs在含有EMPs的培养液中生长良好.对照组以及不同浓度EMPs对细胞粘附性的影响无统计学差异.在1h、3.5h、6.5h,各组细胞的伸展率无显著不同.EMPs对BMSCs的促增殖作用呈浓度和时间依赖性,200ug/ml浓度的EMPs从实验的第三天开始显著促进猪BMSCs的增殖.结论 EMPs对体外培养的猪BMSCs的粘附性和伸展率无影响,200ug/ml浓度的EMPs可显著促进猪BMSCs增殖,提示可尝试联合应用EMPs和BMSCs修复牙周组织缺损.
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釉基质蛋白对猪骨髓基质细胞黏附、伸展及增殖的影响
目的:研究釉基质蛋白(enamel matrix proteins,EMPs)对体外培养的猪骨髓基质细胞(bone marrow stromalcells,BMSCs)黏附、伸展和增殖活性的影响.方法:抽取猪髂骨骨髓,全血培养法获得骨髓基质细胞.培养液中EMPs的浓度分别为25、50、100、200μg/ml,以不加EMPs为对照.用比色法检测不同浓度EMPs对BMSCs黏附的影响.通过计数预定视野中伸展的细胞数,计算BMSCs在培养1h、3.5h、6.5h后的伸展率.MTT法测定各组细胞的增殖活性.对实验数据行单因素方差分析和SNK法组间比较.结果:猪BMSCs在含有EMPs的培养液中生长良好.对照组以及不同浓度EMPs实验组对细胞黏附的影响无统计学差异.在1h、3.5h、6.5h,各组细胞的伸展率无显著不同.EMPs对BMSCs的促增殖作用呈浓度和时间依赖性,200μg/ml浓度的EMPs从实验的第3天开始,显著促进猪BMSCs的增殖.结论:EMPs对体外培养的猪BMSCs的黏附和伸展无显著影响,200μg/ml浓度的EMPs可显著促进猪BMSCs增殖,为联合应用EMPs和BMSCs修复牙周组织缺损提供了理论依据.
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特质好奇对军队离退休干部主观幸福感的影响
目的 探讨特质好奇对军队离退休干部主观幸福感的影响.方法 研究对象为73例军队离退休干部,应用纽芬兰纪念大学幸福度量表、好奇心和探索量表进行测量,采用分层回归法进行数据分析.结果 (1)控制了自评健康状况后,特质好奇的纳入提高了模型解释率(△R2 =0.07,F=3.26,P＜0.05);(2)特质好奇的伸展因素和接受因素都对主观幸福感有独立作用,其中伸展因素的系数为正(β=0.39,P＜0.05),接受因素的系数为负(β=-0.32,P＜0.05).结论 特质好奇是影响军队离退休干部主观幸福感的重要因素,特质好奇的两个因素对主观幸福感存在不同的影响,伸展因素的得分越高,主观幸福感程度越高;接受因素的得分越高,主观幸福感程度越低.
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牙骨质附着蛋白对牙周膜细胞黏附、伸展及增殖的影响
目的 观察牙骨质附着蛋白(CAP)对体外培养的人牙周膜细胞(hPDLCs)黏附、伸展和增殖活性的影响.方法 组织块培养法获得人hPDLCs.培养液中分别加入不同浓度的CAP(0、0.125、0.25、0.5、1.0、2.0 μg/mL).细胞计数法检测不同浓度CAP对hPDLCs黏附的影响;同时通过计数检测视野中伸展的细胞数,计算hPDLCs在培养1、4、7 h 后的伸展率;MTT比色法测定、比较不同浓度CAP处理组hPDLCs细胞的增殖活性.结果 0.5、1.0 μg/mL CAP处理组hPDLCs的黏附力明显强于空白对照组(CAP浓度为0)(P＜0.01);不同浓度CAP处理组与空白对照组对细胞伸展影响的比较无明显差异.CAP对hPDLCs的促增殖作用呈浓度和时间依赖性,0.5～2.0 μg/mL的CAP均能显著促进hPDLCs的增殖(P＜0.05).结论 CAP对体外培养的hPDLCs具有促黏附及促增殖作用,但对其细胞伸展无显著影响.
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敲低CD2相关蛋白的表达对足细胞黏附和胞质伸展功能的影响
目的 观察敲低足细胞CD2相关蛋白(CD2AP)表达对细胞黏附和胞质伸展功能的影响,并探讨其机制.方法 用RPMI 1640培养基33℃下培养小鼠未分化足细胞系,转染针对CD2AP的小分子干扰RNA(siRNA),设无特异靶位点的scrambing序列即controlsiRNA转染组作对照.48 h后将转染的足细胞制备成单细胞悬液,接种于预铺有Ⅳ型胶原蛋白的96孔板内,33℃下培养90 min后检测足细胞的贴壁率和细胞的伸展面积;流式细胞仪检测抑制CD2AP后足细胞的凋亡率以及在不同氨基核苷嘌呤霉素(PAN)刺激下足细胞的凋亡率;激光共聚焦显微镜下检测F肌动蛋白(F-actin)的分布变化;Westem印迹和免疫共沉淀检测nephrin蛋白的表达及其磷酸化水平.结果 转染CD2AP siRNA足细胞的黏附率为41.72%±6.07%,显著低于对照组64.46%±8.53%(P<0.05);细胞伸展的面积>200 μm2的比例(55.86%)亦显著低于对照组(73.61%).转染CD2AP siRNA后48 h足细胞的凋亡率高于对照组[(5.73±0.61)%比(3.26±0.45)%,P<0.05].100 mg/L的PAN能明显诱导足细胞的凋亡,减少足细胞的黏附率(P<0.05).敲低CD2AP的表达后足细胞F-actin的分布发生明显的变化,nephrin蛋白表达和磷酸化水平下降(P<0.05).结论 敲低CD2AP的表达使足细胞易于凋亡,影响细胞的黏附功能.足细胞骨架蛋白的紊乱和nephrin信号通路的抑制可能是足细胞黏附和伸展功能下降的机制.
