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SCF与bFGF联合诱导脐血CD133+细胞分化及基因表达的变化
本研究探讨干细胞因子(SCF)与碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)体外联合诱导脐血CD133+细胞分化及基因表达的变化,认识脐血CD133+细胞的生物学特性,为体外诱导分化和临床应用打下基础.利用MiniMACS免疫磁珠法从脐静脉血单个核细胞中分离出CD133+细胞,用含干细胞因子(SCF)、bFGF、B27的DMEM/F12细胞营养液培养10-15天,提取培养前后细胞总RNA,利用Oligo GEArray(R)芯片和GEArray表达分析软件进行相关基因表达的芯片数据分析.结果表明:在所检测的263个基因中,发现21个基因培养后表达比培养前显著上调,7个基因表达显著下调.这些基因主要涉及干细胞特异性标志、细胞周期、干细胞分化标志以及与干细胞相关的信号转导、细胞因子及其受体等.结论:SCF和bFGF通过一些特定基因的变化影响脐血CD133+细胞增殖分化,这一结果有助于从基因水平理解SCF与bFGF联合作用对CD133+细胞增殖分化的影响,有利于细胞因子诱导的CD133+细胞在临床上的应用.
关键词： 干细胞因子 碱性成纤维细胞生长因子 CD133细胞 基因芯片 脐血 -
CD133作为结肠癌HT29细胞系干细胞特异性生物标志的研究
目的 研究CD133作为结肠癌HT29细胞系干细胞特异性生物标志的可行性,为治疗结肠癌提供新的靶点及思路.方法 克隆形成试验于6孔板中按浓度梯度各接种50、100、200个经磁珠分选的CD133+或CD133-结肠癌HT29细胞,培养2～3周至肉眼可见的细胞克隆时计数克隆数并计算克隆形成率;经磁珠分选的CD133+或CD133-HT29细胞接种于BALB/C裸鼠侧腹部皮下,观察裸鼠成瘤情况,绘制裸鼠生长曲线.HE染色观察病理学变化.提取瘤体组织RNA,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测CD133表达.成瘤率的比较应用Fisher's Exact Test.结果 克隆形成试验中,CD133+HT29细胞在各接种密度下的克隆形成率分别为65.32％±3.56％ 、78.01％±3.79％、91.23％±4.23％;CD133-分别为20.05％±2.51％、35.19％±2.94％、44.33％±3.03％;同一接种密度下CD133+克隆形成率明显高于CD133,差异均有统计学意义(P＜0.05).成瘤试验中,CD133+HT29细胞高剂量组于第4天观察到移植瘤全部形成,HE染色呈典型结肠癌组织,RT-PCR检测到CD133表达.而等剂量的HT29 CD133细胞至第5周仍无明显移植瘤形成.结论 在结肠癌HT29细胞系中CD133可以作为鉴定肿瘤干细胞的特异性生物标志,为后续试验研究奠定基础.
