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单链可变区文献资料
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单链可变区片段与趋化因子融合的独特型淋巴瘤疫苗原核表达质粒的构建及表达
本研究目的在于克隆小鼠 B 细胞淋巴瘤细胞膜免疫球蛋白(Ig)的单链可变区片段(scFv),与单核细胞趋化因子(MCP-3)的基因融合,构建融合基因scFv- MCP-3的表达载体,在大肠杆菌中表达融合蛋白,制备作为治疗B细胞淋巴瘤的独特型融合蛋白疫苗.采用RT-PCR法扩增BALB/c小鼠源B细胞淋巴瘤A20细胞株的Ig VH和Ig VL基因,重组PCR法用一段编码 (Gly4Ser)3连接肽的基因序列连接两基因,制备scFv片段.用相同PCR方法,选用一段编码NDAQAPKS连接肽的基因序列,连接scFv与MCP-3基因,获得scFv- MCP-3融合基因片段.定向克隆到原核表达质粒pGLo中,并在大肠杆菌中表达融合蛋白.测序结果表明:分别成功克隆A20细胞的Ig VH 和Ig VL基因,并成功制备了scFv片段和scFv- MCP-3融合基因片段;限制性酶切方法证实,重组pGLo/scFv- MCP-3原核表达质粒中融合基因准确插入.SDS-PAGE电泳分析显示,融合蛋白分子量约65 kD, 与预期蛋白分子量一致,并且目的蛋白占菌体蛋白的30%. 结论:本研究成功构建鼠源scFv片段与趋化因子MCP-3融合的独特型B细胞淋巴瘤疫苗表达质粒pGLo/scFv- MCP-3,并实现融合蛋白的初步表达.
关键词： 独特型疫苗 B细胞淋巴瘤 单链可变区 单核细胞趋化蛋白-3
