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14-3-3ξ文献资料
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14-3-3ξ对HL-60和HL-60/VCR细胞增殖的抑制作用
本研究旨在进一步探讨14-3-3ξ在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)敏感细胞HL-60和耐药细胞HL-60/VCR中的表达和作用.用半定量RT-PCR和Western blot分别检测多药耐药基因mdr1 mRNA和Pgp的表达以验证基因芯片的结果,用Western blot检测PgP、14-3-3ξ以及抗凋亡分子BCL-2、MCL-1蛋白的表达;免疫荧光法和激光共聚焦法检测14-3-3ξ在HL-60和HL-60/VCR亚细胞中的定位.采用将小干扰RNA(siRNA)通过脂质体LipofeetamineTM 2000介导,瞬时转染HL-60和HL-60/VCR细胞,以观察细胞生长的变化.细胞增殖指标采用生长曲线和细胞周期测定法测定.采用RT-PCR和Western blot方法检测PgP、14-3-3ξ以及抗凋亡分子BCL-2、MCL-1表达的变化.结果表明,mdr1 mRNA和Pgp仅在HL-60/VCR细胞中高表达.与HL-60细胞相比,除了14-3-3(α)之外,其他14-3-3亚型均在HL-60/VCR细胞中高表达,尤其是14-3-3ξ同时伴有BCL-2和MCL-1高表达.另外,研究发现14-3-3ξ主要定位于细胞浆和核.通过RNA干涉抑制14-3-3ξ的表达能抑制HL-60和HL-60/VCR细胞的生长,下调BCL-2和MCL-1蛋白.结论:14-3-3ξ可能通过BCL-2和MCL-1介导调控HL-60和HL-60/VCR细胞的增殖,是治疗难治复发AML的潜在新靶点.
