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流感病毒H1N1在MDCK细胞的培养及纯化条件的优化
目的 优化流感病毒H1N1在狗肾细胞(MDCK)上的培养条件,高效扩增流感病毒.方法 对MDCK细胞培养流感病毒时添加的胰酶(TPCK-Trypsin)浓度和培养基的种类进行筛选;比较不同细胞代次的MDCK对流感病毒的易感性;按MOI值0.001、0.01、0.1接种H1N1于MDCK细胞,CPE＞75％时收获病毒上清,并按MOI值0.001接种H1N1后连续培养,分别于1、2、3、4、5d收获病毒上清,HA试验检测上清病毒滴度,浓缩纯化后行TCID30检测,分别选取佳接种MOI值和收毒时间;对浓缩纯化病毒的红细胞吸附方法进行检验.结果 通过对比,确定TPCK-Trypsin的佳使用浓度是0.25 μg/ml,MEM为培养病毒的佳培养介质;代次低的MDCK对流感病毒的易感性强于代次高的MDCK细胞;按MOI值0.001接种H1N1于MDCK细胞,第3d收获的上清病毒滴度高,为1∶1 024;用红细胞吸附法浓缩纯化流感病毒的Log 1/TCID50为8.5.结论 选用MEM,添加0.25 μg/ml TPCK-Trypsin,使用低代次MDCK,病毒接种含量MOI=0.001为H1N1佳培养条件,红细胞吸附法能高效浓缩纯化培养上清中的H1N1.
