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噬菌体LH-01治疗不同宿主菌所致小鼠致死性败血症影响因素研究
目的 观察肺炎克雷伯菌噬菌体LH-01治疗不同宿主菌所致小鼠败血症的效果,分析影响疗效因素,探索评价噬菌体疗效的方法. 方法 通过比较噬菌斑和成斑率,从9株LH-01宿主菌中选择对其敏感性较强的菌株.尾静脉注射绝对致死量的不同敏感菌致小鼠败血症,2h后通过尾静脉注射LH-01治疗并观察其疗效.比较LH-01在小鼠新鲜血清、补体热灭活血清,以及在标准补体溶血活性由低至高的溶液中对敏感菌的杀灭能力,明确引起LH-01对不同敏感菌感染组小鼠疗效差异的因素. 结果 9株宿主菌中KP6、KP13、KP16和KP22在营养肉汤中对LH-01为敏感.当小鼠全身感染致死量的这4种细菌后,LH-01的治疗可使KP6感染组小鼠生存率达90％(9/10),KP13组为30％(3/10),而KP16组和KP22组小鼠全部死亡.体外试验显示,除LH-01对KP6的作用不受补体影响外,LH-01对其余3株菌的杀灭作用均受补体影响,其中25 U/ml的补体活性即可完全抑制LH-01对KP16和KP22的杀灭作用,而完全抑制对KP13的杀灭作用所需的补体活性≥50 U/ml. 结论 补体是影响LH-01治疗小鼠肺炎克雷伯菌感染疗效的主要原因.血清中噬菌体对致病菌的杀菌力和补体干扰杀菌的程度有助于预测噬菌体疗效,指导细菌感染的噬菌体治疗.
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小鼠血清补体替代途径溶血活性测定的新方法
目的 针对现有补体溶血活性测定方法 不适宜测定小鼠血清补体的缺点,构建一种血清用量少、灵敏度高的小鼠血清补体替代途径溶血活性测定的新方法.方法 选用具有代表性的3个小鼠品系KM、BALB/c和C57BL/6小鼠的血清补体作为测定材料,以兔红细胞为溶血靶细胞,利用眼镜蛇毒因子(CVF)特异激活补体替代途径的特点,构建和优化小鼠血清补体替代途径溶血活性测定的方法,并采用该方法 测定两种抗补体蛋白对小鼠体内血清补体活性的影响.结果 以CVF作为激活剂成功构建了测定小鼠血清补体替代途径溶血活性的微量新方法.3个品系小鼠的血清在5～20 μl的范围内即可分别达到合适的溶血度.该方法 明显减少了血清用量,并能有效提高溶血度.结论 基于CVF特异激活补体替代途径的特点而构建的小鼠血清补体替代途径溶血活性测定新方法,血清用量少、灵敏度高、稳定性好,适用于测定小鼠血清补体的溶血活性.
