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芯片电泳相对迁移时间DNA长度计算方法鉴定高危型人乳头状瘤病毒基因
目的 建立一种能够消除电泳分析中迁移时间漂移对于DNA片段长度预测精确性影响的芯片电泳相对迁移时间比例方法,并联用多重PCR鉴定高危型人乳头状瘤病毒(HPV).方法 在芯片电泳分析中引入上位和下位内标,依据待测DNA片段相对于上位及下位内标的迁移时间比例进行长度预测,建立芯片电泳相对迁移时间比例的测定方法.考察不同实验条件下芯片电泳DNA分析中相对迁移时间比例的重现性和DNA片段长度预测精确性.选取2007年10月至2008年12月间广州医学院附属广州市第一人民医院妇科就诊的114例患者的富颈上皮细胞样品,经细胞学检查划分为正常组(n=30)、不典型鳞状细胞组(ASCUS组,n=30)、低度鳞状上皮内病变组(LSIL组,n=30)和高度鳞状上皮内病变和(或)鳞状细胞癌组[HSIL和(或)SCC组,n=24].对应活检组织经病理诊断,划分为宫颈高度病变组(n=90)和对照组(n=24).利用多重PCR联合芯片电泳相对迁移时间比例方法检测宫颈上皮细胞样本中5种高危型HPV感染状况.参考组织病理学检测结果评价芯片电泳相对迁移时间比例的方法分析对于宫颈高度病变诊断的临床价值.结果 芯片电泳相对迁移时间比例方法具有良好的重现性和DNA片段长度相关性.使用芯片电泳相对迁移时间比例方法能够满足HPV基因分型多重PCR产物的准确鉴定.各个细胞学分类级别对应的5种高危HPV检出率分别为正常组33.3％、ASCUS组60％、LSIL组76.6％、HSIL和(或)SCC组83.3％.HPV感染率随细胞和组织学病变级别增加有上升趋势,与细胞学(x2=19.319,P＜0.05)和组织学(x2=7.268,P＜0.05)分级具有明显的关联.结论 芯片电泳相对迁移时间比例方法简单可靠,可以实现高危HPV基因型快速判定,具有筛查宫颈高度病变的价值.
