首页 > 文献资料
-
FMR1基因敲除小鼠海马组织中microRNA-125b和microRNA-132的表达
目的 检测FMR1基因敲除小鼠海马组织中microRNA-125b(miR-125b)和miR-132表达水平,探讨脆性X智力低下蛋白(FMRP)缺失是否通过改变其转录后表达影响树突棘发育.方法 取FVB近交系雄性1周龄FMR1基因敲除型(K0)和同龄野生型(WT)小鼠各3只,取海马组织标本,应用microRNA芯片技术和荧光定量实时PCR检测miR-125b和miR-132的表达.结果 microRNA芯片检测显示,1周龄WT与KO小鼠海马组织miR-125b和miR-132的荧光值比较,差异无统计学意义(miR-125b:4 919.295±431.981比4 997.578±141.402;miR- 132:244.289±31.125比238.517±62.275,均P＞0.05)；荧光定量实时PCR检测显示,miR-125b和miR-132的相对表达量差异亦无统计学意义(miR-125b:11.45±0.32比11.55±0.43；miR- 132:18.28±0.34比18.50±0.40,均P＞0.05).结论 脆性X综合征树突棘发育不良与miR-125b和miR-132的转录后表达水平无关.
-
代谢性谷氨酸受体在脆性X综合征树突棘发育中的作用
目的 探讨代谢性谷氨酸受体-Ⅰ(mGluR-Ⅰ)在脆性X综合征发病中的作用和mGluR-Ⅰ拮抗剂治疗的机制.方法 培养FMR-1基因敲除小鼠(KO)和野生(WT)小鼠海马神经元,给予mGluR-Ⅰ激动剂和拮抗剂进行处理,Western-Blot法检测处理前后脆性X智力低下蛋白(FMRP)和微管相关蛋白1B(MAP1B),共聚焦显微镜观察树突棘的长度和密度. 结果 KO小鼠海马神经元树突棘长度(1.32±0.79)和MAP1B含量显著高于WT小鼠(1.00±0.62).mGluR-Ⅰ激动剂干预后,KO和WT小鼠树突棘长度(1.60±0.88和1.33±0.80)和MAP1B均显著增加.mGluR-Ⅰ拮抗后,KO小鼠树突棘长度(0.95±0.57)和MAP1B均显著降低,在WT小鼠未见明显变化. 结论 脆性X综合征模型鼠由于缺乏FMRP的负性调节作用,导致mGluR-Ⅰ激活的MAP1B过度表达,可能是树突棘异常的主要原因.mGluR-Ⅰ拮抗剂逆转树突棘缺陷可能参与治疗机制.
-
脆性X智力低下蛋白与NDK/Nm23-H2的相互作用
目的筛选与脆性X智力低下蛋白(FMRP)相互作用的蛋白,为FMRP生理功能的阐释提供新线索.方法以5月龄人胚海马mRNA为模板制备cDNA,重组于DNA激活结构域载体pGAD10,构建酵母双杂交文库,从中筛选与FMRP相互作用的蛋白.应用酵母双杂交体系对FMRP的相互作用区域进行定位.结果 (1)所构建的5月龄人胚海马cDNA酵母双杂交文库含1×106克隆,插入片段平均长度约1.5 kb,有效克隆90%;(2)在该文库中筛选到一个与FMRP相互作用的阳性克隆.序列分析表明:该克隆为人的核苷酸二磷酸激酶亚基B(NDK/Nm23-H2)cDNA;(3)NDK/Nm23-H2与缺少外显子12、14-17的FMRP异构体,以及含FMRP外显子1-12的克隆相互作用,而与FMRP外显子1-6、外显子2-7不能直接结合.结论人Nm23-H2在酵母细胞内能与FMRP结合,其相互作用区域定位于FMRP的前1-11个外显子.Nm23-H2具反式调控因子特性,FMRP与Nm23-H2的相互作用提示FMRP参与基因表达调控.这一发现有助于进一步研究FMRP在细胞核内的生物学功能.
-
FMR1基因敲除小鼠的繁殖及基因鉴定
目的 繁殖和鉴定脆性X智力低下蛋白基因敲除小鼠. 方法 引进FMR1基因敲除小鼠,提取每只小鼠尾部基因组DNA,用PCR法进行鉴定,获得的雄性纯合子子代小鼠与杂合子雌鼠进行交配. 结果 FMR1基因敲除小鼠的饲养和繁殖获得成功,获得较多的基因敲除纯合子小鼠. 结论 正确的饲养繁殖以及鉴定方法是获得FMR1基因敲除纯合子小鼠的有效途径.
-
外周血淋巴细胞FMRP检测在脆性X综合征中的应用
目的 探讨外周血脆性X智力低下蛋白(fragile X mental retardation protein,FMRP)表达对脆性X综合征(fragile X syndrome,FXS)的诊断价值.方法 运用免疫细胞化学方法对38例不明原因的智力低下男性患儿的FMRP进行外周血淋巴细胞FMRP表达检测,并与38例年龄相近、智商或发育商均大于85的正常男性患儿比较,同时对FXS儿童FMRP表达水平与智力水平进行相关分析.结果 通过FMRP检测,智力低下组符合FXS诊断标准者5例,正常对照组外周血淋巴细胞FMRP表达均未达到诊断标准(P=0.022);FXS患儿FMRP表达率与发育商或智商间的相关性没有统计学意义(r=-0.610,P=0.275).结论 外周血淋巴细胞FMRP免疫细胞化学检测方法是一种具有快速、简便、价廉等优点的FXS实验诊断方法,可以用作FXS的诊断和筛查.
-
脆性X智力低下蛋白与mRNAs的相互作用
脆性X智力低下蛋白 (fragile mental retardation protein,FMRP) 的表达缺失引起一种遗传性智力低下疾病--脆性X综合征.此蛋白是一种RNA结合蛋白,与mRNAs转运及多聚核糖体和突触的功能有关.因此,要了解脆性X综合征的发病机理,关键在于找到与FMRP蛋白结合的mRNAs,以及FMRP与这些靶mRNAs的结合对它们的代谢和翻译有何影响.
-
发根脆性X智力低下蛋白检测法诊断脆性X综合征
目的 至今已有多种筛查和诊断脆性X综合征(fragile X syndrome,FXS)的方法,以PCR法和Southern印迹方法应用广,然而每种方法均存在各自的局限性.该研究探讨发根脆性X智力低下蛋白(fragile Xmental retardation protein,FMRP)检测在诊断或筛查FXS中的可靠性,以建立一种快速、简便、价廉且可靠的诊断FXS的方法.方法 采用发根FMRP免疫组化的检测方法对80例健康儿童、40例不明原因智力低下儿童、已确诊FXS家系成员12例进行检查;用7-deza-dGTP PCR法进行对照,探讨其对诊断FXS的应用价值.结果 在80例健康儿童中,发根FMRP的表达率均在80%以上.40例不明原因智力低下患儿中,2例确诊为FXS患儿的发根FMRP表达率分别为10%和0,另38例非FXS患者发根FMRP的表达率均在80%以上.在FXS家系调查中,确诊的2例FXS患者的发根FMRP表达率均为0.结论 发根FMRP检测诊断FXS具有快速、简便、价廉、可靠等特点,值得进一步推广应用. [中国当代儿科杂志,2009,11(10):817-820]
-
FMR1基因敲除鼠感觉皮质功能柱树突棘修剪发育的研究
目的 研究脆性X智力低下蛋白(FMRP)缺失对感觉皮质功能柱神经可塑性的影响.方法 从纯合子鼠血液提取DNA,对FMR1基因片段进行扩增,电泳观察结果.并选用子代幼龄FMR1基因敲除及野生型小鼠共16只,按基因型和年龄分为1周龄FMR1基因敲除型组(KO1),1周龄野生型组(WT1),4周龄FMR1基因敲除型组(KO4),4周龄野生型组(WT4),每组各4只.采用快速Golgi染色法分别观察不同发育时间段感觉皮质功能柱区域神经元的功能柱中心和周边两个方向上树突分支、树突棘密度和长度.结果 与对照组相比,幼龄FMR1基因敲除鼠树突棘密度显著增高(P＜0.05)而长度无变化,感觉皮质功能柱区域中心朝向的树突棘密度无显著性差异,而周边朝向的树突棘密度KO1、KO4分别高于WT1、WT4,并且主要表现在距胞体10～80μm段的密度异常(P＜0.01). 结论 FMRP缺失导致树突棘密度增高和感觉皮质功能柱区域树突棘修剪异常,并且树突棘修剪和树突修剪的机制不同.
-
miR-9*和miR-30b在脆性X综合征小鼠海马组织中的表达及意义
目的:观察脆性X综合征(FXS)模型小鼠海马组织中miR-9*和miR-30b的表达,明确脆性X智力低下蛋白(FMRP)缺失是否导致miR-9*和miR-30b转录后表达水平的改变.方法:应用荧光实时定量PCR检测FVB品系近交系雄性1周龄Fmr1基因敲除型(KO1W)和同龄野生型(WT1W)小鼠海马组织中miR-9*和miR-30b的转录后表达水平(n=3).结果:KO1W与WT1W小鼠miR-9*和miR-30b的转录后表达水平差异有统计学意义(P＜0.05).结论:FMRP的缺失可能影响miR-9*和miR-30b的转录后表达水平.
