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Caveolin-1与血管平滑肌细胞信号转导
微囊蛋白家族是近年来引人关注的细胞膜信号转导调节因子,在多条信号转导过程中起着枢纽作用,其标志性的结构蛋白caveolin对许多关键信号分子的活性状态起着直接的调节作用.微囊蛋白表达异常可诱导动脉粥样硬化、心肌肥厚、肿瘤、糖尿病、膀胱功能异常、肌营养不良等多种疾病的发生.血管平滑肌细胞膜上主要表达微囊蛋白-1(caveolin-1),提示它可能参与平滑肌细胞膜内外的重要信号转导机制.
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质膜微区对土拉弗朗西斯菌LVS感染鼠巨噬细胞的影响
目的 评估士拉弗朗西斯菌LNS入侵鼠巨噬细胞过程巾质膜微区的作用.方法 用电穿孔法将穿梭质粒pFNLTP6gro-gfp导人土拉弗朗西斯菌LVS.细胞膜用FM4-64染色,结合单抗的微囊蛋白-1用键合了Alexa 594荧光素的羊抗鼠二抗显色.用Z轴电动聚焦的荧光显微镜分析土拉弗朗西斯菌LNS感染.用甲基-β-环式糊精干扰富含脂质的胞膜损耗胆固醇,以评估质膜微区的损伤埘弗朗西斯菌入侵的影响.菲律平Ⅲ用以榆测胆固醇损耗的效果.结果 土拉弗朗西斯菌疫苗株可以诱导膜结构域伸出伪足将细菌吸收进入巨噬细胞.质膜微区相关成分微囊蛋白-1与含有弗朗西斯菌的囊泡一同进入宿主.弗朗西斯菌入侵巨噬细胞需要胆崮醇丰富的膜结构域.结论 胆固醇丰富的质膜微区和微囊蛋白-1在弗朗西斯菌早期进入巨噬细胞期间发挥重要作用.
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同型半胱氨酸对脐静脉内皮细胞微囊蛋白-1的蛋白及其mRNA表达的影响
目的:观察同型半胱氨酸(Hcy)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)微囊蛋白(caveolin-1)的蛋白及mRNA表达的影响.方法:将体外培养的HUVEC分为空白对照组(0 μmol/L Hcy)和4个实验组:10、50、200、500μmol/L Hcy浓度组,培养24h后,采用Western blot和RT-PCR分别测定caveolin-1蛋白和mRNA表达的变化.结果:随着Hey浓度的增加,caveolin-1蛋白及mRNA表达浓度依赖性地增加,超生理浓度Hcy时,与对照组及生理浓度组比较均有统计学意义(P＜0.05).结论:Hcy可能通过诱导caveolin-1mRNA表述,促进caveolin-1蛋白表达.
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微囊蛋白-1在胆囊结石模型小鼠肝脏胆囊中的表达及意义
目的 探讨微囊蛋白-1在致石饲料诱导的小鼠胆囊胆固醇结石症形成中的作用及其可能的机制.方法 以结石易感C57BL/6小鼠为研究对象,分别给予对照组共6只和实验组共6只小鼠普通饲料和致石饲料饲养4周,检测小鼠胆囊胆固醇结石形成状况、血脂、胆汁脂质含量变化.采用实时定量PCR法和Western蛋白印迹法检测小鼠肝脏及胆囊组织中微囊蛋白-1、清道夫受体B族Ⅰ型(SR-BI)的mRNA和蛋白表达水平和变化.采用t检验比较两组均数.结果 致石饲料饲养后4周,实验组小鼠胆囊成石率为100％,血脂水平明显升高;胆汁中胆固醇成分明显增加,胆盐减少.与对照组相比,微囊蛋白1在实验组小鼠肝脏和胆囊组织中mRNA和蛋白水平表达均显著下调(肝脏mRNA相对定量值为0.53±0.13比1.00±0.32,t=3.330;蛋白相对定量值为0.39±0.07比0.92±0.06,t=10.280;胆囊mRNA相对定量值为0.40±0.22比1.00±0.22,t=3.823;蛋白相对定量值为1.04±0.07比1.34±0.04,t=6.367,P均＜0.01).实验组小鼠肝胆组织的SR-BⅠ蛋白和mRNA相对定量与对照组相比差异均无统计学意义(P均＞0.05).结论 肝胆组织中微囊蛋白-1的mRNA和蛋白表达水平变化可能影响实验小鼠肝胆组织中的脂质代谢和胆固醇转运,在胆囊胆固醇结石的形成中发挥着作用.
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同型半胱氨酸联合去甲肾上腺素对ECV-304细胞的损伤作用
血液中同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)的浓度升高是导致心血管疾病的危险因子,使血管内皮细胞损伤的Hcy浓度高于正常生理浓度数万倍.然而在病理条件下,血管内皮细胞处于高浓度去甲肾上腺素(Norepi-naphrine,NA)环境中,NA将能引起血管内皮细胞氧化损伤.文章将生理浓度的NA和高浓度的Hcy联合应用于体外培养的血管内皮细胞,运用RT-PCR和Western Blot手段,以微囊蛋白-1(Caveolin-1)表达量为指标,研究两者对血管内皮细胞损伤的关系.结果发现,生理浓度的NA对细胞并无明显的损伤作用,当不同浓度Hcy和生理浓度NA联合使用时,对细胞的损伤作用有所增加,Hcy浓度越高时,联合用药的损伤作用越强.深入研究发现,Hcy能够增加细胞微囊蛋白-1 mRNA的转录水平.相反,不同浓度的NA均能够降低细胞Caveolin-1 mRNA的转录水平.
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Caveolin-1在84例原发性乳腺癌中表达及其意义
[目的]探讨Caveolin-1在乳腺癌中的表达及其临床意义.[方法]运用SP免疫组化方法检测84例原发性乳腺癌组织中Caveolin-1的表达.[结果]84例原发性乳腺癌组织中Caveolin-1阳性表达率为45.2%.Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期乳腺癌中,Caveolin-1阳性率分别为81.8%(9/11)、45.1%(23/51)、33.3%(6/18)和25%(1/4)(P＜0.05).腋淋巴结转移的乳腺癌Caveolin-1阳性率31.1%(14/45),明显低于无腋淋巴结转移(66.7%,P＜0.01).T1、T2、T3乳腺癌的阳性表达率分别为66.7%(10/15)、41.8%(20/49)、36.4%(4/11),三者间无明显差异.但T1和T2+T3之间差异有显著性(P＜0.05).Caveolin-1表达与年龄、组织学类型、分化程度、C-erbB-2和受体状况均未见相关性.[结论]原发性乳腺癌Caveolin-1的表达与肿块大小和腋淋巴结状况密切相关,随着病情的进展其表达呈下调趋势.
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caveolin-1蛋白及ERK1/2信号途径在罗红霉素抑制哮喘气道平滑肌细胞增殖中的作用
目的:研究微囊蛋白-1 (caveo1in-1)及ERK1/2信号通路在罗红霉素抑制哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖中的作用.方法:培养正常大鼠及哮喘模型大鼠ASMCs.哮喘组细胞以罗红霉素、甲基-β-环糊精、ERK1/2信号通路阻断剂PD98059分别进行干预.用CCK-8法检测各组细胞的增殖情况,Western blot(WB)法检测各组细胞caveolin-1蛋白、磷酸化ERK1/2(pERK1/2)蛋白、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)表达情况.结果:CCK-8检测结果显示,罗红霉素组(0.6807±0.15374)与哮喘组(0.9592±0.13728)比较,OD值降低,P＜ 0.05; PD98059组(0.7567±0.16167)与哮喘组(0.9592±0.13728)比较,OD值亦降低,P＜ 0.05;甲基-β-环糊精组(1.2583±0.20494)OD值较哮喘组(0.9592±0.13728)高,P＜ 0.05.WB法检测结果显示,体外培养的哮喘大鼠ASMCs经罗红霉素干预后caveolin-1蛋白表达量较哮喘组升高,ERK1/2的活化型降低,cyclinD1减少；甲基-β-环糊精组则相反.应用ERK1/2的阻断剂PD98059作用于体外培养的哮喘大鼠ASMCs,结果ERK1/2的活化型pERK表达量明显降低,cyclinD1减少.结论:罗红霉素可以上调caveolin-1蛋白的表达量,抑制ERK1/2途径,使cyclinD1的表达量减少,从而抑制哮喘大鼠ASMCs的增殖.
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微囊蛋白-1蛋白参与哮喘气道平滑肌细胞增殖中ERK1/2调控以及罗红霉素的干预
目的:在细胞水平研究微囊蛋白-1(caveolin-1)对气道平滑肌细胞(ASMCs)的增殖作用以及对ERK1/2的通路调控,探讨caveolin-1抑制ASMCs增殖的可能机制.方法:复制哮喘大鼠模型,光镜观察肺组织病理变化,透射电镜观察ASMCs上微囊(caveolae)的结构及变化,用组织贴壁法体外培养气道平滑肌细胞,实验设正常对照组(A组)、哮喘组(B组)、ERK1/2信号通路阻断剂PD9&059 (C组)、罗红霉素组(D组)、caveo-lae结构破坏药物β-甲基环糊精组(E组);用CCK-8法检测各组细胞的增殖情况,逆转录-聚合酶链测定(RT-PCR)和蛋白质印迹法(WesternBlot)检测ERK mRNA和p-ERK1/2蛋白的表达;Western Blot法检测各组caveolin-1蛋白细胞表达.结果:CCK-8检测结果显示D组及C组ASMCs增殖反应低于B组,D组(0.59±0.15) vs B组(0.96±0.14),P＜0.05,C组(0.63±0.11) vs (0.96±0.14),P＜0.05;E组ASMCs增殖反应较B组进一步活跃(1.26±0.21)vs(0.96±0.14),P＜0.05.D组及C组ASMCs上caveolin-1的表达较B组明显升高,P＜0.01,pERK1/2蛋白以及ERK mRNA表达较B组降低,E组相反.D组ASMCs的ERK mR-NA和p-ERK1/2蛋白表达水平均显著低于B组及E组(P＜0.01).结论:caveolin-1可能是ASMCs内信号转导的负调控蛋白,这一作用可能是通过抑制ERK信号通路实现.罗红霉素可能上调caveolin-1蛋白的表达量,抑制ERK mRNA表达和翻译,从而抑制哮喘大鼠ASMCs的增殖.
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微囊蛋白-1在鼻腔鼻窦鳞状细胞癌中的表达及意义
目的 分析微囊蛋白-1(caveolin-1,CAV-1)在鼻腔鼻窦鳞状细胞癌中的表达,探讨其与鼻腔鼻窦鳞状细胞癌的临床病理因素的相关性.方法 分别采用免疫组织化学方法及原位杂交技术检测62例鼻腔鼻窦鳞状细胞癌与20例鼻腔内翻性乳头状瘤及15例正常下鼻甲黏膜组织中CAV-1 mRNA及蛋白的表达情况,分析CAV-1与鼻腔鼻窦鳞状细胞癌患者临床病理参数的关系.结果 CAV-1 mRNA与蛋白在正常下鼻甲黏膜、鼻内翻性乳头状瘤及鼻腔鼻窦鳞状细胞癌组织中的阳性率分别为86.7％、60.0％、32.3％和80.0％、55.0％、29.0％.CAV-1mRNA和蛋白与病理分级、临床分期相关(P＜0.05),与性别、年龄无关(P＞0.05).CAV-1 mRNA与蛋白表达呈正相关(r,=0.53,P＜0.05).结论 CAV-1 mRNA和蛋白在鼻腔鼻窦鳞状细胞癌中阳性表达率逐渐降低,提示CAV-1可能参与了鼻腔鼻窦鳞状细胞癌的发生及发展过程.
