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自由生活阿米巴成囊过程中的自噬变化
目的 探讨自由生活阿米巴由滋养体向包囊转变过程中的自噬变化.方法 通过撤除大肠埃希菌培养基,诱导滋养体转变为包囊,分别在24 h、36 h和48 h时进行观察.在扫描电子显微镜下观察阿米巴成囊过程中的形态学变化,透射电镜下观察阿米巴自噬的变化及各种自噬结构的结构特点,图像分析仪测量自噬结构的断面面积.用单丹磺酰尸胺(MDC)染色法标记阿米巴虫体内的自噬体,在激光扫描共焦显微镜下观察和定量分析.结果 对照组阿米巴虫体内充满细菌碎片,发生轻微的自噬,自噬结构数目较少.与对照组比较,成囊24 h组阿米巴自噬水平显著提高,自噬结构数目增多,自噬前体、自噬体和自噬溶酶体与细胞质的断面面积比增大;成囊36 h组阿米巴自噬水平显著降低,自噬结构数目减少;成囊48 h组阿米巴92%转变为包囊,虫体内未见自噬结构.结论 自由生活阿米巴在由滋养体向包囊转变的早期,虫体内自噬功能显著增强,随后逐渐降低.
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原头蚴体外形成棘球蚴的优化培养体系研究
目的 建立适合细粒棘球绦虫原头蚴在体外形成棘球蚴的培养体系.方法 以RPMI1640或DMEM培养基为基质,胎牛血清或绵羊血清为营养成分,人肝细胞株L02为饲养细胞设计配伍2大类、6个组培养体系;培养细粒棘球绦虫原头蚴45 d,根据各组原头蚴的头节外翻率、成囊率和囊泡大小情况,寻找适合原头蚴形成棘球蚴的体外培养体系佳配伍;在佳配伍的培养体系继续培养棘球蚴囊泡至180 d.结果 在起初的45 d期间,DMEM体系的E组(DMEM+胎牛血清+人肝细胞株L02)培养的棘球蚴生长快,20 d起原头蚴成囊率高于其他各组(P＜0.05),25 d起棘球蚴囊泡大于其他各组(P＜0.05),45 d时原头蚴成囊率达到100％;在其后的46 ～ 180 d内,棘球蚴囊泡持续增大,至80 d时肉眼可见透明囊泡,至180 d时大囊泡直径达2.2 mm.结论 添加胎牛血清及人肝细胞株L02的DMEM培养基有利于体外培养的原头蚴发育为棘球蚴囊泡.
