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生后不同时间乳鼠心肌细胞的形态结构和功能特征
目的 观察生后不同时间乳鼠心肌细胞的形态结构和功能特征,建立理想的分离和纯化乳鼠心肌细胞技术. 方法 采用胰蛋白酶消化和机械分离,结合两次差速贴壁法以及使用溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU),从生后1～7d乳鼠心脏分离和纯化心肌细胞.观察细胞的形态和自发性搏动,并用心肌特异性肌钙蛋白丁(cTnT)免疫细胞化学染色进行鉴定.利用原位透射电镜术观察细胞超微结构,并观察其对肾上腺素和异丙肾上腺素的反应. 结果 从乳鼠心脏分离的细胞95%以上为心肌细胞,存活率为95%以上.乳鼠心肌细胞包括短柱状或杆状细胞和不规则形细胞.生后1～3d鼠大部分杆状细胞呈现幼稚心肌细胞的超微结构特征.6～7d鼠的杆状细胞具有类似于成熟心肌细胞的超微结构特征,cTnT呈高表达,横纹明显.不规则形细胞含有少量肌丝束,排列不规则.少数体积较小的细胞呈现未分化细胞的超微结构特征.培养72h后80%以上的细胞出现自发性搏动.肾上腺素和异丙肾上腺素刺激后,搏动细胞数目增多,搏动增强.生后6～7d鼠杆状细胞的药物反应较强. 结论 两类心肌细胞的超微结构特征、自发性搏动和对肾上腺素和异丙肾上腺素的反应不同.生后6～7d鼠心肌细胞较适合于成熟心肌细胞的体外实验研究.本实验建立的方法 是一种较理想的乳鼠心肌细胞培养方法 .
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钙调素对培养的大鼠心肌细胞自发性搏动及增殖活性的作用
目的:观察钙调素(CaM)对培养的心肌细胞收缩功能及增殖活性的作用.方法:以培养Wistar大鼠乳鼠心室肌细胞为靶系统,观察不同含量CaM对心肌细胞自发性搏动及心肌细胞增殖活性的影响.结果:CaM能显著提高心肌细胞的自发性搏动,3H-TdR掺入CPM值明显增高,但无剂量依赖性.结论:CaM能促进心肌细胞增殖,提高心肌细胞对钙离子的摄取.
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乳鼠心室肌细胞分离培养及鉴定方法的改良
目的 探讨乳鼠心室肌细胞佳培养及纯化的方法,为基础研究工作提供可靠的细胞模型.方法 用0.25%胰蛋白酶分离乳鼠心室肌细胞,并用差速贴壁分离法和5-溴脱氧尿嘧啶(Brdu)纯化心肌细胞;通过光镜、透射电镜、免疫组化等观察和鉴定心肌细胞.结果 光电显微镜下见细胞由圆形变为棱型或多角型,逐渐形成细胞簇或细胞单层,搏动频率50～160次/min;用抗肌动蛋白α-actin的单克隆抗体鉴定心肌细胞呈阳性,见胞浆呈淡黄棕色;透射电镜可见肌小节、Z线、闰盘等.结论 用胰蛋白酶培养的心肌细胞培养时间短、成功率高,是一种快速简便、值得进一步推广的方法
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体外自发性搏动乳鼠原代心肌细胞的分离培养及超微结构
目的:通过对SD乳鼠体外自发性搏动的心肌细胞(CMs)分离培养,并观察其超微结构,以了解心肌干细胞的特性.方法:用体外分离、纯化培养SD乳鼠自发性搏动的心肌细胞,应用倒置显微镜及透射电镜观察其形态结构与超微结构,并进行心肌特异性标志troponin I(cTnI)的免疫细胞化学鉴定.结果:体外分离、纯化培养出心肌细胞,细胞具有自发性搏动特性,表达心肌特异性抗体Tropnin I.电镜下可见细胞内出现肌丝样结构及Z线结构,细胞普遍存在肌小节,细胞间有闰盘连接;部分细胞表面有大量微绒毛,细胞器丰富,可见内质网、线粒体.结论:体外可分离培养扩增出自律性搏动的CMs,这些细胞表现增殖活跃,具有干细胞的增殖旺盛特性.
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乳鼠心肌细胞的原代培养
目的:观察原代培养的乳鼠心肌细胞的形态学特征.方法:使用Ⅱ型胶原酶、胰蛋白酶和DNaseⅠ消化心脏组织,差速贴壁分离法和化学试剂抑制法纯化心肌细胞.结果:第1天心肌细胞几乎全部贴壁,少数细胞出现自发性搏动;第3天形成细胞簇或细胞单层,收缩明显而有力;透射电镜可见肌小节、Z线、闰盘;良好的形态和活力可维持20 d.结论:使用Ⅱ型胶原酶、胰蛋白酶和DNaseⅠ分离培养心肌细胞可获得形态、活力良好的心肌细胞,该方法值得进一步推广.
