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Jo-1抗原的提取和纯化
目的 改进从兔胸腺中纯化能用于斑点印迹法检测抗-Jo-1抗体、Jo-1抗原的方法.方法 用PBS提取兔胸腺匀浆中的ENA,经丙酮沉淀上清中的总蛋白制成兔胸腺丙酮粉,再经以特异性抗-Jo-1抗血清中的IgG为配体制备的亲和色谱柱对Jo-1抗原纯化,得到高比活的制品.结果 100 g兔胸腺可制得5～7 g丙酮粉,其中的蛋白质含量为19%～24%.经亲和色谱分离的洗脱峰组分约可富集Jo-1抗原1900倍,抗原活性回收率为2.5%,并只对抗-Jo-1抗血清有特异性反应.虽然在SDS-PAGE上洗脱峰组分并非单一条带,但免疫印迹只发现50 ku处有阳性条带.在含有MgCl2的水溶液中,高纯度的Jo-1抗原能长时间保持高活性.结论 亲和色谱法可从兔胸腺中纯化出满足斑点印迹法检测抗-Jo-1抗体要求的抗原,并有可能成为大量获取高纯度Jo-1抗原的方法.
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兔胸腺、猪脾丙酮粉的制备及ENA的提取
ENA全称为Extractable nuclear antigen,即可提取性核抗原,包括Sm、U1-RNP、SSA、SSB、Jo-1、Sc1-70、rRNP、Ku、PCNA、Mi-1、Mi-2、PM-1等.ENA抗体是抗核抗体中种类多、为重要的一族抗体谱,是自身免疫性结缔组织病中常见的自身抗体.本文拟从兔胸腺和猪脾中制备ENA丙酮粉,探索简便可行的浓缩ENA蛋白抗原的方法,以达到提高检测抗ENA抗体阳性率的目的,终向基层医院推广.
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兔胸腺HMGN2的分离纯化鉴定
目的:分离纯化鉴定兔高迁移率非组蛋白N2(High mobility group chromosomal protein N2,HMGN2).方法:利用液氮研磨和5%高氯酸从新鲜兔胸腺组织获得酸溶性萃取物,经反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离得到HMGN2,经过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western-blotting对HMGN2进行分子量测定和特异性鉴定.并利用琼脂糖弥散抑茵实验对其杀菌活性进行鉴定.结果:利用上述方法分离纯化出高纯度的兔HMGN2.对大肠埃希茵临床分离株54080、大肠埃希茵ATCC25922有明显杀菌活性.结论:建立简单分离高纯度的HMGN2的方法.
