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Trop-2在结直肠癌组织中的表达及其意义
目的 探讨人滋养层细胞表面抗原-2(Trop-2)在结直肠癌中的表达及其意义.方法 用免疫组化法检测84例结直肠癌组织标本及其相对应的癌旁正常组织中的Trop-2表达情况,分析其表达与临床病理特点的关系,进一步采用Westem blot检测34例手术标本的Trop-2表达情况.结果 Trop-2在结直肠癌组织中的表达高于癌旁正常组织(P ＜0.05);Trop-2表达量:直肠癌(RC)组＞左半结肠癌(LSCC)组＞右半结肠癌(RSCC)组(P＜0.05),Dukes'C+D组＞A+B组(P＜0.05),淋巴结转移组＞无淋巴结转移组(P＜0.05),远处转移组＞无远处转移组(P＜0.05);与性别、年龄、分化程度无关.结论 Trop-2在结直肠癌组织中高表达,与Dukes分期、淋巴结转移、远处转移和肿瘤所在部位有关.
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人肺腺癌组织和细胞系TROP-2表达的初步研究
目的:检测人滋养层细胞表面抗原-2(TROP-2)在人肺腺癌组织和细胞系中的表达,探讨其与临床病理因素和预后的关系.方法:流式细胞术检测5株人肺腺癌细胞系、1株永生化正常人支气管上皮细胞系中TROP-2的表达,RT-PCR检测11例、免疫组化检测46例肺腺癌组织中TROP-2的表达,并结合临床病理因素及预后进行分析.结果:人肺腺癌细胞系中H1975、SPCA-1和PC-9有TROP-2表达,表达阳性率分别为(45.3±5.4)％、(91.4±4.6)％和(97.2±2.1)％,而在A549、H1299及正常人支气管上皮细胞系HBE中无表达.TROP-2 mRNA的表达阳性率为72.7％(8/11).TROP-2蛋白在肺腺癌组织中的阳性率(43.5％,20/46)明显高于癌旁正常肺组织(0,0/11)和肺良性病变组织(9.5％,2/21),P=0.001.肺腺癌TROP-2的表达与肿瘤淋巴结转移(P=0.02)和TNM分期(P=0.02)相关,与患者术后生存期呈负相关趋势,但差异无统计学意义,P=0.068.结论:TROP-2在肺腺癌组织及肺腺癌细胞系中均有较高表达,可能在肺腺癌发生发展中发挥重要作用.
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siRNA下调TROP-2基因表达对人胰腺癌细胞迁移和侵袭的影响
目的 探讨TROP-2基因小干扰RNA对胰腺癌细胞迁移、侵袭的影响.方法 培养人胰腺癌CFPAC-1细胞株,采用TROP-2基因小干扰RNA转染胰腺癌细胞株,分别以荧光实时定量PCR和免疫荧光方法观察TROP-2基因的mRNA和蛋白水平,随后以划痕法观察癌细胞迁移、以Boyden法检测癌细胞侵袭力.结果 以TROP-2 siRNA转染胰腺癌CFPAC-1细胞后,癌细胞TROP-2基因mRNA和蛋白含量明显下降,且呈时间和浓度依赖性(P<0.001;P<0.001);划痕试验和Boyden试验结果显示,细胞迁移和侵袭力均明显下降,且呈浓度依赖性(P<0.001;P<0.001).结论 TROP-2基因可能在胰腺癌细胞迁移和侵袭中发挥着重要作用;以siRNA转染胰腺癌细胞,可抑制胰腺癌细胞的迁移和侵袭能力.
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靶向Trop-2CAR-T细胞的制备及其体外对卵巢癌细胞杀伤作用的研究
目的:制备靶向人滋养层细胞表面抗原2(human trophoblast cell surface antigen 2,Trop-2)的嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T cell,CAR-T),观察Trop-2 CAR-T细胞在体外对卵巢癌细胞增殖的影响.方法:运用分子克隆及基因重组技术构建Trop-2 CAR;采用Western blot检测Trop-2 CAR在293T细胞中的表达;CCK-8法检测Trop-2 CAR-T细胞对卵巢癌细胞增殖的影响;ELISA检测细胞因子分泌的变化.结果:酶切鉴定及测序分析结果表明,Trop-2 CAR各基因片段连接正确;Western blot检测结果显示,该质粒能够在293T细胞中有效表达;CCK-8结果显示,制备的Trop-2 CAR-T细胞在体外能明显抑制表达Trop-2的卵巢癌细胞的增殖(P＜0.05);ELISA检测结果表明Trop-2 CAR-T细胞与表达Trop-2的卵巢癌细胞共培养后,干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、白介素(interleukin-2,IL-2)细胞因子分泌增加(P＜0.01).结论:该研究成功制备了Trop-2 CAR-T细胞,可有效抑制Trop-2表达阳性的卵巢癌细胞的增殖.
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全人源抗Trop-2IgG的制备及对卵巢癌细胞生物特性的影响
目的:构建全人源抗人滋养层细胞表面抗原2(human trophoblast cell surface antigen 2,Trop-2)抗体IgG真核表达系统,表达并纯化该抗体,并检测其对卵巢癌细胞生物特性的影响.方法:构建全人源抗Trop-2抗体IgG的重组表达载体;在293 FreeStyle (293F)真核表达体系中表达并纯化该抗体.使用SDS-PAGE、ELISA、亲和力测定、免疫荧光等方法鉴定该抗体并分析其免疫学活性;使用cell counting kit-8(CCK-8)法、划痕实验、Transwell实验和细胞凋亡实验分析其对卵巢癌细胞特性的影响.结果:成功制备出全人源抗Trop-2 IgG;经多种方法检测,该抗体能与Trop-2蛋白特异性结合;对表达Trop-2的卵巢癌细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡有明显影响.当抗体浓度为400 μg/mL时,卵巢癌细胞HO8910的生存率仅为55.95％(P＜ 0.01),划痕愈合率仅为24.71％(对照组为70.80％,P＜ 0.01),侵袭细胞数是对照组的32.11％(P＜ 0.05),细胞凋亡率是对照组的2倍(P＜0.05).结论:全人源抗Trop-2 IgG可特异性识别卵巢癌细胞表面的Trop-2蛋白,对卵巢癌细胞的恶性行为具有明显的抑制作用.因此,全人源抗Trop-2 IgG在卵巢癌的靶向治疗中有潜在应用价值.
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稳定表达Trop-2基因的NIH3T3细胞系的构建和特性分析
目的:建立稳定表达人滋养层细胞表面抗原(Trop-2)NIH3T3细胞,分析过表达Trop-2对NIH3T3细胞的生长、增殖和侵袭特性的影响.方法:将Trop-2基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1,转染NIH3T3细胞,通过G418筛选及RT-PCR鉴定获得稳定表达Trop-2的NIH3T3细胞(NIH3T3-Trop-2).用MTS法检测NIH3T3-Trop-2细胞的增殖能力,软琼脂集落形成实验检测NIH3T3-Trop-2细胞的克隆形成能力,明胶酶谱法检测NIH3T3-Trop-2细胞的基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的分泌及细胞划痕实验检测NIH3T3-Trop-2细胞的迁移能力.结果:稳定表达Trop-2的NIH3T3细胞在生长增殖、克隆形成及侵袭能力均较NIH3T3细胞强,细胞培养上清中的MMP-2和MMP-9增多.结论:Trop-2对细胞的增殖与迁移能力具有明显的促进作用.
