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寻常型天疱疮的Dsg3特异性抗体反应及其基因限制性
探讨寻常型天疱疮中的自身抗原桥粒芯蛋白(Dsg3)特异性抗体反应及其基因限制性,为自身免疫性疾病机制的研究提供依据.采用RT-PCR法克隆自身抗原Dsg3E1,E2,E3,E4,E5多肽片段的cDNA,定向插入表达载体PGEX-2T,导入大肠杆菌JM109中表达重组融合蛋白并经GST层析柱纯化,进一步经免疫印迹法与PV患者阳性血清反应;应用序列特异性引物聚合酶链式反应(SSP-PCR)技术对HLA-Ⅱ类等位基因进行特异性体外扩增,分析了天疱疮患者HLA基因的DR位点和DRB1、DQB1多态性.Dsg3 E1,E2和E4可与PV患者阳性血清反应,而不与疾病对照组、正常对照组反应.在10个PV患者中,均携带HLA的DR4或/和DR14抗原,有7个DRB1*0402,4个DRB1*1401,7个DQB1*0302,4个DQB1*0503.Dsg3E1,E2和E4中包含抗体反应相关的抗原表位,HLA DRB1*0402和DQB1*0302与PV发病中抗E4抗体反应密切相关.
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Dsg3刺激诱导天疱疮患者一级亲属T细胞活化的研究
目的 研究在特异抗原桥粒芯糖蛋白3(desmoglein3,Dsg3)刺激下寻常型天疱疮(PV)患者一级亲属淋巴细胞Th1/Th2、Tc1/Tc2极化状态的变化,探讨PV发生机制.方法 PV患者一级亲属外周血单个核细胞(PBMC)在Dsg3刺激下体外培养3 d,流式细胞仪四色胞内染色分析PV患者一级亲属CD4~+ T细胞和CD8~+T细胞中IFN-γ~+和IL-4~+细胞的百分率,观察PV患者一级亲属Th1/Th2、Tc1/Tc2比例的变化.结果 PV抗体阳性一级亲属中的PBMC经Dsg3刺激培养者与未经Dsg3刺激者比较,Th2、Tc2百分率均显著升高(10.13%±3.72%vs 7.28%±3.58%,20.01%±10.43% vs 14.91%±8.06%,P<0.05);经Dsg3刺激培养后PV抗体阳性一级亲属组与正常对照组比较Th2、Tc2百分率均显著升高(10.13%±3.72%VS 6.10%±2.82%,20.01%±10.43% vs9.58%±5.49%,P<0.05).结论 特异性抗原Dsg3刺激下,自身反应性T细胞活化,Th1/Th2、Tc1/Tc2细胞分化失衡,可能在PV的启动阶段发挥重要作用.
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膀胱尿路上皮癌伴鳞状分化中DSG3、MAC387及p40的表达及其临床意义
目的 探讨DSG3、MAC387及p40在膀胱尿路上皮癌伴鳞状分化中的表达及其在诊断和鉴别诊断中的意义.方法 对18例膀胱尿路上皮癌伴鳞状分化进行常规形态学观察和免疫组化EnVision两步法染色,另收集12例膀胱鳞状细胞癌和15例普通膀胱尿路上皮癌作为对照分析.结果 DSG3、MAC387及p40在膀胱尿路上皮癌伴鳞状分化中的表达分别为15例(83％)、17例(94％)和17例(94％),在膀胱鳞状细胞癌中的表达分别为11例(92％)、12例(100％)和12例(100％),在普通膀胱尿路上皮癌中的表达分别为2例(13％)、4例(27％)和12例(80％).结论 DSG3和MAC387在膀胱尿路上皮癌伴鳞状分化中的表达有较高的敏感性和特异性.
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Dsg1、Dsg3抗体检测在天疱疮疾病诊断和治疗中的应用
目的 探讨抗桥粒芯蛋白Dsg1、Dsg3抗体水平在天疱疮诊断和病情评估中的应用价值.方法 选择经组织病理及直接免疫荧光法检查确诊的63例天疱疮患者(试验组)及同期40例排除大疱性皮肤病诊断的健康人群(对照组),分别采集静脉血使用酶联免疫吸附法检测血清中抗桥粒芯蛋白Dsg1、Dsg3抗体,对比酶联免疫吸附法与直接免疫荧光法两者符合率,分析Dsg1、Dsg3抗体水平与临床病情的相关性.结果 63例经组织病理及直接免疫荧光法检查确诊的天疱疮患者利用酶联免疫吸附法检测其血清中抗桥粒芯蛋白Dsg1、Dsg3抗体水平与直接免疫荧光法对比结果的一致性(符合率)为88.89%.抗桥粒芯蛋白Dsg1抗体水平治疗中及治疗后(158.70±62.62、81.98±45.23)与治疗前(232.61±80.67)有显著性差异(P<0.05),Dsg3抗体水平治疗中及治疗后(52.24±15.58、39.58±52.72)与治疗前(78.87±13.7)有显著性差异(P<0.05).结论 酶联免疫吸附法检测患者血清中抗桥粒芯蛋白Dsg1、Dsg3抗体水平用于天疱疮疾病的诊断与直接免疫荧光法一致性较高,且血清中抗桥粒芯蛋白Dsg1、Dsg3抗体水平与病情疗效呈正相关性,可用于疾病治疗疗效观察.
