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伪狂犬病病毒gE基因主要抗原表位区在大肠杆菌中的表达与gE乳胶凝集鉴别诊断方法的建立
将伪狂犬病病毒(PRV)Ea株gE基因主要抗原表位区段融合到原核表达载体pET28b的T7启动子下游,构建成原核表达质粒,经IPTG诱导,SDS-PAGE和Western blot印迹分析,证实gE基因主要抗原表位区在大肠杆菌中获得了表达,表达产物具有抗原性,分子量为38kD,位于包涵体中.包涵体经变性、复性处理,复性产物致敏乳胶,并对抗原致敏浓度、致敏时间、致敏温度进行优化,建立了gE乳胶凝集试验(gE-LAT).该方法不仅能显著区分gE基因缺失疫苗免疫猪血清和野毒感染猪血清,而且具有简便、快速等优点.检测临床360份猪血清,阳性率为57.78%(208/360),比国外阻断gE-ELISA的58.06%(209/360)略低,阳性符合率为94.86%(203/214),总符合率为96.94%(349/360),两种检测方法结果差异不显著(P＞0.05).
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伪狂犬病病毒上海株gE和gI基因的克隆及缺失转移载体的构建
根据已发表的伪狂犬病病毒(Pseudorabies Virus,PRV)的gI和gE基因序列,设计两对引物用PCR方法扩增出PRV-SH gI和gE基因,将其克隆入pUC18载体中,获得了缺失部分gI基因的转移载体质粒,命名为pgEI.
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伪狂犬病病毒Min-A株gE主要抗原表位基因的克隆与鉴定
目的:获得PRV gE主要抗原表位基因,构建PRV gE重组表达载体.方法:根据伪狂犬病病毒Min-A株gE基因序列,设计一对引物,采用PCR方法扩增PRV gE基因主要抗原表位区约642bp的片段,将产物克隆到PGEM-7Z载体中,测序正确后再将其亚克隆到原核表达载体pET-32a中,提取质粒作限制性内切酶分析和序列测定.结果:限制性核酸内切酶酶切鉴定表明,扩增出了PRV gE主要抗原表位基因,测序结果经BLAST分析与GenBank中注册的序列完全一致.结论:成功克隆了PRV gE主要抗原表位基因的原核表达载体.
