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鸡痘病毒载体启动子的优化
要提高外源基因在鸡痘病毒(FPV)载体的表达量,必须使用强启动子来控制表达.为构建较强的启动子组合,根据痘苗病毒天然启动子P7.5的结构,人工合成4条寡核苷酸,形成一个早期启动子和一个晚期启动子,其首尾可相互连接.利用分子生物学常用实验方法把合成的启动子进行不同组合,终形成10个较有代表性的启动子组合PS1~10.在其下游插入大肠杆菌β-半乳糖苷酶基因LacZ,并进一步构建成鸡痘病毒转移载体pFBS1~10,同时以P7.5作对照构建成pFB7.5.以脂质体介导转染鸡痘病毒中国疫苗株282E4感染3h~4h后的原代鸡胚成纤维细胞(CEF)单层.用蓝斑筛选法纯化病毒4次,终得到稳定的重组病毒.将纯化的重组病毒感染次代CEF,分别于感染后10h、24h、36h、48h、72h收获细胞,制备提取物,检测提取物中β-半乳糖苷酶的活性.通过计算比较,筛选出其中较强的启动子组合LLEE,其表达活性约为P7.5的3.5倍,为进一步构建高效表达的鸡痘病毒通用载体打下了良好的基础.
关键词: 人工合成 强启动子 β-半乳糖苷酶的活性 鸡痘病毒 -
光动力学治疗诱发正常大鼠脑血管新生成
背景与目的血管内皮生长因子(VEGF)与其受体:FIk和FIt是内皮细胞介导血管生成的强启动子,血管生成对肿瘤生长至关重要.光动力学疗法(PDT)已经应用于神经胶质瘤治疗.用PDT治疗固体恶性肿瘤涉及到系统给药后,光敏剂富集在肿瘤部位后受光激发,光敏剂在肿瘤组织内的定位和光照产生活性氧物种(ROS)使之能杀伤肿瘤部位,而对正常组织损伤较小.临床对PDT治疗恶性胶质瘤的研究表明能引起胶质瘤坏死延长患者生存期,然而PDT治疗中枢神经系统(CNS)肿瘤没有很好的确定结果.
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细菌基因盒-整合子系统与细菌耐药性
细菌耐药性逐年上升和耐药性快速传播近年来已成为临床治疗感染性疾病的难题,细菌常见的对抗和逃避抗菌药物的方式,是从外源获得耐药基因,而耐药基因的传播可以是从一个细菌到另一个细菌,也可以从一个DNA分子到另一个DNA分子.整合子-基因盒系统于1991年由Hall正式提出[1],是细菌的天然克隆与表达系统,能捕获外来耐药基因,在整合子中可形成多种耐药基因的组合、排列,整合于整合子上的基因盒可借助整合子的强启动子而得以表达,是近年来发现的细菌耐药性传播的机制之一.
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泛素启动子的研究进展
泛素系统广泛存在于真核生物,对调节细胞内蛋白周转,参与细胞多种生命过程有重要作用,其基因家族中的泛素启动子更是在增强基因表达的长期性,稳定性等方面有显著功效.人源性泛素启动子作为一种非病毒性的强启动子,将在基因治疗中起到举足轻重的作用.因而,对它的研究具有很强的现实意义.