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人乙型肝炎病毒前表面抗原(preS)基因的突变及其在家蚕细胞中影响表达的研究
为探讨人乙型肝炎病毒(HBV)前表面抗原(preS)基因的表达调控机理,以实现高效表达,利用PCR方法在克隆的preS基因的第2、3位密码子引入同义突变,消除存在于5＇端编码区保守的反向重复序列,将preS基因及其突变形式(MpreS)分别重组到转移载体pBM030,获得pBM-preS和pBM-MpreS.将pBM-preS和pBM-MpreS分别与野生型家蚕核型多角体病毒(BmNPV)DNA共转染家蚕培养细胞(BmN),经空斑筛选和杂交证实,分别获得重组病毒rBmNPV-preS和rBmNPV-MpreS.RNA点杂交和ELISA结果表明:虽然在rBmNPV-preS和rBmNPV-MpreS感染的BmN细胞内都转录了preS基因,但仅后者表达出preS蛋白,提示preS基因的表达与基因内部起始区的反向重复序列密切相关.
关键词： 乙型肝炎病毒(HBV) 前表面抗原(preS) 突变 杆状病毒载体 家蚕 -
人乙型肝炎病毒前表面抗原preS基因的克隆与序列分析
从杭州、兰州两地各一例乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原阳性血清中提取病毒DNA,采取PCR技术扩增出前表面抗原(preS)基因片段,重组到质粒载体上,对该基因进行了全序列测定[GenBank 索取号 CpreS-HZ:AF 325674;preS-LZ:AF 325675].克隆的HBV preS基因杭州分离物(preS-HZ)和兰州分离物(preS-LZ)全长522个核苷酸,编码174个氨基酸.preS-HZ与已发表的HBV adr亚型上海分离物[8]、北京分离物[9]、日本分离物[5]、HBV adw亚型[10]和ayw亚型[11]preS基因的核苷酸序列同源性分别为96.7%、96.2%、97.3%、88.7%和84.1%,氨基酸序列同源性分别为96.0%、94.9%、97.1%、85.1%和85.4%;preS-LZ与相应序列的核苷酸序列同源性分别为96.4%、96.2%、96.9%、88.7%、83.7%,氨基酸序列同源性分别为94.9%、94.9%、96.0%、85.1%、84.1%.分子进化分析(DNASTAR,1999)表明,克隆的两例HBV preS基因属于adr亚型.preS-LZ与preS-HZ之间有两个核苷酸变异(对应两个氨基酸变异),相对于以上报道的序列二者含有四个特异的氨基酸突变位点.在免疫保护区内二者具有较好的保守性,可用于表达乙肝重组亚单位疫苗.
关键词： 乙型肝炎病毒(HBV) 前表面抗原(preS) DNA序列
