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抗发热伴血小板减少综合征病毒结构蛋白单克隆抗体的制备和功能分析
为制备抗发热伴血小板减少综合征病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV)结构蛋白的单克隆抗体,本研究用灭活纯化的SFTSV病毒颗粒免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术获得分别分泌抗糖蛋白单抗和核蛋白单抗的杂交瘤细胞株.用免疫荧光法和免疫沉淀方法对制备的单克隆抗体的抗原特异性进行鉴定,并初步进行单抗效价、中和活性及亲和力等功能分析.结果显示,通过细胞融合和克隆化,共筛选出13株稳定分泌抗糖蛋白(Glycoprotein,GP)单抗和7株稳定分泌抗核蛋白(Nucleoprotein,NP)单抗的杂交瘤细胞株.免疫荧光和免疫沉淀鉴定显示获得的单抗有良好的抗原特异性.抗GP单抗中6株针对Gn,7株针对Gc,大部分的间接免疫荧光(Indirect immunofluorescence assay,IFA)滴度在1 280～20 480之间,其中4株抗Gn单抗具有中和活性.获得的7株抗NP单抗均与NP特异性结合,IFA滴度范围在5 120～20 480,均无中和活性.此外,经非竞争ELISA检测的两株抗GP单抗(1C8和1G8)均有较高亲和力.本研究为SFTS诊断方法的发展及SFTSV致病机制研究奠定了基础.
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我国流行的4株狂犬病街毒株G基因序列及分子流行病学研究
目的探讨我国流行的狂犬病毒(RV)基因差异,评价现有疫苗的适用性.方法通过RT-PCR并对其产物测序后获得4株RV街毒株的G基因序列以及G与M和L基因的区间序列.利用计算机分析软件比较4株RV与已经发表的毒株的核苷酸和推导的氨基酸序列.结果糖蛋白(GP)完整的编码基因序列长度为1 575bp.GP氨基酸序列同源性明显高于相应的核苷酸序列(除Mokola外),4株街毒与GTN的同源性高于gG株.GP不同区段比较显示,膜外区同源性高于膜内区.G-M区间核苷酸序列长度为5bp;除广西4外,其余毒株100%同源.G-L区间核苷酸序列长度为24 bp,越1与肥东同源性为100%.结论4株RV均属于基因I型.广西的毒株之间存在不同的来源.街毒与疫苗株之间基因存在差异.4株RV与SAD-B19进化途径相近,与PV株相差较远.越1与肥东株亲缘关系极近,可能是由同一毒株演化而来.
