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逍遥散对慢性束缚应激模型大鼠行为学和下丘脑弓状核NPY及受体Y1表达的影响
目的 观察逍遥散对慢性束缚应激模型大鼠行为学和下丘脑弓状核中神经肽Y(NPY)及其受体Y1(NPY-Y1)表达的影响,探讨其对抗应激损伤的作用机制及靶点.方法 125只SD大鼠随机分为3组:正常组(25只)、模型组(50只)、逍遥散组(50只).采用每天3h,连续21日肢体束缚的方法建立慢性应激动物模型.动态监测各组大鼠体重及摄食量,借助旷场实验观察各组大鼠行为学指标变化,并运用免疫荧光染色法、RT-qPCR法,分别检测不同时段各组大鼠下丘脑弓状核(ARC)中神经肽Y(NPY)、神经肽Y受体Y1(NPY-Y1)蛋白和mRNA的表达情况.结果 与同时间点正常组比较,模型组7、14、21日大鼠体重及14、21日摄食量减少,21日5 min内总穿格数、站立次数、修饰次数减少,7、21日下丘脑ARC NPY、NPY-Y1表达阳性面积、积分光密度、平均光密度及NPY、NPY-Y1 mRNA表达降低(P ＜0.05,P＜0.01).与同时间点模型组比较,逍遥散组14、21日大鼠体重及21日摄食量增加,7日5 min内总穿格数减少,21日5 min内总穿格数和修饰次数明显增加,7、21日NPY表达阳性面积、积分光密度增加,21日NPY-Y1表达阳性面积、平均光密度和积分光密度增加,7日NPY-Y1 mRNA表达降低,而7、21日NPY mRNA及21日NPY-Y1 mRNA表达升高(P ＜0.05,P＜0.01).结论 逍遥散可通过上调慢性束缚应激模型大鼠下丘脑ARC中NPY、NPY-Y1受体蛋白及基因表达,调节机体能量代谢,改善肝郁样情绪、行为障碍,这可能是其疏肝健脾以拮抗慢性应激损伤的内在机制之一.
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与人体肥胖相关的神经肽Y受体Y1基因的克隆及序列分析
目的 克隆与肥胖相关的人神经肽Y受体Y1(NPYlR)基因,并鉴定该克隆基因序列的正确性.方法 从人的脂肪组织中提取总RNA并进行反转录,以此为模板用PCR扩增NPY1R基因的cDNA,然后与pET 28a+载体重组,筛选阳性克隆和DNA序列分析鉴定,测序后与GeneBank中NPY1R基因进行同源性比较和序列分析.结果 PER扩增出一个1100 bp左右的DNA片段,与载体重组后DNA序列分析鉴定,DNA序列分析显示克隆的DNA片段是人NPY1R基因,且所克隆的基因共编码384个氨基酸,分子量为44 KD,与GeneBank中NPY1R基因序列同源性达100%.结论 克隆的人NPY1R基因与GeneBank中NPY1R序列完全一致,为进一步应用分子生物学技术深入研究NPY1R与人体肥胖发生、发展及转化等相关作用机制及应用该基因进行其基因蛋白表达奠定了基础.
