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脾气虚证大鼠尿液生物标记物的识别及其生物学意义
考察脾气虚证大鼠尿液小分子代谢组成分,寻找脾气虚证的标记物,阐明其与代谢通路之间的联系.采用劳倦伤脾加限制饮食的方法构建大鼠脾气虚证动物模型,分别进行D-木糖吸收实验及血常规检测.收集的尿液采用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用(UPLC-Q-TOF-MS)分析,尿液代谢指纹图谱数据集进行主成分分析(PCA)和正交偏小-判别分析(OPLS-DA)等统计学分析,筛选脾气虚证的生物标记物.D-木糖和血常规测定结果表明脾气虚证大鼠造模成功.正、负离子模式下的PCA,OPLS-DA得分图显著区分模型组和空白组.根据OPLS-DA分析的S-plot图、VIP值、t检验及受试者特征曲线ROC下的面积(AUC),筛选并鉴定出苯丙氨酸、琥珀酸、乌头酸、异柠檬酸、甜菜碱、犬尿酸、吲哚、肌酸、肌酸酐、乳清酸、黄嘌呤、黄嘌呤酸等24个脾气虚证相关的生物标记物,主要涉及能量代谢、氨基酸代谢、色氨酸代谢、嘌呤代谢、嘧啶代谢.尿液代谢组学方法结合在线软件包进行数据处理解析代谢通路,可为脾气虚证及其他中医证候的研究提供新的方法和思路.
关键词： 脾气虚证 代谢组学 代谢指纹图谱 超高效液相色谱-飞行时间质谱联用 生物标记物 -
UHPLC-QTOF-MS法分析鉴定吴茱萸水提物在大鼠血浆、尿液和粪便中的原形成分及其代谢产物
采用UHPLC-QTOF-MS技术,对吴茱萸水提物的主要成分及给药后大鼠体内的原形成分及其代谢产物进行定性分析.通过分析各成分的保留时间、精确分子质量、一级、二级质谱信息并与相应的对照品比对,从吴茱萸水提物中鉴定了27个成分,其中25个成分经对照品确证;从灌胃给予吴茱萸水提物的大鼠血浆、尿液和粪便中鉴定、推测出16个原形成分和35个代谢产物,16个原形成分均经对照品确证.吴茱萸水提物的主要成分有酚酸、黄酮苷、柠檬苦素和生物碱.生物碱、黄酮和酚酸存在于血浆、尿液和粪便中,柠檬苦素主要存在于尿液和粪便中.这些成分在大鼠体内代谢的主要途径有羟基化、氢化、甲基化、硫酸化、葡糖醛酸化等.该研究基本明确了吴茱萸水提物中各类成分在大鼠体内的主要存在形式,为吴茱萸体内药效物质的阐明提供了参考.
关键词： 吴茱萸 水提物 原形成分 代谢产物 超高效液相色谱-飞行时间质谱联用 -
UPLC Q-TOF MS法快速检测复方咳喘王胶囊中非法掺入5种化学物质
目的:建立超高效液相色谱-飞行时间质谱联用法(UPLC Q-TOF MS)检测复方咳喘王胶囊中非法添加的盐酸二氧丙嗪、马来酸氯苯那敏、磺胺甲噁唑、醋酸泼尼松及甲氧苄啶.方法:复方咳喘王胶囊用甲醇提取,采用UPLC Q-TOF MS法检测,色谱条件为:Algient ZORBAX SB C18柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm),流动相:10 mmol·L-1醋酸铵溶液(含0.1%甲酸)-甲醇梯度洗脱,流速:0.3 ml·min-1,柱温:35℃,正离子扫描检测.结果:复方咳喘王胶囊中非法掺入盐酸二氧丙嗪、马来酸氯苯那敏、甲氧苄啶、磺胺甲噁唑及醋酸泼尼松的保留时间和对照品相同,经Targeted MS/MS法进一步得到快速确证.结论:本方法操作简便,结果可靠,可用于快速确证复方咳喘王胶囊中非法添加的盐酸二氧丙嗪、马来酸氯苯那敏、甲氧苄啶、磺胺甲噁唑及醋酸泼尼松.
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基于尿液代谢组学探讨淫羊藿大极性黄酮对大鼠内源性物质代谢的影响
目的 运用代谢组学方法 研究淫羊藿大极性黄酮(EHPF)对正常生理状态大鼠尿液中内源性物质代谢的影响.方法SD大鼠随机分为空白组、EHPF组,每组10只,EHPF组灌胃给予EHPF提取物21.6 mg·kg-1,空白组给予等体积蒸馏水,每日1次,连续20 d,于末次给药后代谢笼收集大鼠12 h尿液,处理后采用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用(UPLC-TOF/MS)分析,所得结果 进行多元数据分析、 潜在生物标志物鉴定及生物学意义分析.结果鉴定出6个潜在生物标志物,归属5条主要代谢通路,EHPF可使5-羟吲哚乙醛和5-甲氧基吲哚乙酸表达升高,促进色氨酸及5-羟色胺代谢途径;还可降低肾上腺素和L-甲状腺原氨酸水平,可能对神经系统、 心血管系统、 免疫系统具有一定的保护作用;同时EHPF对肉豆蔻酸和三丁酸甘油酯有明显的降低作用,也表现出可能不利于发生炎症时的保护作用及预防肿瘤疾病的潜在毒性.结论 EHPF对正常生理状态大鼠的神经系统、 心血管系统、 免疫系统具有潜在干预作用,为淫羊藿黄酮类化合物的安全使用及其治疗潜能的开发提供了一定依据.
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超高效液相色谱-飞行时间质谱联用法检测牙痛灵胶囊中非法添加的4种化学成分
目的 采用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用法(UPLC-Q-TOF-MS)检测牙痛灵胶囊中非法添加的甲硝唑、马来酸氯苯那敏、吡罗昔康及醋酸泼尼松.方法 采用Agilent Zorbax SB C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8 μm),流动相为10mmol·L-乙酸铵溶液-甲醇,梯度洗脱,流速0.3 mL· min-1,柱温35℃,正离子扫描检测.结果 牙痛灵胶囊中非法掺入的甲硝唑、马来酸氯苯那敏、吡罗昔康及醋酸泼尼松的保留时间与相应对照品的相同,并经Targeted MS/MS进一步得到快速确证.结论 所用方法操作简便、结果可靠,可用于快速确证牙痛灵胶囊中非法添加的甲硝唑、马来酸氯苯那敏、吡罗昔康和醋酸泼尼松.
