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人参Ri质粒转化及代谢产物对HepG2细胞的作用
目的:发状根生产的次生代谢产物含量比植物自身合成的含量高几倍甚至几十倍,利用人参发状根可以生产大量人参皂苷,并有效的抑制癌细胞的增值.方法:通过正交试验设计筛选人参发状根诱导的条件,通过发状根生物积累量和皂苷含量的测定确定培养条件,然后利用MTT法测定了人参皂苷对HepG2细胞的影响.结果:本实验优化了人参发状根的佳诱导条件,吸光度A 0.6,侵染时间为10 min,预培养时间为3d,筛选出发状根的佳培养条件,MS培养基,pH6.1,24℃培养时,发状根的生物积累量和皂苷含均较高,采用人参总皂苷对肝癌细胞HepG2的抑制效果进行研究,证实人参总皂苷对HepG2的抑制率与给药浓度呈正相关.结论:筛选出适的人参发状根诱导及培养条件,不同部位的总皂苷对肝癌细胞HepG2的增殖均具有抑制作用.
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决明Ri质粒转化根离体培养研究
目的:用Ri质粒转化决明,检测转化根培养物中蒽醌化合物的产生.方法:用叶盘法转化决明外植体诱导Ri质粒转化根并用Southern杂交加以鉴定,测定转化根的生长周期,用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography, HPLC)测定光培养及暗培养转化根中游离蒽醌化合物的质量分数.结果:决明转化根在第5～20天为对数生长期,Southern杂交证明了Ri质粒T-DNA转移并整合到植物基因组中,HPLC结果说明暗培养转化根中芦荟大黄素等6种游离蒽醌化合物含量为光培养的2倍多.结论:决明转化根培养周期为35 d较为适宜;暗培养有利于决明转化根的生长及游离蒽醌化合物的积累.
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发根农杆菌Ri质粒及其在植物次生代谢产物研究中的应用
对发根农杆菌的性质及其Ri质粒的结构和功能,毛状根的转化方法,毛状根培养物的特点,Ri质粒在植物次生代谢产物中的应用进行了综述.表明了利用毛状根培养是生产植物次生代谢产物的一条新途径.
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发根农杆菌对药用植物遗传转化研究进展
就发根农杆菌转化药用植物机制,感染植物的方法,影响遗传转化的因素,毛状根培养以及获得药用植物次生代谢产物等方面作了详细的综述.
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发根农杆菌Ri质粒及其在植物基因工程中的应用
发根农杆菌诱导生成的毛状根具有生长迅速,遗传稳定,易于扩大培养等优点,具有良好的应用前景.文章综述了发根农杆菌及Ri质粒的特性、结构、分类、功能和侵染过程,毛状根的特点、转化、鉴定和在植物基因工程中的应用.
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发根农杆菌Ri质粒及在药用植物中的应用
近年来,随着西药抗药性及药源性疾病的增加,化学合成药由于合成困难,使得天然植物成为药用原料的主要来源之一,但由于盲目挖掘等原因,药用植物资源日渐匮乏,人工栽培品种又面临着品质退化等问题,植物中药用成分含量低,大规模提取会破坏生态平衡,用植物细胞培养的方法由于基因不稳定,需添加外源激素,不安全,大规模工业生产困难,使得从植物中获得药用产品受到很大限制?自从发现发根农杆菌可以侵染植物,并在侵染部位产生毛状根,毛根是由一个细胞发育而来,基因遗传稳定,生长迅速,易于培养,次级代谢物的生物合成量稳定甚至比原植物更高,使得农杆菌质粒的应用研究也成为世界范围的研究热点,显示出极大的应用潜力和广阔的发展前景,使得有关的研究一直方兴未艾,下面就对有关内容作一介绍.
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Ri质粒介导的毛状根技术在获得人参药用成分研究中的应用
Ri质粒介导的毛状根技术是20世纪80年代后期,在植物细胞培养技术领域中发展起来的一项新技术.它是将发根农杆菌含有的Ri质粒中的TDNA片段整合到植物细胞的DNA上,诱导出毛状根,从而建立起毛状根培养系统用于次生代谢物的生产[1].由于Ri质粒转化的毛状根具有生长快、易于培养、有用成分高、代谢通路表达完整的特点[2],在利用生物技术生产药用植物有效成分领域,显示出极大的应用潜力和广阔的发展前景.
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发根农杆菌介导的垂序商陆遗传转化体系的建立及毛状根株系生物量分析
目的 建立发根农杆菌介导的垂序商陆遗传转化体系及毛状根株系生物量分析,为利用基因工程技术开发商陆奠定研究基础.方法 活化发根农杆菌R1601,利用其不同浓度的菌液对垂序商陆的叶片和茎段进行转化,利用PCR技术鉴定毛状根;随机选取毛状根培养,鉴别不同株系间的生物量差异.结果 垂序商陆对发根农杆菌R1601侵染敏感,4个浓度都能高效诱导垂序商陆形成毛状根,其中A600为1.0时,茎段和叶片的遗传转化效率都能达到100％;PCR鉴定表明毛状根中已经整合进了T-DNA序列;不同毛状根株系生物量分析表明毛状根株系生物量呈极显著差异.结论 建立了发根农杆菌R1601介导的垂序商陆的高效遗传转化体系,不同毛状根株系间生物量存在极显著差异.
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Ri质粒介导药用植物的研究进展
发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(Agrobacterium)一类革兰氏阴性土壤农杆菌,可以侵染大多数双子叶植物和少数单子叶植物[1],甚至是裸子植物[2,3]而诱发植物产生毛状根.近30年来,人们逐渐认识到产生这一现象的本质是发根农杆菌携带的Ri质粒侵染植物而使其产生毛状根.随着对Ri质粒分子生物学研究的不断深入,人们对发根农杆菌介导的基因转移系统的认识日臻完善,Ri质粒载体成为世界范围的研究热点,涉及果树、蔬菜、花卉、牧草和药用植物等诸多领域,显示出极大的应用潜力和广阔的发展前景.本文就Ri质粒的生物学特性及其在介导药用植物方面的研究进展综述如下.
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发根农杆菌介导实现药用植物遗传转化的进展
发根农杆菌可转化药用植物而获得毛状根,毛状根在离体培养条件下表现出快速、大量合成代谢产物的能力.近年来许多珍贵药材面临着资源受限的状况,甚至濒临灭绝的危险,因此Ri质粒及其发根培养系统因其在有价值的次生代谢产物生产方面的优越性而被广泛重视,并成为药用资源植物可持续发展的有效途径之一.该文介绍了发根农杆菌转化药用植物的机制、感染植物的方法、影响遗传转化的因素、毛状根的培养以及获得药用植物次生代谢产物等方面的研究.
