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桑枝多糖的含量测定方法
桑枝Ramulus Mori是桑科植物桑树Morus alba L.的干燥枝干,作为养蚕业的副产物,在我国一直被用作为传统中药,临床上用于治疗关节肿痛、手足麻木、风湿痹痛、瘫痪等多种疾病[1].桑枝所含有的化学成分种类较多,主要有多糖、黄酮类化合物、香豆精类化合物和生物碱等,此外还含有挥发油、氨基酸、有机酸及各种维生素等[2].现代药理学研究表明,桑枝具有抗菌消炎[3]、降血糖[4]、免疫[5]等药理作用.但有关桑枝及其制品中多糖的检测方法及其含量的影响因素,作者至今尚未见有国内外文献报道.本研究采用正交实验法进行桑枝中多糖提取条件的优化,建立了桑枝多糖含量测定的分光光度法,并调查了不同桑品种、生长季节和老嫩程度对桑枝中多糖含量的影响.
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桑枝多糖在糖尿病小鼠肾脏损害中的保护作用及氧化应激相关机制研究
目的 分析桑枝多糖在糖尿病小鼠肾脏损害中的保护作用及氧化应激相关机制.方法 对小鼠尾静脉注射链脲佐菌素诱导小鼠糖尿病模型,并随机分为桑枝多糖组、缬沙坦组和模型组,每组各8只.另随机取8只健康小鼠为空白对照组.桑枝多糖组给予桑枝多糖1 g/h灌胃,缬沙坦组给予缬沙坦15 mg/kg灌胃,模型组与空白对照组均予以等量生理盐水,三组均持续灌胃3个月.于代谢笼中收集给药30 d小鼠24 h尿液,记录详细尿量,检测24 h尿中的白蛋白含量.于3个月后处死小鼠,采用全自动生化分析仪对小鼠血清肌酐、尿素氮进行检测,采用蛋白免疫印迹法对小鼠肾皮质中的叉头框蛋白O1(FOXO1)、沉默信息因子2相关酶1(SIRT1)和核因子κB(NF-κB)蛋白表达水平进行测定;检测小鼠肾皮质中丙二醛(MDA)、氧化氢酶(CAT)和线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅲ及锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)含量;采用ELISA法对小鼠肾皮质活性氧自由基(ROS)含量进行测定.结果 与空白对照组比较,模型组小鼠血清肌酐、尿素氮、尿量、尿白蛋白含量显著升高(P＜0.05);桑枝多糖组和缬沙坦组小鼠尿量、尿白蛋白含量、血清肌酐以及尿素氮均显著低于模型组(P＜0.05);桑枝多糖组和缬沙坦组小鼠NF-κB表达水平较模型组均显著降低,SIRT1、FOXO1蛋白表达水平较模型组均显著升高(P＜0.05);桑枝多糖组和缬沙坦组小鼠肾皮质中CAT、线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅲ以及Mn-SOD含量高于模型组,MDA、ROS含量低于模型组(P＜0.05).结论 桑枝多糖具有保护糖尿病小鼠的肾脏功能的作用,其机制可能是桑枝多糖具有促进小鼠肾皮质中SIRT1、FOXO1蛋白表达以及激活CAT、线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅲ以及Mn-SOD的活性,从而抑制其组织氧化应激反应.
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桑枝多糖对糖尿病肾病小鼠肾皮质氧化应激作用的影响
目的：研究桑枝多糖对链脲佐菌素（ STZ）诱导糖尿病肾病小鼠肾皮质氧化应激作用的影响。方法 STZ （120 mg? kg－1）尾静脉注射诱导糖尿病小鼠模型，并随机分为：模型组，缬沙坦组（20 mg? kg－1） ，桑枝多糖0．3、0．6、1．2 g?kg－1组，另设空白组，连续灌胃给药90 d。于d 45将各组小鼠给药后置代谢笼中收集24 h尿液，记录排尿量，检测24 h尿微量白蛋白含量。90 d后处死小鼠，通过对肾脏HE染色观察肾脏病理学变化；全自动生化分析仪测定血清中尿素氮（ BUN）、肌酐（ Cr）的含量；试剂盒测定大鼠肾皮质中锰超氧化物歧化酶（ Mn－SOD）、氧化氢酶（ CAT）、线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅲ的活性和丙二醛（ MDA）含量；ELISA法检测肾皮质ROS的含量；蛋白免疫印迹法检测肾皮质中SIRT1、FOXO1、NF－κB的蛋白表达。结果桑枝多糖组的肾皮质病变得到缓解，较模型组的血糖有所下降，并明显降低尿微量白蛋白含量、尿量及血清中Cr、BUN （ P＜0．05），肾皮质Mn－SOD、CAT、线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅲ活性有所升高， ROS、MDA含量下降（ P＜0．05），上调SIRT1、FOXO1的蛋白水平以及下调NF－κB的蛋白水平（ P＜0．05）。结论桑枝多糖对糖尿病小鼠肾脏损害有一定的保护作用，机制可能与其通过增加肾皮质中SIRT1、FOXO1的蛋白表达，增强组织的抗氧化能力有关。
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桑枝多糖对糖尿病肾病大鼠肾脏组织抗氧化作用的影响
目的:研究桑枝多糖对链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病大鼠的血糖和抗氧化作用的影响.方法:STZ(120mg·kg-1)腹腔注射诱导糖尿病大鼠模型,并随机分为5个组(n=10):模型对照组,二甲双胍对照组(320mg·kg-1),桑枝多糖低、中、高剂量组(0.3,0.6,1.2 g·kg-1),另设10只大鼠作为空白对照组.大鼠灌胃给药60 d,并测定大鼠空腹血糖(FBG).终点法测24h尿微量白蛋白含量.给药60d后处死大鼠,对大鼠肾脏HE染,光镜下观察肾脏病理学的变化;试剂盒测定大鼠肾脏中锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性和丙二醛(MDA)含量;比色法检测肾组织中线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅲ活性.结果:与模型组比较,糖尿病大鼠经桑枝多糖治疗后血糖有所下降并显著降低尿微量白蛋白含量(P＜0.05).模型组大鼠肾脏中Mn-SOD、GSH-Px活性以及肾组织线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅲ活性显著降低,而MDA含量则升高.桑枝多糖给药后Mn-SOD、GSH-Px、线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅲ活性有所升高,MDA含量下降(P＜0.05).结论:桑枝多耱能显著降低糖尿病大鼠的血糖,其作用机制可能与提高糖尿病大鼠的抗氧化作用有关.
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响应曲面法优化桑枝多糖提取工艺
目的:利用响应曲面法优化桑枝多糖的提取工艺.方法:以桑枝多糖得率为指标,采用单因素和响应曲面法对提取温度、提取时间、料液比和提取次数进行考察,优选佳提取工艺.结果:佳提取工艺条件为提取温度100℃、料液比1:20、浸提时间2.5 h、提取2次,实际测得的多糖得率为6.15％,与模型预测值基本相符.结论:模型可较好地预测桑枝多糖的得率,响应曲面法对桑枝多糖提取条件参数优化具有可行性.
