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柱前衍生化UPLC-MS/MS测定12种单糖含量的方法学研究及其应用
建立了1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生化UPLC-MS/MS检测12种单糖的方法,同时对蜜环菌中多糖的单糖组成成分进行了分析.安捷伦ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18分析柱(2.1 mm ×100 mm,1.8 μm),95％乙腈(A)和乙酸铵-5％乙腈-水(B)为流动相梯度洗脱,质谱为电喷雾离子源(ESI)接口,采用负离子多反应监测模式(MRM)进行检测.结果表明,基于UPLC-MS/MS所建立的单糖检测方法,12种单糖成分在各自线性范围内线性关系良好(R2＞0.990),加样回收率为92.30％～105.6％.在蜜环菌样品中,可检测出除阿洛糖外的11种单糖组分.该试验所建立的方法稳健,重复性和准确度高,适用于蜜环菌等的单糖成分的含量测定.
关键词： UPLC-MS/MS PMP衍生化 单糖组成 蜜环菌 -
蜜环菌多糖的分离纯化及PMP衍生化HPLC分析
目的:对蜜环菌发酵液进行多糖的提取、分离纯化,得到均一多糖,对其进行单糖组分分析.方法:分离纯化采用分步醇沉和葡聚糖凝胶(Sephadex G-200)色谱法;纯度鉴定及分子量测定采用高效液相色谱法;单糖组成采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生HPLC法测定.结果:获得两种均一多糖(AMFP-Ⅰ、AMFP-Ⅱ),峰位分子量分别为 812 939D、596 217D,重均分子量(MW)分别为995 098D、872 640D,分布宽度(Mw/Mn)分别为1.268 93、1.235 20;测定单糖组成为甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖.结论:两种多糖分子量分布及单糖组成均不同,AMFP-Ⅰ主要由半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖组成,AMFP-Ⅱ主要由半乳糖醛酸、半乳糖、木糖组成.
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疏血通注射液中抗血小板聚集寡糖类组分的分离和验证
对于所获得的寡糖类成分经PMP衍生化法测定活性寡糖组分中的单糖组成,确认所述的寡糖类组分中单糖单元为葡萄糖、半乳糖、甘露糖,其中主要为葡萄糖.经LC-MS分析,确认所述的寡糖组分主要是由大约2～10个左右单糖单元聚合而成,其分子量范围为200Da～3000 Da,其中主要集中在200Da～2000 Da.通过血小板聚集试验,确认所述的寡糖组分抗血小板聚集活性主要是对体外ADP诱导和胶原诱导的血小板聚集有明显的抑制作用.
