首页 > 文献资料
-
鱼腥草素钠及其与红霉素联用对产膜表皮葡萄球菌luxS,agr/RNAⅢ影响的研究
细菌的群体感应及特异基因表达调控在细菌生物被膜形成中有十分重要的作用.luxS,agr均是表皮葡萄球菌群体感应调控中的关键基因,RNAⅢ是agr系统的效应器分子.为了评估鱼腥草素钠及其与红霉素联用对产膜表皮葡萄球菌转录水平的影响,采用连续稀释法测定鱼腥草素钠、红霉素、万古霉素对表皮葡萄球菌的MIC;荧光定量PCR测定鱼腥草素钠及其与红霉素联用、万古霉素、红霉素等对表皮葡萄球菌作用后不同时间段luxS,agr/RNAⅢ的转录水平.结果表明1/2MIC,1/4MIC鱼腥草素钠,1/2MIC鱼腥草素钠+1/2MIC红霉素,1/4MIC鱼腥草素钠+1/4MIC红霉素,1/8MIC鱼腥草素钠+1/8MIC红霉素等在作用于ATCC 35984伊始,就可迅速上调luxS 的表达,与阴性对照相比,存在显著差异(P<0.05);在作用6,12,48 h后,鱼腥草素钠依然存在对luxS的上调作用.鱼腥草素钠在MIC,1/2MIC浓度时对agr表达均有显著下调作用(P<0.05),1/2MIC鱼腥草素钠与1/2MIC红霉素联用、1/4 MIC鱼腥草素钠与1/4MIC红霉素联用,在作用6,12,24 h等时间段对agr表达的下调作用也很显著(P<0.05).鱼腥草素钠在MIC浓度时,对RNAⅢ表达亦有显著下调作用(P<0.05),1/2MIC鱼腥草素钠与1/2MIC红霉素联用对RNAⅢ表达的下调效果也很显著(P<0.05).提示鱼腥草素钠及其与红霉素联用,可以迅速上调表皮葡萄球菌luxS转录水平的表达,在特定浓度下可下调agr/RNAⅢ的表达,具有抑制表皮葡萄球菌生物被膜菌之间的相互黏附聚集、抑制膜内营养和输水通道的形成、阻止膜内细菌脱离、并抑制细菌外毒素形成等作用的可能.
-
LuxS/AI-2密度感应信号及其在口腔致病菌感染中的作用
密度感应是细菌之间通过分泌和感应胞外信号分子而进行的交流活动,密度感应使细菌同时激活相关基因的表达,协调菌群生物学行为.目前认为AI-2在细菌种间交流中起通用信号分子的作用.LuxS/AI-2参与口腔细菌间的交流,并参与调控毒力因子表达和牙菌斑生物膜的稳定.
-
变异链球菌LuxS缺陷株甲基循环通路的恢复构建
目的:以变异链球菌LuxS缺陷株为模型,构建其密度感应缺陷的甲基循环恢复株.方法:以LuxS为阳性表达对照,通过在变异链球菌LuxS缺陷株中异源表达SahH,实现其代谢通路的恢复构建.通过Western印迹、反转录PCR和信号分子AI-2分泌检测,验证目的蛋白的表达.采用SAS8.0软件包对数据进行统计学分析.结果:Western 印迹检测2种蛋白在大肠杆菌中均得到正确表达,验证了克隆载体的正常表达能力;反转录PCR验证了变异链球菌LuxS缺陷株中luxS及sahH mRNA的存在:发光实验证实LuxS阳性表达对照株AI-2的分泌能力恢复.结论:成功构建变异链球菌LuxS缺陷的代谢恢复株,为探讨LuxS的调控机制提供了分子生物学工具及实验对照.
-
嗜水气单胞菌ATCC7966luxS基因缺失株构建及特性研究
目的 研究群体感应信号分子AI-2合成酶编码基因luxS对嗜水气单胞菌ATCC 7966生理特性及毒力因子的影响.方法 利用同源重组原理,构建含有中间为卡那霉素抗性基因,两侧为luxS基因上、下游同源序列片段的基因敲除质粒,将构建好的质粒转化大肠埃希氏菌SM 10(λpir)感受态细胞,利用接合法将质粒转入嗜水气单胞菌ATCC 7966,通过抗性筛选、PCR和DNA测序确认嗜水气单胞菌luxS基因缺失突变株.比较野生株ATCC 7966和luxS基因缺失突变株生长速度、AI-2合成、胞外蛋白酶合成及生物膜形成的差异.结果 嗜水气单胞菌luxS基因缺失突变株△luxS构建成功.与野生株相比,突变株生长周期延长,基本丧失合成AI-2和胞外蛋白酶的能力;突变株生物膜形成能力降低,生长24 h时生物膜形成能力为野生株的14.5％,36 h时生物膜形成能力为野生株的60.0％,突变株生物膜形成速度明显比野生株缓慢,结构更为疏松.结论 luxS基因参与调控嗜水气单胞菌的生长、AI-2合成和毒力因子表达,本研究为进一步研究luxS基因在嗜水气单胞菌致病性中发挥的作用奠定基础.
-
细菌胞间的LuxS群体感应系统及其新型的抗菌策略
革兰阳性菌和革兰阴性菌通过种属特异的信号分子进行种内通讯,近研究发现许多革兰阳性菌和革兰阴性菌都产生autoinducer-2(自诱导物-2,简称AI-2),作为种间通讯通用的信号分子,调控特定基因的表达.本文系统的概述了AI-2群体感应系统,并对旨在通过干扰这种通用信号分子通讯,开发新型抗菌剂用于抗病、防腐提供了新策略.
