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二仙汤对去卵巢骨质疏松大鼠股骨蛋白质组的影响
该实验为探究二仙汤防治骨质疏松的作用及对去卵巢骨质疏松模型大鼠股骨蛋白质组的影响.将雌性SD大鼠按体重随机分为4组,即假手术组、模型组、阿仑膦酸钠组(阿仑膦酸钠,1 mg·kg-1)、二仙汤组(生药量8 g·kg-1),其中假手术组和模型组灌服生理盐水,阿仑膦酸钠组按1 mg·kg-1剂量灌服阿仑膦酸钠,二仙汤组按生药量8 g·kg-1灌服二仙汤,每日1次,连续给药90 d后检测股骨骨密度,同时应用Nano-LC-LTQ-Orbitrap系统检测股骨骨蛋白,Protein Discovery软件进行蛋白质鉴定,SIEVE软件对蛋白进行相对定量分析.实验结果显示,二仙汤能显著提高去卵巢大鼠股骨骨密度.二仙汤组与模型组相比较共发现41个与假手术组趋势一致的差异蛋白,主要包括生物氧化相关蛋白、信号转导通路相关蛋白、脂肪酸代谢相关蛋白、细胞骨架相关蛋白、能量代谢相关蛋白、糖代谢相关蛋白等.二仙汤能防治骨质疏松症,碳酸酐酶2、整合素β1等相关差异蛋白质可能是其作用靶点.
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鹿骨钙对去卵巢骨质疏松症大鼠骨密度和血清IL-6的影响
目的：探究去卵巢骨质疏松症大鼠灌服鹿寿春堂鹿骨钙后对骨密度和血清IL-6的影响。方法：选取清洁级断乳的Wistar雌性大鼠56只，按照治疗方式的不同分为观察组与对照组两组，每组28只；观察组大鼠给予灌服鹿骨钙，对照组大鼠给予灌服低钙饲料；观察两组大鼠的骨密度及血清IL-6变化情况。结果：两组大鼠灌服治疗后，观察组大鼠的骨密度、体重显著优于对照组，结果具有统计学差异（P<0.05）；观察组大鼠的血清IL-6含量显著低于对照组，结果具有统计学差异（P<0.05）。结论：鹿骨钙中的鹿骨胶原蛋白可以有效降低大鼠血清IL-6的含量，抑制破骨细胞的活性，增强了骨密度，具有一定的临床治疗作用。
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低频脉冲磁场对去卵巢骨质疏松大鼠造血功能的影响
目的:研究低频脉冲磁场对去卵巢骨质疏松大鼠造血功能的影响.方法:50只OVX-OP大鼠模型,分为PEMF治疗的实验组A和继缘正常喂养的对照组B,每组25只;用 Union2000脉冲电磁场骨质疏松治疗仪(大鼠型)治疗A组所有大鼠,采用10 Hz频率每天照射2次,每次1 h,在实验第2周、第4周、第6周、第8周、第12周次时共5批次,每批分别取A、B组大鼠各5只,分别采血进行血常规检查观察外周血细胞成分变化,接着颈椎脱臼处死大鼠,无菌技术下取出股骨,冲出骨髓细胞制成骨髓细胞悬液,检测骨髓细胞成分(有核细胞计数等);股骨制作切片标本观察细胞成分的变化及观察骨髓细胞凋亡情况.结果:PEMF治疗去卵巢骨质疏松大鼠后,开始2周～4周时外周血象白细胞、红细胞、血小板均轻度下降,以白细胞下降为主,6周～8周后逐渐恢复,至12周后基本恢复正常;PEMF 治疗去卵巢骨质疏松大鼠后,早期骨髓单核细胞数量也出现降低,4周时明显,后期逐渐恢复;骨髓病理切片观察显示骨髓造血细胞也有类似改变过程.结论:PEMF对卵巢骨质疏松大鼠骨髓造血细胞形态、数量和含量及增殖能力等均产生轻度不利的影响,影响为可恢复性.
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新仙灵骨葆胶囊调控成骨细胞G1期调节蛋白抗骨质疏松的实验研究
目的:观察新仙灵骨葆胶囊调控成骨细胞G1期调节蛋白抗去卵巢大鼠骨质疏松的作用.方法:去卵巢制备大鼠骨质疏松模型,大鼠随机分为假手术组,模型组,仙灵骨葆胶囊组(350 mg/kg),新仙灵骨葆胶囊低、中、高剂量组(53、105、210 mg/kg),各组灌胃相应药物10 mL/kg,连续12周.末次给药后进行骨密度仪分析大鼠的椎骨、股骨、胫骨的骨密度;检测股骨生物力学性能;计算子宫指数;取第3腰椎,免疫组织化学方法检测成骨细胞中细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖激酶(CDK4)、癌基因蛋白p21的表达.结果:与模型组比较,新仙灵骨葆胶囊可显著抑制大鼠体质量,增加子宫指数和椎骨、股骨、胫骨的骨密度,改善大鼠的生物力学性能,降低第3腰椎成骨细胞Cyclin D1、CDK4、p21蛋白水平.结论:新仙灵骨葆胶囊对去卵巢大鼠所致的骨质疏松症有良好的治疗效果,其作用机制可能是通过调控成骨细胞G1期调节蛋白而影响成骨细胞增值.
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强骨宝1号对去卵巢骨质疏松大鼠腰椎松质骨蛋白质组的影响
目的 从差异蛋白质组角度探讨去卵巢腰椎骨质疏松症及强骨宝1号干预的内在机制.方法 建立去卵巢大鼠骨质疏松症模型,设立假手术组、模型组及中药组,双相电泳技术展示腰椎松质骨蛋白质组图谱,比较各组间差异蛋白点并进行质谱分析及初步鉴定.结果 3组电泳图谱的蛋白点均为600个,与发病相关的有6个;与中药干预相关的有7个.结论 角蛋白、果糖二磷酸醛缩酶、肌动蛋白、ATP合酶α-亚单位、α-烯醇化酶、蛋白二硫键异构酶表达改变可能与骨质疏松发病有关,血清白蛋白、ATP合酶β-亚单位、碳酸酐酶、晶体蛋白β-链、过氧化还原酶-6、β-烯醇化酶、肌动蛋白表达改变可能与强骨宝1号干预效应有关.
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复方脑复康对去卵巢骨质疏松大鼠股骨骨密度及生物力学的影响
目的 探讨复方脑复康对去卵巢(OVX)骨质疏松大鼠股骨骨密度及股骨生物力学的影响.方法 40只6、7月龄雌性SD大鼠随机分为4组:假手术(Sham)组、OVX组、OVX+己烯雌酚(E)组和OVX+复方脑复康(F)组,每组10只.实行手术后,于术后第3天开始灌胃用药.90天后处死大鼠,取左侧股骨进行股骨骨密度和生物力学的测量.结果 与Sham组比,OVX组股骨骨密度及生物力学指标明显下降,全股骨密度、弹性载荷和弯曲能量差异有显著性(P<0.05),而用己烯雌酚和复方脑复康能阻止这种变化;与E组相比,F组的这种阻止作用更为明显.结论 复方脑复康能防治OVX造成的骨质疏松,增加骨密度,防止骨生物力学性能的受损,效果优于单独应用己烯雌酚治疗.
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电针命门穴对去卵巢骨质疏松大鼠下丘脑骨形成蛋白BMP-2及其信号转导蛋白Smad1/5表达的影响
目的 观察电针命门穴对去卵巢骨质疏松症模型大鼠下丘脑骨形成蛋白BMP-2及其信号转导蛋白Smad1/5表达的调节作用.方法 40只4.5月龄SD雌性大鼠,随机分为假手术组、模型组、电针命门组、电针非经非穴组,每组各10只.造模成功后,电针命门组和电针非经非穴组每日电针1次,波形为疏密波,强度为1mA,每次持续20min,10次为一疗程.共治疗3个疗程,疗程结束后,采用免疫组织化学方法,检测下丘脑BMP-2及其信号转导蛋白Smad1/5的表达.结果下丘脑BMP-2及其信号转导蛋白Smad1/5阳性细胞总面积、阳性细胞平均灰度值比较,电针命门组与模型组、电针非经非穴组比较,均有显著性差异(P＜0.05).结论 电针命门穴可调节去卵巢骨质疏松症模型大鼠下丘脑BMP-2及其信号转导蛋白Smad1/5的表达.
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杜仲提取物对去卵巢骨质疏松大鼠骨代谢、骨密度及骨微结构的影响
目的:研究杜仲提取物对去卵巢骨质疏松大鼠骨代谢、骨密度以及骨微结构的影响.方法:通过双侧卵巢切除术建立大鼠绝经后骨质疏松症模型,术后4 w将精神状态良好的成模大鼠随机分为模型组、戊酸雌二醇片(0.8 mg/kg)阳性对照组及杜仲提取物高(6g/kg)、中(3g/kg)、低(1.5 g/kg)剂量组,并设假手术组.连续给药16w,每周记录各组大鼠体质量.16 w后ELISA法检测血清中雌二醇(E2)、骨钙素(OC)含量及尿中脱氧吡啶啉(DPD)含量;全自动生化仪检测血清中钙(Ca)、磷(P)、碱性磷酸酶(ALP)含量及尿中钙(Ca)、磷(P)、肌酐(Cre)含量;骨密度仪检测左侧股骨骨密度(BMD);取第五节腰椎骨(L5)行uCT检测骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁分离度(Tb.Sp)、骨体积分数(BV/TV)、骨密度(BMD)、连接密度(Conn.D).结果:给药16 w后,与模型组比较,杜仲提取物组大鼠体质量显著降低;血清E2显著升高,OC、ALP显著降低,尿中DPD/Cre、Ca/Cre、P/Cre显著降低;腰椎骨、股骨BMD均显著升高;大鼠第五节腰椎骨骨小梁Tb.N、BV/TV、Conn.D显著升高,Tb.Sp显著降低.结论:杜仲提取物对去卵巢大鼠骨质疏松症具有明显的防治作用,可升高血清雌二醇水平,降低雌二醇缺乏引起的体质量增加,调节骨代谢平衡,显著提高去卵巢骨质疏松大鼠股骨及腰椎骨骨密度,改善骨小梁微结构.
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去卵巢骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞体外成脂肪分化能力的研究
探讨不同月龄、去卵巢对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向脂肪细胞分化能力的影响.选用健康3月龄和6月龄Spraque-Dawley(SD)雌性大鼠行双侧卵巢切除术,建立骨质疏松症的动物模型;使用密度梯度离心法分别获取各组骨髓间充质干细胞(MSCs),体外培养传至3代,加入成脂肪诱导液进行诱导,油红O染色观察细胞内脂滴;并用RT-PCR法检测成脂肪分化标志物脂蛋白脂酶(LPL)mRNA表达水平.实验分为8组:1)3月龄正常大鼠骨髓间充质干细胞组(MSCs 3control);2)3月龄去卵巢骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞组(MSCs 3ovx);3)6月龄正常大鼠骨髓间充质干细胞组(MSCs 6control);4)6月龄去卵巢骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞组(MSCs 6ovx);5)3月龄正常大鼠骨髓间充质干细胞成脂肪诱导组(MSCs ADI 3control);6)3月龄去卵巢骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞成脂肪诱导组(MSCs ADI 3ovx);7)6月龄正常大鼠骨髓间充质干细胞成脂肪诱导组(MSCs ADI 6control);8)6月龄去卵巢骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞成脂肪诱导组(MSCs ADI 6ovx).结果显示:(1)年老组大鼠MSCs成脂肪细胞分化能力大于年幼组大鼠;(2)成脂肪诱导后,成脂肪诱导各组MSCs胞浆内均有脂滴形成,MSCs ADI 3ovx和MSCs ADI 6ovx 明显多于相应对照组.(3)成脂诱导后,与相应的对照组相比,MSCs ADI 3ovx和MSCs ADI 6ovx LPL mRNA表达水平明显增高.研究结果表明,年老组和去卵巢骨质疏松大鼠(MSCs)向脂肪细胞分化能力皆增强.
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骨髓间充质干细胞在去卵巢大鼠骨质疏松发病机理中潜在的作用
为探讨去卵巢骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells, MSCs)成纤维细胞集落生成单位(CFU-Fs)、细胞周期、成骨分化能力和成脂分化能力的变化,选用3月龄和6月龄健康雌性SD大鼠行双侧卵巢切除术,建立骨质疏松动物模型,动物实验分为4组:(1) 3月龄正常组(control-3); (2)3月龄卵巢切除组(OVX-3); (3) 6月龄正常组(control-6); (4)6月龄卵巢切除组(OVX-6).采用密度梯度离心方法分别获取各组MSCs,体外培养,选用第3～4代MSCs用于实验.倒置相差显微镜观察CFU-Fs;流式细胞技术检测细胞周期、细胞增殖指数(proliferation index,PI)和细胞凋亡指数(apoptotic index,AI)).加入成骨诱导剂,采用碱性磷酸酶活性蛋白检测法(IFCC推荐法)检测MSCs碱性磷酸酶(alkaline phosphatase ,ALP)分泌量;采用同位素标记方法检测骨钙素(Osteocalcin,OCN)分泌量;茜素红染色观察钙结节形成.加入成脂诱导剂,油红O染色观察MSCs内脂滴形成;RT-PCR方法检测MSCs脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)mRNA的表达.结果表明:与相应对照组比较,OVX-3组和OVX-6组CFU-Fs 、PI值明显降低(P<0.05),AI值明显增加(P<0.05);OVX-6组CFU-Fs 、PI值的降低和AI值的增加都明显大于OVX-3组(P<0.05).成骨诱导表明:与相应对照组比较,OVX-3组和OVX-6组ALP、BGP分泌量以及钙结节形成的数量均明显降低(P<0.05),OVX-6组的降低为明显.成脂诱导表明:与相应对照组比较,OVX-3组和OVX-6组,LPL mRNA的表达量明显增加(P<0.05),OVX-6组LPL mRNA的表达量的增加明显高于其他各组(P<0.05).结论:去卵巢骨质疏松大鼠MSCs增殖能力明显下降,向成骨细胞分化能力下降,向脂肪细胞分化能力增强,其中6OVX组MSCs的变化明显.提示:去卵巢骨质疏松大鼠MSCs向成骨细胞分化能力的降低和向脂肪细胞分化能力的增强,可能与绝经后骨质疏松症的发生相关.
