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锌指蛋白A20对大鼠腹膜透析相关性急性腹膜炎症反应的影响
目的：探讨锌指蛋白A20对脂多糖（L PS ）诱导的大鼠腹膜透析相关性急性腹膜炎模型腹膜组织CD40表达、IκBα磷酸化及腹腔局部炎症反应的影响。方法将24只雄性SD大鼠随机分为4组，每组6只。对照组：腹腔注入4．25％葡萄糖乳酸盐腹膜透析液（简称腹透液，90 mL/kg）；LPS组：LPS 1 mg/kg腹腔注入4 h后，再注入腹透液；转染A20组及空载体组：超声微泡转染pGEM-T easy-A20或pGEM-T easy质粒至大鼠腹膜组织3 d后相继注入LPS及腹透液。注入腹透液4 h后处死大鼠，留取腹水、壁层及脏层腹膜组织。常规腹膜组织Masson、HE染色和腹水白细胞计数；Western blot检测腹膜组织 A20、p-IκBα、IκBα、CD40蛋白的表达；RT-PCR检测腹膜组织CD40 mRNA的表达；ELISA法检测腹水中IL-6水平。结果 LPS可诱导腹膜组织表达A20。与LPS组及空载体组相比，转染A20组大鼠腹膜组织水肿明显减轻、炎细胞浸润及腹水白细胞计数均减少，腹膜组织p-IκBα/IκBα比值、CD40 mRNA及蛋白表达、腹水IL-6水平均明显降低（P＜0．05）；与对照组相比，转染A20组腹膜组织p-IκBα/IκBα比值和腹水IL-6水平差异无统计学意义（P＞0．05），但CD40 mRNA及蛋白表达明显升高（P＜0．05）。结论大鼠腹膜组织过表达A20可抑制L PS诱导的大鼠急性腹膜炎症反应，并对L PS信号通路中相关功能蛋白起一定的调控作用。
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急性脑梗死患者外周血单核细胞锌指蛋白A20表达及其与TNF-α和IL-6的相关性
目的 调查急性脑梗死患者外周血单核细胞锌指蛋白A20的表达及其与血液TNF-α和IL-6水平的相关性,初步探讨锌指蛋白A20在急性脑梗死缺血性炎症损伤中的作用.方法 采用流式细胞学分析技术和适时荧光定量PCR技术分别测定42例急性脑梗死患者外周血单核细胞锌指蛋白A20的表达,并用ELISA技术测定血液TNF-α和IL-6浓度,与50例同期健康对照组进行比较.结果 急性脑梗死组患者外周血单核细胞锌指蛋白A20表达水平较健康对照组明显增高,且以发病后第1天锌指蛋白A20表达水平高(P＜0.01),之后快速降低,与血液TNF-α和IL-6浓度呈现正相关关系.结论 锌指蛋白A20可能参与了急性脑梗死缺血性炎症损伤的自我保护过程,其机制可能是抑制核转录因子NF-κB和NF-IL-6,进而下调促炎细胞因子的表达干预脑组织的炎症损伤.
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锌指蛋白A20对小鼠内毒素性肝损伤的保护作用研究
目的 探讨锌指蛋白A20对小鼠实验性内毒素性肝损伤的保护作用.方法 以内毒素血症小鼠为动物模型,采用尾静脉注射A20表达质粒的方法 ,观察A20转基因处理对内毒素血症小鼠肝组织内TNF-α、IL-1β水平以及肝脏病理损伤的保护.结果 A20组LPS注射24h后肝组织匀浆TNF-α表达水平为(923.2±11.97)pg/ml、IL-1β为(996.43±15.32)pg/ml,与LPS对照组比较,t检验显示P值均＜0.05,A20组与LPS对照组之间TNF-α和IL-1β水平差异有统计学意义.病理分析提示A20组24h后小鼠肝脏病理损伤明显较LPS对照组轻.结论 A20能够明显抑制内毒素血症小鼠肝组织的炎症反应,减轻肝组织炎症损伤.
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人原发性肝细胞癌中锌指蛋白A20、NF-κBp65及多药耐药P-gp蛋白的表达
目的 检测锌指蛋白A20、NF-κB p65蛋白及P-gp蛋白在人原发性肝细胞癌和癌旁组织中的表达,比较两者之间的差异,并探讨其与肝细胞癌临床病理学特征的关系.方法 收集2009年2月至2010年8月期间于华西医院肝脏及血管外科行手术切除的32例原发性肝细胞癌患者的肝癌组织标本及对应的癌旁组织26例,行免疫组织化学染色,同时收集患者完整的临床病理学资料.结果 锌指蛋白A20、NF-κB p65蛋白及P-gp蛋白在原发性肝细胞癌组织中的表达阳性率分别为87.5％ (28/32)、81.3％ (26/32)及65.6％ (21/32),高于癌旁组织中的61.5％ (16/26)、34.6％ (9/26)及30.8％ (8/26),P＜0.05.锌指蛋白A20的表达与乙肝表面抗原(HbsAg)表达情况及肝硬变情况有关(P＜0.05);NF-κB p65蛋白和P-gp蛋白的表达均与HbsAg表达情况有关(P＜0.05).结论 锌指蛋白A20、NF-κ3 p65蛋白及P-gp蛋白在原发性肝细胞癌组织中均呈高表达,而在癌旁组织中呈低表达;3种蛋白可能对肝脏肿瘤的良恶性判断起指导作用.
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锌指蛋白A20促进同种异体大鼠小体积移植肝再生并抑制急性排斥
目的 探讨锌指蛋白A20对同种异体大鼠30%小体积移植肝再生与排斥及受体存活时间的影响.方法 采用急性排斥组合DA (RT1a)大鼠→Lewis (RT1l)大鼠建立同种异体大鼠30%小体积肝移植模型. 75只大鼠均分为A20腺病毒组(A20组)、对照空腺病毒组(rAdEasy组)及对照生理盐水组(PS组)3组. 供肝切取后采用离体门静脉灌注法转基因干预,肝脏灌洗后移植. 观察受体存活时间及排斥反应,检测移植肝A20表达、肝细胞再生与凋亡、肝血窦内皮细胞(LSECs)中NF-κB活性与ICAM-1 mRNA表达、移植肝浸润单核细胞(LIMCs)总数及自然杀伤(NK)细胞和自然杀伤T(NKT)细胞数以及血清IFN-γ水平. 结果 A20组受体大鼠存活时间长于PS组大鼠和rAdEasy组大鼠(P=0.001 8),而PS组大鼠存活时间又长于rAdEasy组大鼠(P=0.001 8). A20促进小体积移植肝再生,肝移植后4 d A20组大鼠肝细胞BrdU标记指数高于PS组大鼠和rAdEasy组大鼠(P＜0.01); A20组大鼠肝细胞凋亡指数低于PS组大鼠和rAdEasy组大鼠(P＜0.01). 肝移植术后4 d,组织学检测结果显示A20组大鼠移植肝有少量细胞浸润,呈轻度排斥; 而PS 组和rAdEasy组大鼠移植肝有大量细胞浸润,呈重度排斥. A20能抑制移植后早期(1 d) LSECs 中NF-κB活性和 ICAM-1 mRNA 表达. 流式细胞术检测结果显示A20能下调移植肝LIMCs数,包括下调NK和NKT 亚群细胞数,并下调血清IFN-γ水平(P＜0.05). 结论 A20能有效促进同种异体大鼠30%小体积移植肝再生,抑制排斥并延长受体存活时间,其功效可能与抑制LSECs中NF-κB活性、抑制LIMCs浸润及减少NK 细胞和NKT 细胞浸润入肝以及抑制肝细胞凋亡有关.
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四川地区汉族人群A20基因启动子区SNP分布分析
目的 分析四川地区汉族人群A20基因启动子区SNP分布频率,为进一步研究A20基因地域、人种差异以及与疾病的关系调控奠定基础.方法 使用PCR-DNA测序法,对372例四川地区汉族人群A20基因启动子区所有SNP位点进行检测,计算各SNP的基因型频率及等位基因频率,并进行连锁不平衡分析.结果 在四川地区汉族人群中,发现rs59693083、rs5029924和rs139054966三个SNP位点,突变频率分别为12.81%、8.88%、0.67%,而且前两位点间存在明显的连锁不平衡,CA是为常见的单体型模式.结论 四川地区汉族人群A20基因启动子区高度保守,SNP分布频率与北京汉族(CHB)人群相似,rs59693083和rs5029924可能是与疾病相关的位点.
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炎症状态下 A20基因沉默对人牙髓干细胞增殖及分化的影响
目的：探讨在体外模拟炎症状态下，A20基因沉默对人牙髓干细胞（hDPSCs）增殖及分化能力的影响。方法：用脂多糖（LPS）刺激 hDPSCs，Western－Blot 技术检测不同时间点锌指蛋白 A20表达量的变化；通过 RNA 干涉技术构建 A20基因沉默的细胞模型，CCK －8法检测细胞增殖能力；矿化液诱导培养后，用碱性磷酸酶检测试剂盒测定 ALP 的活性，茜素红染色观察矿化结节的形成，并用 RT－PCT 检测成牙／成骨分化相关基因ALP、DSPP、OCN、RUNX2表达水平。结果：hDPSCs 在 LPS 刺激2 h 后，A20的表达即显著增加，在接近72 h 时其表达量恢复至基础水平；在模拟炎症状态下，与对照组相比，A20基因沉默后的 hDPSCs，其增殖能力明显降低（P ＜0．05），ALP 的活性、矿化结节的形成、成牙／成骨分化相关基因的表达水平均受到抑制（P ＜0．05）。结论：在炎症状态下，A20在早期呈现一过性的高表达，A20基因沉默能够抑制 hDPSCs 的增殖及分化能力。
关键词： 锌指蛋白A20 人牙髓干细胞(hDPSCs) 脂多糖(LPS) 增殖 分化 -
急性脊髓损伤时小鼠肺组织锌指蛋白A20表达
目的:研究急性脊髓损伤和(或)内毒素攻击时小鼠肺组织中锌指蛋白A20的表达规律.方法:将昆明种小白鼠220只随机分为对照组(N组,n=10)、脊髓损伤组(A组,n=70)、内毒素组(B组,n=70)和脊髓损伤合并内毒素组(AB,n=70).以免疫组织化学(IHC),RT-PCR和HE染色分别检测肺组织中A20蛋白、mRNA和病理损害.结果:IHCN组A20蛋白微量表达(0.142±0.012);A组4～48 h较N组显著升高(P<0.05);B组0.5 h就出现高表达(0.202±0.020),0.5～24 h较N组显著升高(P<0.05),0.5～8 h较A组显著升高(P<0.05);AB组表达强,0.5～48 h较N组显著升高(P<0.05),0.5～8 h较A组显著升高(P<0.05),8～48 h较B组显著升高(P<0.05).RT-PCR N组A20mRNA微量表达(0.883±0.033);A组4～24 h较N组显著升高(P<0.05);B组0.5～24 h较N组显著升高(P<0.05),0.5～4 h较A组显著升高(P<0.05);AB组表达强,0.5～48 h较N组显著升高(P<0.05),0.5～24 h较A组显著升高(P<0.05),4～48 h较B组显著升高(P<0.05).HEAB组:0.5～4 h肺组织病理损害重,出现肺组织间质中性粒细胞浸润,上皮肿胀等,8 h以后病理损害较前有所减轻,但仍比N组重.结论:在脊髓损伤的早期肺组织即出现锌指蛋白A20表达增高,合并感染时尤其明显.说明在脊髓损伤(或合并感染)情况下,锌指蛋白A20表达增加可能对机体内源性调控过度的炎症具有重要意义.
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锌指蛋白A20在恶性肿瘤中相关研究进展
锌指蛋白A20,又称肿瘤坏死因子α诱导蛋白3,它调控多种信号通路参与细胞凋亡和炎症反应等多种生命过程.近年来,A20对多种类型的肿瘤的影响作用日益受到关注.本文旨在从A20的生物学效应以及在肿瘤中发挥致癌作用、抑癌作用、肿瘤耐药性和肿瘤血管形成能力方面做一简要概述.
关键词： 锌指蛋白A20 肿瘤坏死因子α诱导蛋白3 肿瘤 -
锌指蛋白A20及其突变体质粒转染对小鼠内毒素血症的预防作用
目的 研究锌指蛋白A20(mA20)及其突变体mA20-ZnF4-7质粒转染对脂多糖(LPS)攻击所致小鼠内毒素血症的预防作用.方法 用LPS攻击小白鼠制备内毒素血症动物模型.随机分为等渗盐水对照组(NS组)、单纯LPS组(LPS组)、pCAGGS-flag组(质粒组)、pCACGS-flag-mA20预防组(mA20组)和pCAGGS-flag-mA20-ZnF4-7预防组(mA20突变体组).按10μg质粒:1.6 ml等渗盐水比例溶于等渗盐水中,采用"基于流体动力学基因转染方法"对实验小鼠进行质粒预防性注射.以ELISA检测各组血浆和组织TNF-α、IL-1β表达并观察组织病理变化.结果 (1)mA20组和mA20-突变体组的TNF-α在各时相点表达分别为:6 h:(211.942±9.133)pg/ml、(163.536±0.502)pg/ml,12 h:(195.130±26.318)pg/ml,(206.446±34.797)pg/ml,24.h:(182.963±14.527)pg/ml、(158.029±19.176)pg/ml,均显著低于LPS组和质粒组(P＜0.05).(2)mA20组和mA20突变体组的IL-1β在各时间点表达分别为:6 h:(137.908.±4.487)pg/ml、(138.598±8.733)pg/ml,12 h:(137.678±3.539)pg/ml、(137.448±7.953)pg/ml,24 h:(129.862±11.602)pg/ml、(126.873±6.942)pg/ml,均显著低于LPS组和质粒组(P＜0.05).(3)mA20组和mA20突变体组内各时间点之间TNF-α及IL-1β表达比较,差异无统计学意义(P＞0.05).(4)病理观察结果显示,mA20组和mA20突变体组的肝、肺损伤均较LPS组和质粒组轻.结论 基于流体动调控炎症反应力学的mA20及其突变体mA20-ZnF4-7质粒转染对实验性内毒素血症有相似的预防作用,mA20有功能丰余性,为临床应用及mA20突变体研究提供了一定的实验基础.
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创伤合并内毒素攻击时小鼠肝组织锌指蛋白A20 mRNA表达的初步研究
目的研究创伤合并内毒素攻击时小鼠肝组织中锌指蛋白A20 mRNA的表达规律.方法选用健康昆明种小白鼠95只,雌雄不拘,体重18～24 g,制作双侧股骨闭合性骨折创伤及创伤合并内毒素血症模型.随机分为正常对照组、单纯创伤组、单纯内毒素组和创伤内毒素组.以逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测肝组织中锌指蛋白A20 mRNA的表达,结果以A20mRNA与内参照GAPDH mRNA之总灰度比值表示.结果正常对照组A20 mRNA呈现低量表达;单纯创伤组各时相点锌指蛋白A20 mRNA均呈现低量表达,与正常对照组相比,差异无显著性意义;单纯注射内毒素后0.5 h,A20 mRNA均较正常对照组升高明显,注射后0.5～2 h为A20mRNA表达的高峰期,2 h以后表达又有所下降,各时相点均高于单纯创伤组;而创伤内毒素组在注射内毒素后0.5 h,A20 mRNA均较其他两组显著升高,注射后0.5～2 h为A20 mRNA表达的高峰期,注射后2 h显著高于单纯内毒素组(P＜0.05),至4,7,10 h时表达逐渐下降,但仍高于单纯创伤组.结论锌指蛋白A20作为一种参与体内炎症反应调控的内源性蛋白,在创伤合并内毒素攻击的早期即可呈现出高表达.说明创伤合并内毒素攻击情况下,A20表达增加是机体的一种重要的内源性抗炎保护效应机制,可能对于调控创伤时适度的炎症反应具有重要意义.
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锌指蛋白A20与恶性肿瘤关系的研究进展
锌指蛋白A20存在于体内多种细胞,通过抑制TNF等介导的细胞凋亡、阻断NFKB信号通路等作用,参与机体多种生理、病理过程,如免疫反应的调节、炎症性疾病和恶性疾病等.近年来,A20在肿瘤发生发展中的作用引起研究者的广泛关注,本文就A20在恶性肿瘤中的研究进展作一综述.
关键词： 肿瘤 锌指蛋白A20 肿瘤坏死因子α诱导蛋白3 -
锌指蛋白A20与树突状细胞
锌指蛋白A20(A20)是一种具有泛素化修饰作用的锌指蛋白,在肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素-1(IL-1)和脂多糖(LPS)等诱导刺激下高度表达,并能通过限制NF-κ B活性的方式调节树突状细胞(DC)的成熟、细胞因子的产生及免疫活性.对A20的生物学特征、参与机体免疫反应的途径及其对DC细胞的成熟和功能的影响进行综述.
