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土壤中军团菌污染状况调查研究
目的 了解土壤中军团菌的污染状况和分离菌株的分子型别、对抗生素的敏感性和细胞内的生长能力.方法 采集北京市公共场所土壤样本123份,采用军团菌GVPC选择性培养基培养法和荧光定量PCR检测法对土壤中军团菌进行检测分析.用小鼠巨噬细胞J774细胞对分离菌株进行菌株致病性研究;用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术对分离菌株进行分型分析;用E-test试纸药敏实验法对分离菌株进行红霉素、阿奇霉素、利福平、左氧氟沙星、莫西沙星5种抗生素敏感性检测.结果 荧光定量PCR检测法在花鸟市场和夏季水库样本中检出军团菌,检出阳性率分别为50.00％和24.24％,平板培养法仅在夏季水库样本中检出军团菌,阳性率为6.06％.分离的2株军团菌TR1和TR2均为嗜肺军团菌,血清型分别为5型和8型.2株嗜肺军团菌均具有较高的细胞内生长能力,PFGE分型显示2株菌为不同带型,药敏实验显示2株菌均对红霉素、阿奇霉素、利福平、左氧氟沙星、莫西沙星5种常用抗生素表现敏感性.结论 公共场所土壤中可检出嗜肺军团菌,且分离株有较高的细胞内生长能力,提示具有致病性,存在导致军团菌病散发流行或暴发的危险,应加强对公共场所土壤中军团菌的监测.
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无锡市不同场所冷却水中军团菌污染状况和菌株分子生物学特性研究
目的 了解无锡市不同场所冷却水中军团菌污染状况和菌株分子生物学特性.方法 于2009-2010年对无锡市城区56家场所的冷却水采集平行水样各500 ml,共112份,进行军团菌检测和定量培养,对分离到的菌株进行血清分型、PFGE分型、基因序列分型(SBT),并测定菌株在细胞内的生长能力.结果 56家场所的冷却水水样中,军团菌阳性率为39.3％(22/56),总计分离到29株军团菌,血清型包括LP1、LP3、LP5、LP6,以LP1为主,占65.5％(19/29).29株军团菌PFGE分型得到17个不同带型,其中PFGE带型各异的10株军团菌SBT分型亦不相同.以LP1菌株( ATCC 33152)为参照,WX2011062( LP6)、WX2011067(LP5)细胞内繁殖能力较强[感染当天细胞内菌量分别为(5.5±1.32)×105、(3.9±0.60)×105、(7.8±0.76)×105 CFU/ml,感染第3天细胞内菌量分别为(58.3±1.61)×105、(2700.0±655.74)×105、(3066.7±208.17)×105 CFU/ml].结论 无锡市不同场所冷却水普遍存在军团菌污染,菌型呈现基因多态性,存在巨噬细胞内生长能力较强的菌株.
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上海口岸管道水中军团菌污染状况及其细胞内生长能力研究
目的 了解口岸公共场所管道水军团菌污染状况和细菌在细胞内的生长能力.方法 采集上海市口岸管道水132份,采用GVPC(军团菌选择性培养基)培养计数法对水样中军团菌进行定性和定量分析.用小鼠巨噬细胞J774细胞对分离菌株进行菌株致病性研究.结果 平板培养法检测管道水中军团菌阳性率为18.94％,25份培养阳性标本中军团菌定量数值为50～1 320菌落形成单位(CFU)/L.分离的25株军团菌中17株是嗜肺军团菌;其中血清1型2株、8型13株、7型1株、5型1株;其余8株为米克戴德军团菌.细胞内生长实验结果显示,4个血清型的嗜肺军团菌均具有很高的细胞内生长能力,而米克戴德军团菌细胞内生长能力较低.结论 管道水中军团菌污染率和含菌量较高,且菌株具有很高的细胞内生长能力,提示其具有一定致病性,有引起军团菌病的危险,应采取相应消毒和预防措施.
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杜莫氏军团菌对上皮细胞A549粘附侵袭和胞内生长能力的研究
目的 探明杜莫氏军团菌(Legionella dumoffii,L.dumoffii)对上皮细胞A549的粘附、侵袭和胞内生长能力.方法 实验使用菌株为L.dumof fii TEX-KL(ATCC 33343)、L.dumoffii NY23(ATCC 33279)和嗜肺军团菌L.pneumophila philadelphila-1(ATCC 33155).配制1×108菌悬液,将其以100MOI(Muhiplicity of Infection)的比例与肺泡上皮细胞A549相互作用.通过吉曼尼兹染色和菌落计数的方法,测定菌株的粘附、侵袭和胞内生长能力.结果 杜莫氏军团菌L.dumoffii TEX-KL、L.dumoffii NY23和嗜肺军团菌L.pneumophila philadelphila-1三株细菌在体外生长能力和体内对A549细胞的粘附能力方面无明显差别.L.dumoffii TEX-KLL侵袭进入细胞内的菌数是其他两株菌的1 000倍,差异有统计学意义.结论 L.dumoffii TEX KL与L.dumoffii NY23和嗜肺军团菌L.pneumophila philadelphila-1相比,对A549细胞具有更高的侵袭力,因此也具有较高的上度细胞内生长能力.
