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比较电针"大肠俞""天枢"穴对肠易激综合征模型大鼠内脏敏感性、Cajal间质细胞和辣椒素受体1的影响
目的:比较电针"大肠俞"和"天枢"穴对肠易激综合征(IBS)模型大鼠内脏敏感性、结肠Cajal间质细胞(ICC)基因表达产物c-kit和辣椒素受体1(TRPV1)的影响,探讨电针大肠俞募穴对肠易激综合征疗效和相关作用机制是否存在差异.方法:将42只Wistar新生大鼠随机分为空白组(9只)、造模组(33只),采用母子分离、幼鼠醋酸灌肠和直结肠扩张法制备IBS大鼠模型,将造模组存活的27只幼鼠随机分为模型组、大肠俞组、天枢组,每组9只.大肠俞组和天枢组分别取"大肠俞""天枢"穴电针干预20min,疏密波,频率2Hz/100Hz,强度0.1～0.3mA,隔日1次,共治疗5次.模型组用软布套固定20 min,不针刺.空白组不予以任何操作.观察干预后各组大鼠大便性状Bristol分级评分;采用腹部回撤反射对大鼠进行内脏敏感性评估,观察出现第1次收缩波的潜伏期和90 s内收缩波个数;并采用免疫组织化学法检测结肠ICC特异性标志物c-kit和TRPV1的阳性表达.结果:与空白组相比,模型组大鼠Bristol评分升高,潜伏期缩短,收缩波个数增多,c-kit和TRPV1阳性表达水平增强(均P＜0.01);与模型组比较,大肠俞组和天枢组大鼠干预后大便Bristol评分下降,潜伏期延长,收缩波个数减少,c-kit和TRPV1阳性表达水平均明显减弱(P＜0.05,P＜0.01);与大肠俞组比较,天枢组TRPV1阳性表达水平减弱(P＜0.05).结论:电针"大肠俞"和"天枢"穴均可改善IBS模型大鼠的腹泻情况,降低大鼠的内脏敏感性,其作用机制可能与其调节结肠c-kit和TRPV1表达有关,电针"天枢"穴对结肠TRPV1表达的调节作用较"大肠俞"穴更为明显.
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艾灸对溃疡性结肠炎大鼠结肠及下丘脑辣椒素受体1表达的影响
目的 探讨麦粒灸对溃疡性结肠炎(ulcerative colitiS,UC)大鼠结肠及下丘腩辣椒素受体1(VR1)的影响.方法 采用免疫学方法加局部刺激制备实验性UC大鼠模型,随机分为模型组和治疗组,并与正常组作对照,治疗组施以麦粒灸治疗,采用免疫组化染色法观察结肠及下丘脑VR1的表达.结果 与正常组比较,模型组大鼠结肠及下丘脑VR1的表达明显增强(P<0.05);与模型组比较,治疗组大鼠结肠及下丘脑VR1的表达明显降低(P<0.05).结论 实验性UC模型大鼠结肠及下丘脑VR1增加,麦粒灸可以降低UC大鼠结肠及下丘脑VR1的表达.
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辣椒素受体1在功能性消化不良上消化道中的表达及其意义
背景:功能性消化不良(FD)是临床上常见的胃肠疾病之一,严重影响患者的生活质量.目的:探讨辣椒素受体1(TRPV1)在FD患者食管、胃窦、十二指肠黏膜组织中的表达及其意义.方法:选取2012年6月-2014年2月西南医科大学附属医院符合罗马Ⅲ诊断标准的FD患者30例和30例正常对照者,采用免疫组化染色检测食管下段、胃窦部、十二指肠球部黏膜TRPV1、降钙素基因相关肽(CGRP)的表达.结果:FD组食管下段、胃窦部、十二指肠球部黏膜TRPV1、CGRP表达显著高于对照组(P＜0.05).对照组十二指肠球部TRPV1表达显著高于食管下段(P＜0.05),FD组各部位间TRPV1表达差异无统计学意义(P＞0.05).FD组胃窦部CGRP表达显著高于十二指肠球部(P＜0.05),对照组各部位间CGRP表达差异无统计学意义(P＞0.05).对照组TRPV1表达与CGRP表达呈正相关(r =0.443,P＜0.05),FD组TRPV1表达与CGRP表达无关(r=0.277,P＞0.05).结论:FD患者TRPV1在食管下段、胃窦部、十二指肠球部黏膜的表达均较正常人显著增加,可能与其内脏高敏感有关.
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慢性胃食管反流大鼠背根神经节中辣椒素受体1和大麻素受体的表达
背景:食管痛觉高敏参与胃食管反流病(GERD)的发病,而辣椒素受体1(TRPV1)和大麻素系统的激活在疼痛调控中发挥双向作用.目的:检测慢性胃食管反流大鼠相应节段背根神经节(DRG)中TRPV1和大麻素受体(CB1、CB2)的表达情况,探讨两者在GERD中的作用.方法:雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为反流组(R组)、对照组(S组).采用胃底结扎联合幽门限制法构建慢性胃食管反流模型.采用免疫荧光法和蛋白质印迹法检测大鼠DRG中TRPV1和CB1、CB2的表达,并分析TRPV1蛋白表达与CB1、CB2蛋白表达的相关性.结果:免疫荧光法示R组DRG中TRPV1表达较S组显著上调(905.24±134.82对648.43±135.13,P=0.000)；而CB1(677.06±123.75对836.89±101.00,P=0.013)、CB2(513.99 ±79.80对709.63±43.25.P=0.000)表达显著下调.蛋白质印迹法亦显示,R组TRPV1蛋白表达显著高于S组(0.98±0.01对0.64±0.09,P=0.001),CB1(0.86±0.05对0.96±0.06,P=0.013)、CB2(0.75 ±0.03对0.81±0.05,P=0.019)蛋白表达显著低于S组.TRPV1蛋白表达与CB1蛋白表达呈负相关(r=-0.836,P=0.001),而与CB2蛋白表达无关(r=-0.351,P=0.263).结论:慢性胃食管反流大鼠中TRPV1蛋白表达上调与CB1蛋白表达下调密切相关,酸在调节受体分子中起关键作用.
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TRPV1在消化系统疾病中的研究进展
瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)属于瞬时受体电位(TRP)离子通道家族,是一种非选择性阳离子配体门控通道.大量研究显示TRPV1在消化道广泛分布,且在多种消化系统疾病中发挥重要作用.近年来,TRPV1成为消化领域研究的热点.本文就TRPV1在消化系统疾病中的研究进展作一综述.
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功能性消化不良TRPV1表达和HP感染的关系及意义
目的 探讨辣椒素受体1(TRPV1)分别在幽门螺杆菌(HP)阳性和HP阴性功能性消化不良(FD)患者的变化及临床意义.方法 168例FD患者根据HP感染与否分为FD-(HP-)组和FD-(HP+)组,并选择50例健康者为对照组,比较三组中TRPV1基因的mRNA水平、胃动素、胃泌素和生长抑素水平,分析TRPV1基因的mRNA水平与胃动素、胃泌素和生长抑素的相关性.结果 TRPV1基因mRNA水平、胃动素、胃泌素和生长抑素在FD-(HP-)组与对照组之间、FD-(HP-)组与FD-(HP+)组之间差异均具有统计学意义(P<0.05),且FD-(HP-)组和对照组TRPV1基因mRNA水平和生长抑素水平均低于FD-(HP+)组(P<0.05),胃动素和胃泌素水平高于FD-(HP+)组(P<0.05).TRPV1基因mRNA水平与胃动素及胃泌素均呈明显负相关,与生长抑素水平呈明显正相关.结论 TRPV1在FD患者中呈高水平表达,且HP感染可诱发其TRPV1基因表达的增加,提示抗HP治疗对HP阳性的FD患者有益.
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辣椒素对大鼠胃动力的影响及作用机制
目的 探讨辣椒素对大鼠胃动力的影响及其作用机制.方法 选择SD大鼠160只,随机分为对照组及辣椒素低、中、高剂量组,每组40只.辣椒素低、中、高剂量组分别给予0.01、0.1、0.5 mg/mL的辣椒素溶液灌胃,对照组给予等量辣椒素溶剂灌胃.各组分别于灌胃3天及灌胃1、2、4周,随机取10只,采用核素显像法检测胃半排空时间(t50%)、65 min时胃排空率(GE65 min);处死后剖腹取胃,采用免疫组化二步法检测胃组织辣椒素受体1(TRPV1)、降钙素基因相关肽(CGRP)、P物质(SP)表达.结果 辣椒素低、中、高剂量组各时间点较对照组同期t50%有升高趋势,GE65 min有降低趋势,均表现出抑制胃排空作用;辣椒素高、中剂量组各时间点抑制胃排空效果强于辣椒素低剂量组(P均<0.05),辣椒素中、高剂量组抑制胃排空的效果相当(P均>0.05).辣椒素低、中、高剂量组各时间点胃黏膜TRPV1表达均较对照组同期明显增加(P均<0.05),但辣椒素低、中、高剂量组之间比较差异无统计学意义(P均>0.05).辣椒素低、中、高剂量组各时间点胃黏膜CGRP表达较对照组有升高趋势;灌胃3天及1周,辣椒素高、中剂量组CGRP表达升高较辣椒素低剂量组更明显(P均<0.05).灌胃2、4周,辣椒素高、中剂量组胃黏膜CGRP表达显著降低(P均<0.05).辣椒素低、中、高剂量组各时间胃黏膜SP表达与对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05).结论 辣椒素具有抑制大鼠胃排空作用,且剂量越大,抑制效果越强;随着作用时间延长,辣椒素剂量越大抑制胃排空效果减弱越明显,其原因可能与胃黏膜CGRP大量消耗有关.
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吴茱萸碱对大鼠离体子宫平滑肌的舒张作用及机制研究
目的:探讨吴茱萸碱对大鼠离体子宫平滑肌的舒张作用及其可能机制.方法:以前列腺素F2α(PGF2α)诱导大鼠离体子宫平滑肌收缩,生物机能实验系统观察吴茱萸碱舒张离体子宫平滑肌的作用以及辣椒素受体阻断药capsazepine、磷脂酶Cβ阻断药U73122和钙调蛋白阻断药W-7对吴茱萸碱作用的影响,Prism-5.01非线型可变斜率回归计算半效浓度(EC50).结果:吴茱萸碱对PGF2α(EC50=9.60×10-11 mol·L-1)收缩离体子宫平滑肌舒张作用的EC50为9.56×10-9mol·L-1.半抑制浓度(IC50)的capsazepine(6.30×10-11 mol·L-1),U73122(2.57×10-11 mol·L-1)和W-7(5.65×10-13 mol·L-1)预舒张离体子宫平滑肌后,吴茱萸碱的EC50降低,量效曲线左移.EC50的大小顺序依次为:U73122-吴茱萸碱(1.95×10-12 mol·L-1)>capsazepine-吴茱萸碱(7.35×10-13 mol·L-1)>W-7-吴茱萸碱(8.88×10-15 mol·L-1).结论:吴茱萸碱对PGF2α收缩的离体子宫平滑肌有舒张作用,其作用机制可能与辣椒素受体1、磷脂酶Cβ和钙调蛋白有关.
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背根神经节内代谢型谷氨酸受体2与酸敏感性离子通道3和辣椒素受体1的共存研究
代谢型谷氨酸受体(mGluR)2/3在伤害性信息从外周向脊髓传递的过程中发挥着重要作用.以往研究证明在大鼠中mGluR2参与了机械性超敏和热超敏的形成,因此本研究拟采用免疫荧光组织化学染色技术揭示背根节(DRG)中mGluR2和酸敏感性离子通道3(ASIC3),一个多觉机械性感受器,或者和热伤害性感受器辣椒素受体(TRPV1)的共存情况.结果显示:mGluR2主要存在于DRG神经元的胞浆中.计数结果显示DRG中35.85%的神经元呈mGluR2免疫阳性.在这些阳性神经元中,82.61%为小细胞(直径小于30 μm);5.79%为中等细胞(直径为30～50μm);11.59%为大细胞(直径大于50μm).进一步在免疫荧光双重标记切片上可观察到分别有42.45%和79.78%的小型mGluR2阳性神经元同时表达ASIC3或TRPV1免疫阳性.以上结果提示mGluR2主要存在于DRG中的小神经元中,这些神经元通常被认为是外周Aδ-或C-纤维传人的伤害性感觉神经元,在这类神经元中mGluR2与ASIC3或TRPV1均有大量共存,提示这些共存可能与机械性或热超敏的产生或者维持有着重要的联系.
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老龄化对辣椒素受体1(TVRV1)在大鼠脊髓背角表达的影响
已有报道提出老龄化进程可能对伤害性行为表现有一定的影响,但是相关的机制仍不很明确.辣椒素受体VR1(现命名为TRPV1)已被证实为热伤害性感受器,老龄化进程中TRPV1在痛传导路中的表达水平是否随年龄改变尚不清楚.本研究中应用免疫组织化学方法对三个年龄段(青龄:2～3月;中龄:17～19月;老龄24～26月)大鼠脊髓背角的TRPV1的表达进行了观察,结果显示:(1)TRPV1在正常大鼠脊髓背角浅层的分布密度及其分布面积随年龄增长而逐渐减小;(2)在外周致炎状态下,脊髓背角TRPV1免疫反应产物密度在同年龄组内比较,青龄组减少,中龄和老龄组增加,而三年龄组内比较其分布面积时都明显增大,并且在非致炎组存在的组间差异消失.在青龄组大鼠,TRPV1免疫反应产物密度结果和分布面积结果并不一致,其原因未知.综上所述,本结果提示正常大鼠脊髓含TRPV1的纤维终末随年龄增长而减少,但是在致炎情况下,TRPV1支配面积减少的现象消失.这可能是由于外周炎症刺激重新募集了背根节神经元,而老龄大鼠这种能力更强.本实验还提示,用免疫组织化学技术检测脊髓化学物质有无变化,测量光密度值和测量面积的方法都应该予以考虑.
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脊髓辣椒素受体1(VR1)参与热敏感性的证据:老龄大鼠行为学和形态学相结合观察结果
以往的研究表明外周热伤害性感受器辣椒素受体1(VR1,也称为TRPV1)在热伤害性感觉中发挥着重要作用,但是脊髓VR1在其中扮演的角色尚不清楚.因此本实验利用老龄大鼠蜜蜂毒(BV)模型热痛敏(仅持续24 h)和机械性痛敏(持续1月以上)时程分离的行为学特点研究了在老龄大鼠中脊髓VR1在外周组织损伤和炎性痛状态下的热敏感性中扮演的角色.在BV注射后4 h(即热痛敏和机械性痛敏均存在时)、2周(即热痛敏消失而机械性痛敏存在时)和2月(即两种痛敏均消失时),验证了热敏感性(辐射热刺激)和机械敏感性(von-Frey纤维刺激),随后进行脊髓背角的VR1免疫组织化学染色.结果如下:(1)在未处理老龄大鼠组,VR1样免疫反应产物(LI)在脊髓背角主要分布于Ⅰ、Ⅱ层;(2)在经BV处理老龄大鼠组,外周损伤后4 h脊髓背角VR1-LI有轻微增加,但在2周后VR1-LI表达水平明显低于对照水平,而且在BV注射2月后,即两种痛敏均消失时,VR1-LI表达水平下调仍非常明显.本结果表明脊髓背角的VR1在空间分布上不随年龄改变而改变,但在周围化学组织损伤或炎症状态下,VR1-LI的表达水平可能与热敏感性的变化有动态相关性.由此我们提出除了外周位点,脊髓背角的VR1也可能参与了热痛阈水平的维持和热痛敏的产生.
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应用RNAi技术调节VR1基因表达
目的: 通过调节辣椒素受体1(VR1)基因表达,对VR1基因的功能及疼痛的基因治疗进行基础研究.方法: 应用RNA干扰(RNAi)技术干扰VR1基因在猴肾Cos-7细胞系中的表达.结果:应用RNAi技术特异性抑制了VR1基因在Cos-7细胞中的表达.随着小片段干扰性RNA(siRNA)浓度的增加,VR1蛋白的表达量逐渐减少.结论:应用RNAi技术可抑制VR1基因的表达,为开发更有效、安全、合理的镇痛药提供实验依据.
