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有机阴离子转运肽oatp2b1在痰湿证大鼠组织中表达及意义
目的:通过观察痰湿状态下大鼠有机阴离子转运肽oatp2b1基因和蛋白表达来探讨oatp2b1在痰湿转运中的作用.方法:24只大鼠随机分为2组,正常组、模型组各12只.模型组采用高脂饮食造模3个月,每只大鼠取脾、肝、肾组织各1块.采用实时荧光定量PCR、Western Blot方法及免疫组化法检测组织中oatp2b1的基因表达、蛋白表达情况.结果:模型组肝、肾组织中oatp2b1 mRNA表达量高于正常组(P＜0.01,P＜0.05);而模型组脾组织中oatp2b1 mRNA表达量低于正常组(P＜0.01).两组oatp2b1蛋白在脾、肝、肾组织有不同程度表达,但差异无统计学意义.模型组中脾脏的巨噬细胞、肝脏的枯否氏细胞及肾小管上皮细胞均有oatp2b1蛋白分布,较正常组表达增强.结论:痰湿伤脾,脾失运化状态下,肝、肾在痰湿转运中发挥重要作用,oatp2b1可能是机体参与痰湿运化的物质基础之一.
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从脾虚大鼠AA-Ⅰ的排泄与脏腑oatp2a1、oatp2b1的表达探讨脾肾关系
目的 通过观察脾虚大鼠马兜铃酸(aristolochic acid,AA)代谢与肾、大肠、小肠组织中有机阴离子转运肽(organic anion transporting polypeptide,oatp)2a1、oatp2b1 mRNA及蛋白表达的关系,探讨中医学脾肾之间的相互关系.方法 46只SD大鼠随机分为空白组(1 2只)、脾虚组(22只)、AA-Ⅰ组(6只)、脾虚AA-Ⅰ组(6只).脾虚组及脾虚AA-Ⅰ组采用利血平5 mg/(kg·d)皮下注射连续1 6天造模.空白组及脾虚组选取6只大鼠行颈动脉插管,并予AA-Ⅰ灌胃后5、1 5、30、45、60 min颈动脉取血行AA-Ⅰ药代动力学检测;脾虚组选10只大鼠行肾、大肠、小肠AA-Ⅰ组织浓度测定;脾虚组及空白组各取6只分别予生理盐水灌胃,AA-Ⅰ组、脾虚AA-Ⅰ组予AA-Ⅰ灌胃后60 min时间点取肾、大肠、小肠3种组织,采用RT-PCR及Western blot方法检测各组织中oatp2a1、oatp2b1 mRNA及蛋白表达.结果 与空白组比较,脾虚组大鼠灌胃后1 5、30、45、60 min时体内AA-Ⅰ血浆浓度值明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).脾虚组60 min时AA-Ⅰ血浆浓度下降,肾及大肠组织浓度升高,小肠中组织浓度明显下降.空白组与脾虚组中上述3种组织oatp2a1、oatp2 b1 mRNA表达无差异;与空白组比较,AA-Ⅰ组小肠oatp2 a1、oatp2b1 mRNA表达降低,大肠oatp2a1 mRNA表达降低(P ＜0.05,P＜0.01);与脾虚组比较,脾虚AA-Ⅰ组肾组织中oatp2a1、oatp2 b1 mRNA表达升高(P＜0.05),大肠组织oatp2b1mRNA表达升高(P＜0.05).结论 脾虚脾失运化状态下,AA-Ⅰ代谢差异可能与肾、大肠、小肠组织oatp2 a1、oatp2 b1表达改变相关,并提示肾、大肠在脾虚状态下物质代谢中发挥重要协调作用,验证了中医脾肾相关理论.
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有机阴离子转运肽oatp4a1与脾主运化本质的关系
目的:通过观察脾虚状下大鼠oatp4a1蛋白表达来探讨oatp4a1与脾主运化本质的关系.方法:36只♂大鼠随机分为空白组、空白AA(AA为马兜铃酸Ⅰ)组、脾虚组、脾虚AA组、高脂饮食组、高脂饮食AA组6组.高脂饮食及利血平造模21 d,造模成功后给予相应组别大鼠AA灌胃3d,末次给AA后1h内采集标本,免疫组化方法检测各组大鼠肺、肝、肾、胃、小肠、结直肠组织中oatp4a1的蛋白表达和分布情况.结果:oatp4a1在上述6种脏器中都有不同程度的表达,其在肺组织定位于细胞质和细胞核,其余组织定位于细胞质.正常情况下,oatp4a1在小肠中表达水平高(P＜0.01).oatp4a1在脾虚模型和高脂饮食模型组的小肠中表达水平下降(P＜0.05),结直肠中oatp4al表达水平较高(P＜0.05).结论:脾主运化功能可能与小肠吸收转运功能及定位于小肠的oatp4a1有着密切的关系.
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有机阴离子转运肽在药物转运中的作用
溶质运载蛋白家族(solute carrier family,SLC)和ATP结合盒转运蛋白家族(ATP binding cassette family,ABC)在药物吸收、消除和组织分布中起重要作用.本综述将对有机阴离子转运肽(organic anion transporting polypeptide,OATP)的新命名、分类、组织分布、功能及在药物转运中的作用加以介绍.
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靶向性近红外荧光染料在肝癌模型研究中的应用
目的 探讨七甲川花菁近红外荧光(near-infrared fluorescence,NIRF)染料IR-783在肝癌模型影像研究中的应用,分析该染料靶向肿瘤细胞的分子机制.方法 将标记荧光素酶的人肝癌细胞HepG2皮下接种裸鼠,测试肿瘤发生部位生物发光(bioluminescence,BIL)信号与NIRF信号的相关性.采用肾包膜下移植的方式建立人肝癌裸鼠移植(patient-derived xenograft,PDX)模型,观察IR-783对肿瘤边界的识别能力;苏木素-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,H&E staining)确认肿瘤发生的部位,免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)检测肝癌肿瘤组织中CEA、AFP、HIF1α和OATP3A1的表达;使用线粒体示踪剂(Mito Tracker)和溶酶体示踪剂(Lyso Tracker)确认NIRF染料在肝癌细胞中的结合部位;测试IR-783对正常肝细胞中混合培养的肝癌细胞鉴别能力.结果 人肝癌裸鼠皮下移植瘤BIL与NIRF强度具有较好的相关性;NIRF染料IR-783能够清晰识别肾包膜移植肝癌肿瘤边缘;IHC染色显示肿瘤组织中CEA、AFP、HIF1α和OATP3A1均高表达;IR-783主要结合在肿瘤细胞的线粒体与溶酶体中;标记GFP的人肝癌细胞HepG2能够被IR-783特异性识别.结论 IR-783是一种具有肿瘤靶向和成像特征的新型近红外荧光染料,其靶向性可能与肝癌组织中HIF1α和OATP3A1的高表达相关.
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胎盘中传递甲状腺激素的转运蛋白研究
甲状腺激素对机体各组织的新陈代谢起着重要的作用,也是人类妊娠期重要的内分泌激素.研究证实,在胎儿自身甲状腺激素分泌前,母体甲状腺激素能通过胎盘并参与胎儿内分泌系统的调节.这个过程中需要一些特殊的转运蛋白,有关人胎盘中的这些重要的转运蛋白相关研究很少,已证实的有人类胎盘中氨基酸转运载体、有机阴离子转运肽、单羧酸转运肽、Na+/I-同向转运蛋白等.但仍需进一步研究胎盘中转运甲状腺激素的一些蛋白作用,以了解导致胎儿生长受限、流产、胚芽种植失败、胎儿死亡等不良妊娠结局的发生机制.
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脾虚内环境湿浊转运机理研究
从脾虚病因病机出发来选择脾虚动物模型,采用了苦寒中药脾虚模型、利血平造模、高脂饮食造模、多因素造模脾虚大鼠模型来模拟脾虚内环境,以在多种生物体异物(食物和药物代谢产物、内源性及外源性毒素等)转运中起着重要作用的有机阴离子转运肽(OATP)作为脾虚内环境湿浊转运障碍的重要指标,来探讨脾虚内环境湿浊转运障碍的机理.
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药物转运蛋白在药物吸收、分布和排泄中的作用及对新药研发的意义
介绍了药物转运蛋白(drug transporter)在药物处置过程中的作用,探讨了其在新药开发中应用的可能性.通过对药物转运蛋白功能的了解和利用,可以增加口服药物的生物利用度,开发出对某些器官有靶向性的药物,或避免药物分布到某些器官中,从而提高药物的疗效,降低其的毒副作用;也可以控制药物的消除速度.在药物研发过程中可以通过两种手段达到上述目的,一是根据需要选择与某些转运蛋白有作用或没有作用的光导化合物,另一个则是使用转运蛋白抑制剂.在药物研发的初始阶段,就开始重视其药动学特性,这一观念近年来已被很多人所接受.对转运蛋白的深入认识和利用,建立研究药物转运特性的有效方法,在药物开发过程中将具有非常重要的意义.
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有机阴离子转运肽在药代动力学中的作用
近年来,药物转运体在药物的吸收及代谢过程中发挥着重要的作用.有机阴离子转运肽(organic anion transporting polypeptides,OATPs)家族作为摄取转运体中的一员,由于其在肝、肠、肾等重要组织中的表达而影响着临床药物的药代动力学,尤其是OATP1B1,OATP1 B3和OATP2B1.同时,众多临床药物被认为是OATP的底物药物(例如许多他汀类药物是OATP1B1的底物).一些药物可能抑制OATP而导致药物相互作用(例如环孢素A).此外,由OATP介导的基因多态性也导致了某些药物显著的个体差异.本文重点评述OATP家族不同成员在人体内的表达及其底物、OATP基因多态性、OATP介导的药物相互作用及其在临床药物的药动学与药效学中的作用.
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基于oatp3a1表达的苍附导痰汤治疗肥胖型多囊卵巢综合征模型大鼠机制的探讨
目的 探讨苍附导痰汤(CFDTT)对肥胖型多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠组织中oatp3a1表达的影响及作用机制的探讨.方法 采用改良Poresky联合高脂饮食造模法,制作肥胖型多囊卵巢综合征大鼠模型,造模后将大鼠随机分为模型组、二甲双胍(mefformin)组、苍附导痰汤低剂量组、苍附导痰汤高剂量组,每组12只,另选12只大鼠作为正常对照组,观察药物干预14天后各组大鼠肺、脾、肝、肾组织中oatp3a1基因及蛋白表达的变化.结果 与正常对照组比较,模型组肝、脾、肾组织中oatp3 a1表达量明显下降(P＜0.01),肺组织中oatp3a1无明显变化(P＞0.05);与模型组比较,CFDTT高剂量组和二甲双胍组大鼠肝、脾、肾组织中oatp3a1明显升高(P＜0.01),CFDTT低剂量组肝、脾、肾组织中oatp3a1表达轻度升高(P＜0.05),CFDTT高剂量组与二甲双胍组比较差异无显著性(P＞0.05).结论 苍附导痰汤可能通过调节肝、脾、肾组织中oatp3a1的表达,改善肝、脾、肾脏腑的功能,增强痰湿运化而发挥作用.
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脾虚湿困大鼠有机阴离子转运肽2a1、2b1和4a1动态表达的探讨:中医湿浊转运机理研究
目的 探讨脾虚湿困大鼠各脏腑组织有机阴离子转运肽(organic anion transporter polypeptide,oatp) 2a1、2b1和4a1表达的动态变化在湿浊转运中的机制.方法 48只大鼠被随机分成正常组、正常+马兜铃酸Ⅰ(aristolochic acid Ⅰ,AA-Ⅰ)5min组、正常+AA-Ⅰ 60min组、脾虚湿困组、脾虚湿困+AA-Ⅰ 5min组和脾虚湿困+AA-Ⅰ 60min组.经处理后取各组大鼠肺、胃、肝、脾、肾、大肠和小肠组织,检测各组织oatp2a1、2b1和4a1基因和蛋白表达.结果 与正常组比较,正常+AA-Ⅰ 60min组脾、肾、大肠、小肠oatp2a1 mRNA表达下调(P＜0.05),脾虚湿困组脾、肾、小肠oatp2b1和脾、胃oatp4a1 mRNA表达下调(P＜0.05),脾虚湿困+AA-Ⅰ 5min组小肠oatp2a1、大肠oatp2b1和脾oatp4a1 mRNA表达下调(P＜0.05),脾虚湿困+ AA-Ⅰ 60min组大肠oatp2a1和肺、肾、胃、小肠oatp2b1及肾、胃oatp4a1 mRNA表达下调(P＜0.05).各组各脏腑组织oatp2a1、2b1和4a1的蛋白表达与基因表达结果一致.结论 机体各脏腑组织可能通过调控oatp2a1、2b1和4a1的表达水平来实现体内的湿浊转运.
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人参总皂苷对痰湿证大鼠肝肾组织中有机阴离子转运肽oatp2b1基因和蛋白表达的影响
目的:观察人参总皂苷对痰湿状态下大鼠肝肾组织中有机阴离子转运肽oatp2b1表达的影响,探讨人参总皂苷治疗痰湿证的作用机理及oatp2b1在痰湿转运中的作用.方法:36只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组及人参皂苷组,每组12只.模型组采用高脂饮食造模3个月,造模后,人参皂苷组灌胃人参总皂苷水溶液(70 mg/kg),正常对照组与模型组灌胃等体积生理盐水,1次/d,连续4 w.每只大鼠取肝、肾组织各1块.采用实时荧光定量PCR及Western blot方法检测各组大鼠组织中oat p2b1的基因、蛋白表达情况并检测血清中总胆固醇(TG)、三酰甘油(TC)、高密度脂蛋白胆同醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平.结果:模型组肝、肾组织oatp2b1基因表达较正常对照组显著降低(P＜0.01,P ＜0.05),人参皂苷组肝、肾组织oatp2b1 mRNA表达量较模型组显著升高(P＜0.05,P ＜0.01);oatp2b1蛋白在肝、肾组织中有不同程度表达,三组间比较差异无统计学意义.模型组大鼠血清TC、TG、LDL水平较正常对照组显著升高,HDL水平显著降低(P＜0.5),提示高脂饮食可致血脂代谢率乱,痰湿模型造模成功.人参皂苷组大鼠血清TC、TG、LDL水平较模型组减低,HDL水平升高.结论:oatp2b1是参与痰湿转运的物质基础之一,人参总皂苷治疗痰湿证的机理之一可能是通过调节oatp2b1的表达而发挥运化痰浊的作用.
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苍附导痰汤对肥胖型多囊卵巢综合征模型大鼠子宫内膜及卵巢中oatp4a1表达与性激素水平的影响
目的：研究苍附导痰汤对肥胖型多囊卵巢综合征（PCOS）模型大鼠子宫内膜与卵巢中有机阴离子转运肽（oatp）4a1表达与性激素水平的影响。方法：复制大鼠肥胖型PCOS模型。50只大鼠随机均分为正常对照（等容生理盐水）组、模型（等容生理盐水）组、二甲双胍（0.043 g/kg）组与苍附导痰汤高、低剂量[5.68、1.42 g（生药）/kg]组，ig给药，每天1次，连续14 d。电化学发光法和Western blot法测定大鼠子宫内膜与卵巢中oatp4a1蛋白表达；酶联免疫吸附（ELISA）法测定大鼠血清中黄体生成素（LH）、促卵泡生成素（FSH）、睾酮（T）、雌二醇（E2）水平。结果：与正常对照组比较，模型组大鼠子宫内膜与卵巢中oatp4a1蛋白表达减弱，大鼠血清中LH、LH/FSH比值、T水平升高，FSH、E2水平降低，差异有统计学意义（P＜0.01）。与模型组比较，二甲双胍组和苍附导痰汤高、低剂量组大鼠子宫内膜与卵巢组织中oatp4a1蛋白表达增强，血清中LH/FSH、T水平降低，E2水平升高；二甲双胍组和苍附导痰汤高剂量组大鼠血清中LH水平降低，FSH水平升高，差异有统计学意义（P＜0.01或P＜0.05）。结论：苍附导痰汤能够增强肥胖型PCOS模型大鼠子宫内膜与卵巢中oatp4a1的表达，改善机体痰湿状态，纠正性激素水平。
关键词： 肥胖型多囊卵巢综合征 苍附导痰汤 有机阴离子转运肽 性激素 大鼠
