首页 > 文献资料
-
阿托伐他汀对兔急性心肌梗死非梗死区瞬间外向钾电流的影响
目的 观察阿托伐他汀对急性心肌梗死后非梗死区心肌细胞瞬间外向钾电流(I10)的影响.方法 选用新西兰纯种大耳白兔45只,随机分为3组各15只,分别为正常对照组(CON组);其他两组均采用结扎兔左前降支方法以建立心肌梗死模型后,一组为心肌梗死组(AMI组),分离左心室心肌梗死部位非梗死区(AMI-N)细胞,另一组为阿托伐他汀组,从手术日开始连续口服阿托伐他汀5mg/(kg·d),共7d,后分离AMI-N细胞.采用全细胞膜片钳记录技术分别记录非梗死区(AMI-N)心外膜心肌细胞(Epicardium,Epi)I10密度.3组均在手术建立模型前抽取静脉血,用生化分析仪测定血清总胆固醇.结果 3组血清总胆固醇水平比较差异无统计学意义(P＞0.05).3组Epi细胞I1.I～V曲线均呈电压依赖的线性曲线,电流密度于+70mV电压时达峰值,CON组于+70mV电压时I10电流密度为(1 15.83±6.04) pA/pF(n=15cells),AMI组为(72.29±8.74) pA/pF(n=15cells),阿托伐他汀组为(86.15±2.64)pA/pF(n=13cells),3组之间比较有明显差异(P＜0.01或P＜0.05).结论 AMI非梗死区Epi细胞I10密度与正常心肌细胞相比存在差异性,阿托伐他汀对心肌梗死非梗死区I10密度的异常有部分改善作用.
-
阿托伐他汀对兔急性心肌梗死后梗死边缘区和非梗死区瞬间外向钾电流影响的研究
目的：研究阿托伐他汀对急性心肌梗死后梗死边缘区和非梗死区心肌细胞瞬间外向钾电流（ Ito）的影响。方法30只大耳白兔随机分为正常对照组（ CON组）、心肌梗死组（AMI 组）和阿托伐他汀组，每组10只。建立AMI动物模型后，口服阿托伐他汀7 d后，用酶解法分离单个心室肌细胞，采用全细胞膜片钳记录技术分别记录左心室梗死边缘区（AMI-R）和非梗死区（AMI-N）心外膜心肌细胞（Epicardium， Epi） Ito密度。结果 CON组、AMI组细胞电流密度于＋70 mV电压时达峰值，AMI组较CON组Epi的I-V曲线整体呈下降趋势，CON组于＋70 mV电压时Ito电流密度明显高于AMI组中梗死边缘区和非梗死区（ P ＜0 A．01）。 AMI组中梗死边缘区和非梗死区心外膜电流密度间差异有统计学意义（ P ＜0．01）。 CON组、AMI组梗死边缘区和非梗死区的心外膜细胞的失活曲线趋势之间无明显变化，CON组与AMI组非梗死区半数失活电压比较有统计学意义（ P ＜0．05）。结论 AMI梗死边缘区和非梗死区Epi细胞Ito密度与正常心肌细胞想比存在差异性；阿托伐他汀缓解心肌梗死后左心室梗死边缘区和非梗死区Ito密度的电生理异常有部分改善作用。
-
黄芪对兔急性心肌梗死左室心外膜细胞瞬间外向钾电流影响的研究
目的 探讨黄芪对急性心肌梗死(AMI)后心外膜梗死边缘区及非梗死区心肌细胞瞬间外向钾电流(Ito)的影响.方法 建立AMI动物模型后,腹腔注射黄芪,酶解分离心室肌细胞,采用全细胞膜片钳记录技术分别记录梗死边缘区 (AMI-R)及非梗死区 (AMI-N) 心外膜心肌细胞(Epicardium,Epi) Ito密度.结果 正常左心室Epi细胞的Ito于+70 mV时的电流密度明显大于AMI-R及AMI-N(P<0.01);AMI-R及AMI-N Epi细胞的Ito密度差异有统计学意义(P<0.05);黄芪使受抑制的AMI-R及AMI-N Ito密度恢复.结论 黄芪对AMI-R及AMI-N Ito密度的异常有部分改善作用.
-
心肌细胞电生理学中药研究进展
总结心肌细胞电生理学的研究进展,包括研究方法、研究内容及其研究意义.心肌细胞电生理技术在中药研究方面的进展,包括抗心律失常中药研究的必然和必要,以及现状和展望进行探讨.
-
膜片钳技术在高血压研究中的应用
膜片钳技术(patch - clamp technique)是1976年由Nehetr 和Sakroann在电压钳的基础上发展而来的一种记录细胞膜离子通道电生理活动的技术.通过微电机与细胞膜之间形成紧密接触,采用电压钳或电流钳技术对生物膜上离子通道的电活动进行记录.膜片钳技术的应用将细胞水平和分子水平的生理学研究联系在一起,已成为现代细胞电生理研究的常规方法,使人们对于疾病和药物作用的认识不断更新.膜片钳技术用于心血管领域的研究也越来越多.本文拟对膜片钳技术在高血压病研究中的应用作一综述.
-
大鼠冠状动脉平滑肌细胞离子通道研究中的急性酶分离技术
膜片钳技术的应用,为从分子水平了解生物膜离子通道的门控动力学特征及通透性、选择性等膜信息提供了直接的手段,使人们对细胞膜通道功能的认识进入了一个崭新的阶段,对研究心脑血管离子通道电生理特性具有相当重要的意义[1].
-
Na+/Ca2+交换体α-2(807-844)抗体的制备及其对大鼠心肌细胞Na+/Ca2+交换电流的抑制作用
目的 在制备和纯化抗心肌Na+/Ca2+交换体α-2(807- 844)肽段抗体的基础上,观察抗体对大鼠心肌细胞Na+/Ca2+交换电流及L型钙电流(ICa)、瞬时外向钾电流(Ito)和内向整流钾电流(Ik1)的影响.方法 利用人工合成的α-2(807-844)多肽免疫兔制备抗α-2(807- 844)抗体,抗血清经Protein A亲和柱纯化,利用全细胞膜片钳技术观察纯化后抗体对心肌细胞Na+/Ca2+交换电流(INa/Ca)、L型钙电流(ICa)、瞬时外向钾电流(Ito)和内向整流钾电流(Ik1)的影响.结果 经主动免疫,抗Na+/Ca2+交换体α- 2(840-877)抗血清效价达1∶243000,纯化后抗α-2(840- 877)抗体浓度为7.21 mg/mL.纯化后的抗体在SDS - PAGE时出现清晰的2条带,其分子量分别为25 kD和50 kD左右.在1 nmol/L～104 nmol/L浓度范围内,抗α-2抗体对成年大鼠心肌细胞外向和内向Na+/Ca2+变换电流均表现为剂量依赖性的抑制作用；对Ito和Ik1则均未见明显影响.此外,104 nmol/L该抗体对L型钙电流亦具有抑制作用.通过氨基酸序列比对发现,α- 2(807 - 844)肽段与L型钙通道第2结构域孔环(697～730位氨基酸)序列相似度为23.7％,可能是抗体对L型钙通道出现交叉反应的原因.结论 在1 nmol/L～103 nmol/L浓度范围内,抗心肌Na+/Ca2+变换体α-2(807- 844)抗体可特异性抑制大鼠心肌Na+/Ca2+变换活动；对L型钙通道电流、瞬时外向钾通道电流和内向整流钾通道电流均未见明显影响.
关键词： 心肌 Na+/Ca2+交换体 抗体 膜片钳技术 离子通道 -
在体膜片钳技术的发展概况
离子通道是神经及肌肉、腺体等组织细胞膜上的一类蛋白结构,对细胞功能发挥具有重大意义.为探究离子通道功能和结构,许多电生理技术被发明创造.20世纪70年代,德国Max-Planck(马普)生物物理化学研究所的Neher等[1]发明了膜片钳技术(patch clamp technique),把电生理的研究精度提高到1 pA的电流分辨率,1 μm的空间分辨率和10 μs的时间分辨率的记录水平,因此获得了1991年诺贝尔医学和生理学奖.
-
二甲基-氨氯吡咪和牛黄酸对大鼠心室肌细胞Na+/Ca2+交换电流的影响
利用全细胞膜片钳技术,采用胶原酶 B 急性分离的大鼠心室肌细胞,研究了牛黄酸和二甲基-氨氯吡咪对心肌细胞膜 Na+/Ca2+交换电流的影响.结果表明,10 μmol, 20 μmol 和 40 μmol 的二甲基-氨氯吡咪可使 Ni2+ 敏感电流浓度依赖性地增加;膜电位为 +50 mV 时分别增加 (27±7)%,(121±43)%,和 (173±68)%;膜电位为 -100 mV 时分别增加(110±52)%,(221±88)%和(281±80)%.牛黄酸对 Na+/Ca2+交换的内向和外向电流均无影响.
关键词： 二甲基-氨氯吡咪 牛黄酸 膜片钳技术 心肌Na+/Ca2+交换电流 -
缺氧及谷氨酸对大鼠海马神经元NMDA通道的影响
目的 观察大鼠海马神经元模拟缺血缺氧时谷氨酸诱发电流的改变,研究缺氧和谷氨酸对大鼠海马神经元N-甲基-D-天门冬氨酸(N-methyl-D-aspartic acid,NMDA)通道开放动力学的影响,为中枢神经损伤的康复提供理论依据.方法 实验分为6组;①对照组:通氧+20μmol/LL-Glu+1.0μmol/L Gly;②组1:通氧+50μmol/LL-Glu+1.0 μmol/L Gly;③组2:通氧+100 μmol/L L-Glu+1.0 μmol/L Gly;④组3:通氧+200μmol/L L-Glu+1.0μmol/L Gly;⑤组4:缺氧+20 μmol/L L-Glu+1.0μmol/L Gly;⑥组5:缺氧+20 μmol/L L-Glu+1.0μmol/L Gly+30 μmol/L MK-801.以原代培养的大鼠海马神经元为标本,运用膜片钳技术的细胞吸附式方法记录NMDA通道的单通道电流.结果 在急性缺氧条件下,NMDA通道的开放时间常数τ1,τ2较对照组延长,分别由(0.47±0.12)ms,(5.42±0.33)ms变为(1.02±0.17)ms,(7.47±0.93)ms;关闭时间常数τ1,τ2较对照组明显缩短,分别由(21.13±4.21)ms,(167.83±23.23)ms变为(6.54±1.44)ms,(21.32±2.87)ms;平均开放概率增大,由0.17±0.11变为0.79±0.32,差异有显著意义(P＜0.05).谷氨酸浓度增加时,NMDA通道开放时间常数增大,关闭时间常数减小,开放概率增大.结论 缺氧及谷氨酸能提高海马神经元NMDA通道的兴奋性,促进NMDA通道开放增加.
-
大鼠心肌细胞急性分离方法
目的探讨酶法分离大鼠心肌细胞过程中的各种影响因素,提高细胞成活率和膜片钳实验成功率.方法采用Lan gendorff灌流,先用无钙液灌流7～8 min,再用含胶原酶P 0.1～0.3 g/L的酶液灌流8～1 0min,剪下心室肌组织,KB液中用吸管吹打分散,过150 μm筛网,放置6～7 h后进行膜片钳实验.结果在分离细胞过程中,注意控制水、酶、温度、pH、O2等各种影响因素,可得到横纹清晰、膜良好、长杆状的心肌细胞.结论仔细调整和控制细胞分离过程中的影响因素可以保证心肌细胞成活的数量和质量,有利于膜片钳实验的顺利进行.
-
苯丙-甲硫-精-苯丙氨酸多肽对豚鼠心室肌细胞Na+/Ca2+交换尾电流的影响
目的研究苯丙-甲硫-精-苯丙氨酸(FMRFa)多肽对心肌细胞膜钙瞬变触发的Na+/Ca2+交换尾电流的影响.方法采用蛋白酶E急性分离的豚鼠心室肌细胞.利用全细胞膜片钳技术观察FMRFa多肽对心肌细胞膜Na+/Ca2+交换尾电流的作用.结果FMRFa多肽1、5、10、20μm可分别抑制Na+/Ca2+交换尾电流(13±3)%,(25±7)%,(73±9)%和(110±10)%.结论FMRFa多肽可剂量依赖性地抑制豚鼠心室肌细胞膜钙瞬变触发的Na+/Ca2+交换尾电流.
-
抗钠-钙交换体α-2抗体对大鼠心脏正性肌力作用
目的 观察抗钠-钙交换体α-2(807-820)抗体对大鼠心功能影响并分析其机制.方法 以化学合成的α-2(807-820)肽段作为抗原免疫大鼠制备并纯化抗体,利用Langendorff离体灌流系统观察其对大鼠心功能影响;利用全细胞膜片钳技术观察抗体对心肌细胞钠-钙交换电流作用.结果 大鼠经主动免疫后,抗α-2(807-820)抗血清滴度明显升高,纯化后抗体浓度为6.3 mg/mL,聚丙烯酰胺凝胶电泳时仅有1条带出现;10和40 mmol/L的抗体可明显升高离体灌流大鼠心脏左室发展压、左室压大上升速率和下降速率,这一效应可被KB-R7943阻断;膜片钳实验表明,抗α-2(807-820)抗体(40 nmol/L)可使外向和内向的钠-钙交换电流分别从给药前的(1.05±0.17)、(0.86±0.21)pA/pF增加至(1.53±0.28)、(1.23±O.31)pA/pF(P＜0.05).结论 抗α-2(807-820)抗体通过激动心肌钠-钙交换体不仅可以增强心肌的收缩力和加快心肌收缩的速度,还可促进心肌舒张.
-
下丘脑神经元中游离Ca2+的电生理测定法
目的采用膜片钳技术通过对SD乳鼠下丘脑神经元上Ca2+激活K+通道(KCa)Ca2+敏感性的研究测定其细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i).方法首先应用内面向外式研究不同[Ca2+]i时KCa通道的开放概率(P0),作出量效曲线,再应用细胞贴附式求得生理状态下此通道的开放概率,从量效曲线上查出的细胞内游离Ca2+浓度.结果试验表明SD乳鼠下丘脑神经元上KCa通道的P0具有对[Ca2+]i的高度敏感性,求得下丘脑神经元内的[Ca2+]i为0.1μmol/L.结论实验结果说明此电生理法测定[Ca2+];具有较高的可靠性和准确性.
关键词： 细胞内游离Ca2+ 膜片钳技术 Ca2+激活K+通道 细胞信号转导 -
下丘脑神经元钙激活钾通道的温度效应
目的研究新生SD乳鼠下丘脑神经元钙激活钾通道的温度敏感性.方法采用膜片钳技术内面向外式.结果随着温度的增加,通道的电导及开放概率显著增加.37℃、39℃时电导的Q10为1.63和1.86,开放概率的Q10为2.83和3.56,通道的开放、关闭时间都具有温度依赖性缩短.结论下丘脑钙激活钾通道具有高度的温度敏感性,对它的进一步研究可能有助于阐明体温调节的本质因素.
-
化浊解毒活血方对兔心肌梗死1周后瞬间外向钾电流跨壁异质性的影响
目的:探讨化浊解毒活血方对急性心肌梗死(AMI)1周后心外膜梗死边缘区心肌细胞瞬间外向钾电流(Ito)的影响.方法:采用结扎冠状动脉左前降支的方法建立兔心肌梗死模型,30只兔随机分为3组:对照组,AMI组和化浊解毒活血方+AMI组.采用膜片钳技术研究化浊解毒活血方对左心室梗死边缘区心外膜(EpicaIdium,Epi)、心内膜(En-docardium,Endo)和中层(Midmycoardjum,M)心室肌细胞的Ito密度的改变.结果:AMI组细胞的Ito电流密度明显降低,Epi与M、Endo之间差异较明显(P<0.01);化浊解毒活血方+AMI组使心外膜Ito电流密度进一步降低,三层细胞间无统计学意义(P>0.05).结论:心肌梗死对Ito的跨壁异质性有明显影响;化浊解毒活血方减弱心肌梗死后Ito的跨壁异质性.
-
成年大鼠适用于膜片钳技术的研究进展
膜片钳技术是目前进行离子通道研究的好方法.但是目前膜片钳技术的研究多集中于幼鼠,随着研究的深入,人们势必涉及到成年甚至老年哺乳类动物中枢神经元上的离子通道.近年来人们利用酶急性分离技术已成功地从成年大鼠标本上分离出完整的神经元,为膜片钳技术应用于成年或老年大鼠提供了可靠的技术保证,本文将对膜片钳技术应用于成年或老年大鼠脑片的研究进行综述.并对其发展及在中医中的应用进行展望.
-
急性缺氧对大鼠海马神经元N-甲基-D-天门冬氨酸诱发电流的影响
目的:研究N-甲基-D-天门冬氨酸(N-methyl-D-asparate,NMDA)在大鼠海马神经元上诱发电流的特性以及急性缺氧对大鼠海马神经元NMDA诱发电流(INMDA)的影响.方法:运用常规全细胞膜片钳技术,在原代培养第七八天的大鼠海马神经元上记录INMDA,并建立神经细胞体外急性缺氧模型,由Clampex 8.0软件采样系统获得的图形,直接进入Clampfit 8.0软件处理数据.结果:①在钳制电压为-60 mV时,100μmol/L NMDA可在海马神经元上诱发出一大的内向电流,INMDA的峰值为(-745.461±123.731)pA.I-V曲线显示在钳制电压为正值时INMDA呈外向电流,而钳制电压为负值时则为内向电流.给予NMDA后,海马神经元上即刻诱发出内向电流,随后尽管持续给药20s,但INMDA开始发生衰减.②在钳制电压为-60 mV时,海马神经元急性缺氧2 min后,细胞外给予100 μmol/L NM-DA可诱发一大而增强的INMDA,峰值为(-1 670.49±202.09)pA,峰值显著增大(t=12.572,P＜0.01),峰值增加率为130%.结论:NMDA诱发的电流呈现明显的内向整流性和失敏特性,急性缺氧能提高海马神经元NMDA通道的兴奋性,NMDA受体参与了兴奋毒性的产生.
-
小直径DRG神经元上表达的电压门控离子通道特性
目的 建立一种简单易行,满足多种药理学实验需要的大鼠DRG神经元急性分离方法,探讨大鼠DRG神经元的电生理特性.方法 对160～ 220 g SD大鼠DRG神经元进行急性分离,并采用全细胞膜片钳技术记录电压门控离子通道钠电流、钙电流和钾电流.结果 急性分离的大鼠DRG神经元呈圆形或椭圆形,胞质均一,折光性好,所表达的钠通道电流、钙电流和钾电流符合其电生理特性.结论 运用该方法急性分离细胞操作简单易行,容易获得和辨认,电生理特征明确,适用于疼痛等疾病的电生理研究和相关药物的作用机制考察.
-
豚鼠心室肌细胞的分离及其基本电生理特性的观察
目的 分离豚鼠单个心室肌细胞,并观察其基本电生理特性.方法 Langendorff灌流,胶原酶法分离心室肌细胞;应用膜片钳全细胞模式记录心室肌细胞的动作电位和L型钙通道电流.结果 酶法分离得到存活杆状细胞达50%以上.全细胞电流钳模式下记录,细胞静息电位为(-69.9±3.4)mV,复位到95%时的动作电位时程(APD95)为(313.1±38.9)ms.全细胞电压钳模式下记录到典型L型钙通道电流.结论 该方法能够简单有效地获得性能稳定的心室肌细胞,尤其适用于膜片钳心电生理学的研究.
