首页 > 文献资料
-
6-羟多巴胺在帕金森病发病中的作用
6-羟多巴胺是一种选择性作用于儿茶酚胺能神经元的神经毒素,可引起黑质多巴胺能神经元细胞膜脂质过氧化、细胞内Ca2+超载、线粒体呼吸链复合酶I功能抑制,维生素C、谷胱甘肽、半胱氨酸、去铁胺、阿扑吗啡、血管活性肠多肽等抗氧化剂可减轻其不良反应.
-
6-羟多巴胺毁损的帕金森病模型大鼠脚桥核神经元放电频率和放电形式的变化
目的观察6-羟多巴胺毁损的帕金森病(Parkinson's disease,PD)模型大鼠脚桥核(pedunculopontine nucleus,PPN)神经元放电频率和放电形式的变化.方法采用在体玻璃微电极细胞外记录法,记录正常对照组和PD模型组大鼠PPN神经元的电活动.结果对照组和PD组大鼠PPN神经元的放电频率分别为(9.0±0.8)Hz[(0.5-25.2)Hz,n=56]和(16.1±1.6)Hz[(1.2-49.7)Hz,n=57],PD组大鼠的放电频率显著高于对照组(P＜0.001).在对照组大鼠脚桥核,68%(38/56)的神经元呈现规则放电,27%(15/56)呈现不规则放电,5%(3/56)为爆发式放电;在PD组大鼠脚桥核,具有规则、不规则和爆发式放电的神经元比例分别为39%(22/57)、47%(27/57)和14%(8/57),PD组大鼠具有不规则放电的神经元比例明显高于对照组(P＜0.05).结论PD大鼠PPN中神经元的放电频率增高和不规则放电增多,这可能在帕金森病的病理生理变化中具有重要作用.
-
选择性5-HT1A受体拮抗剂WAY-100635增加6-羟多巴胺损毁大鼠杏仁基底外侧核的神经活动
本文采用玻璃微电极细胞外记录法,观察正常大鼠和6-羟多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)损毁黑质致密部大鼠杏仁基底外侧核(basolateral nucleus,BL)神经元电活动的变化,以及体循环给予选择性5-HT1A受体拮抗剂WAY-100635对神经元电活动的影响.结果显示,正常大鼠BL投射神经元和中间神经元的放电频率分别足(O.39±0.04)Hz和(0.83±0.16)Hz,6-OHDA损毁大鼠BL投射神经元和中间神经元的放电频率分别足(0.32±0.04)Hz和(0.53±0.12)Hz,与正常大鼠相比无显著差异.在正常大鼠,所有投射神经元呈现爆发式放电;94%的中间神经元为爆发式放电,6%为不规则放电.在6.OHDA损毁大鼠,85%的投射神经元呈现爆发式放电,15%为不规则放电;86%的中间神经元为爆发式放电,14%为不规则放电,与正常大鼠相比无显著差别.静脉给予0.1 mg/kg体重的WAY-100635不改变正常大鼠和6-OHDA损毁人鼠BL投射神经元和中间神经元的放电频率.然而,0.5 mg/kg体重的WAY-100635却显著降低正常大鼠BL投射神经元的平均放电频率(P<0.01),明显增加6-OHDA损毁大鼠BL投射神经元的平均放电频率(P<0.004).高剂量WAY-100635不影响正常大鼠和6-OHDA损毁大鼠BL中间神经元的平均放电频率.结果表明,黑质多巴胺能损毁后内在和外在的传入调节BL神经元的活动,在正常大鼠和6-OHDA损毁大鼠5-HT1A 受体调节投射神经元的活动,并且在6-OHDA损毁大鼠WAY-100635诱发投射神经元平均放电频率增加.结果提示,5-HT1A 受体在帕金森病情感性症状的产生中起重要作用.
-
帕金森病大鼠中缝背核5-羟色胺能神经元放电频率和放电形式的变化
实验采用玻璃微电极细胞外记录法,观察了帕金森病(Parkinson's disease,PD)大鼠中缝背核(dorsal raphe nucleus,DRN)5-羟色胺(5-hydroxytrypamine,5-HT)能神经元电活动的变化.结果发现,对照组和PD组大鼠DRN中5-HT能神经元的放电频率分别为(1.61±0.56)Hz和(2.61±1.97)Hz,PD组大鼠的放电频率显著高于对照组(P＜0.05).在对照组大鼠,79%的神经元呈现规则放电,21%为爆发式放电;在PD组大鼠,具有规则、不规则和爆发式放电的神经元比例分别为36%、16%和47%,爆发式放电的5-HT能神经元比例明显高于对照组(P＜0.05).结果表明,帕金森病大鼠DRN中5-HT能神经元的放电频率增高,且爆发式放电增多.
-
海马内NA能神经损毁对抗急性低氧诱发皮质酮分泌
本工作观察了6-羟多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)损毁大鼠腹侧海马去甲肾上腺素能神经对急性低氧诱发皮质酮分泌的影响.结果显示,吸入10.4% O2 30min后血浆皮质酮水平显著升高,6-OHDA注入腹侧海马致使海马内去甲肾上腺素(NA)含量降低(-38.5%); 血浆皮质酮水平也较未损毁组为低(-33.2%).吸入10.4% O2后,皮质酮对低氧刺激的反应性升高现象消失.结果提示:海马内NA可能参与急性低氧应激引发血浆皮质酮分泌的调节活动.
-
左旋多巴治疗对实验性帕金森病大鼠黑质纹状体TNF-α表达的影响
目的 研究左旋多巴(L-dopa)治疗对实验性帕金森病(PD)大鼠黑质纹状体肿瘤坏死因子(TNF-α)表达的影响.方法 黑质定位注射6-羟多巴胺(6-OHDA)制备偏侧PD大鼠模型,经50～100 mg/kg体重L-dopa灌胃治疗4周后,检测双侧额叶皮质、黑质和纹状体区域TNF-α的表达.结果 6-OHDA损毁侧黑质和纹状体TNF-α含量和阳性细胞面密度分别显著高于健侧(均P<0.05).损毁侧与健侧TNF-α含量的比率随L-dopa治疗用量的增加而增高,且均显著高于对照组(P<0.05).结论 L-dopa治疗进一步加剧了PD大鼠黑质纹状体区域TNF-α的高表达.
-
内侧前脑束不同部位注射6-羟多巴胺建立帕金森病大鼠模型的对比性研究
目的 建立简单、易行、成功率高的制作帕金森病大鼠模型的方法.方法 注射同等剂量的6-羟多巴胺于内侧前脑束不同部位(第1组注射位点:位点1:前囟后1.8 mm,右侧2.0mm,背腹8.0 mm;位点2:前囟后1.8mm,右侧3.0 mm,背腹7.5 mm.第2组注射位点:位点1:前囟后1.8 mm,右侧2.5 mm,背腹8.0 mm;位点2:前囟后1.8 mm,右侧2.5 mm,背腹7.5 mm),造成黑质多巴胺能神经元的损坏,运用阿朴吗啡诱发旋转试验及免疫组化检验模型是否成功.比较两组注射位点的成功率.结果 采用第1组注射位点的成功率为51%,第2组注射位点的成功率为77%,显著高于第1组(P＜0.01).结论 采用第2组注射位点制作帕金森病大鼠模型成功率高、易行.
-
酚红在神经细胞中的弱雌激素样作用研究
目的 研究酚红在神经细胞培养中的弱雌激素样作用.方法 使用不同培养基(其一含酚红、另一无酚红)培养MN9D细胞,并分别于培养基中加入胶质源性神经营养因子(GDNF),然后加入相同浓度6-羟多巴胺(6-OHDA)进行损伤,后四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞的存活状况;提取不同培养基中的正常细胞,Western blot法检测雌激素α受体(ERα)在细胞内的移位.结果 培养基中没有酚红时的细胞存活率较有酚红时低,且当GDNF与酚红同时存在时,细胞的存活率比只有GDNF或酚红存在时高;酚红能够促使ERα从胞质转移至细胞膜.结论 酚红能够激活ERα,并具有一定的神经保护作用.
关键词： 酚红 雌激素 胶质源性神经营养因子 雌激素受体α 6-羟多巴胺 -
早期帕金森病大鼠模型的建立
目的探索建立早期帕金森病(Parkinson disease,PD)大鼠模型.方法成年大鼠单侧纹状体内注射6-羟多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA).注射后第7天,通过姿势不对称性、前肢始动不能、前肢使用不对称性、阿朴吗啡诱发旋转实验进行行为学评估.观察组织学变化,取鼠脑黑质节段(n=6),固定、石蜡包埋、连续冠状切片.焦油紫(Nissl)染色显示黑质神经细胞;抗酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)抗体免疫组织化学染色显示黑质多巴胺(DA)能神经元,光镜下观察并进行细胞计数,统计学分析处理数据.而且,使另一部分模型动物(n=6)继续存活到第28天,鉴定所选动物模型的可靠性.结果纹状体内注射6-OHDA后第7天,动物行为学出现有意义改变,黑质内神经细胞出现肿胀等变性坏死的早期形态变化,DA能神经元出现有意义减少;注射后的第28天,行为学改变更加显著,神经细胞大量减少,DA能神经元数量减少到92%.结论纹状体内注射6-OHDA后第7天,通过行为学方法能确定早期PD动物模型.
-
百可利对6-羟多巴胺不同注射位点帕金森病模型大鼠的治疗作用
目的：观察百可利对6-羟多巴胺（6-OHDA）内侧前脑束（MFB）和纹状体尾壳核（CPu）两个不同注射位点帕金森病（PD）模型大鼠的治疗作用，两个注射位点模型分别记为：MFB-M，CPu-M。方法运用6-OHDA两点注射法，损毁大鼠左侧中脑多巴胺能神经元，制备PD模型。记录大鼠后肢肌电（EMG）信号频率观察肌肉震颤；测定大鼠自主活动；电化学法检测纹状体内多巴胺（DA）及其代谢产物含量；免疫组化法检测大鼠脑内酪氨酸羟化酶（TH）、OX-42表达；观察神经元超微结构变化。结果给药3周后，两个注射位点的模型组行为改变趋势一致，百可利在两个注射位点的模型动物上药效表现不同，在CPu-M组可明显提高PD大鼠自主活动数（P＜0.05）。EMG信号分析显示，在MFB-M组，给予百可利，肌电频率降低55％；在CPu-M组，给予百可利，肌电频率降低60％。EMG时效研究表明，在 CPu-M组，百可利药效持续420 min以上。纹状体递质水平显示，两个注射位点的模型组DA递质水平差异很大，在CPu-M组，百可利能够明显升高DA水平（P＜0.05）。两个注射位点的模型组免疫组织化学结果趋势一致，在CPu-M组，百可利有更明显神经元保护作用（P＜0.05），在MFB-M组，百可利抑制小胶质细胞过度激活作用更强（P＜0.01）。结论不同注射位点制备的PD模型能够反映不同时期PD的病理变化，百可利可通过抑制炎性介质生成和释放、保护残存神经元、恢复神经元功能等机制改善PD不同发病时期模型动物的行为学症状。
-
木犀草素联合芦丁抗6-羟多巴胺诱导的帕金森病大鼠震颤及神经保护作用
目的 探讨木犀草素和芦丁组合物(mixture of luteolin and rutin,MLR)对6-羟多巴胺(6-OHDA)诱导的帕金森病(parkinson′s disease,PD)模型大鼠减轻震颤和保护神经元的作用及机制.方法 运用6-OHDA两点注射法,损毁大鼠左侧中脑多巴胺能神经元,复制PD模型.2周后,将造模成功大鼠随机分为模型组、美多芭给药组(50 mg·kg-1)、MLR给药组(125、250、375 mg·kg-1),另取手术并注射生理盐水、经检测无旋转运动的大鼠为假手术组.在给药后第3周记录大鼠后肢肌电(EMG),观察肌肉震颤.行为学检查完毕后采用免疫组化法检测大鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH)、多巴胺转运体(DAT)、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞数.结果 EMG检测结果显示,MLR各给药组可明显降低大鼠的震颤频率和幅度,中、高剂量组的作用优于美多芭组.免疫组化结果显示,MLR高剂量组TH免疫阳性神经元的数目约为模型组的499.14%,MLR高剂量组GFAP免疫阳性星形胶质细胞的数目比模型组降低了43.68%.结论 MLR可剂量依赖性抑制PD模型大鼠震颤,减轻神经元受损程度,抑制星形胶质细胞激活和促炎因子释放,从而延缓DA能神经元进行性退变.
-
TNF-α、IL-6在6-OHDA诱导帕金森病大鼠脑中的改变
目的 探讨6-羟多巴胺(6-Hydroxydopamine,6-OHDA)诱导帕金森病大鼠模型脑中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平的改变.方法 取SD大鼠80只,随机分成模型组与对照组,每组又分1,7,14,21 d亚组.实验组大鼠左侧纹状体内注射6-OHDA,对照组注射等量生理盐水.术后各时间点观察各亚组经阿朴吗啡诱导的大鼠行为改变并行安乐死,取脑组织行免疫组织化学染色,观察黑质多巴胺能神经元数量变化;用酶联免疫吸附法测定大鼠中脑黑质组织匀浆中TNF-α、IL-6的水平.结果 实验组大鼠术后7 d出现不同程度的向健侧缓慢旋转(3.25±0.76)次/min,14 d旋转次数增多(8.42±1.25)次/min,21 d达到高峰(11.98±2.52)次/min;对照组各时间点均未发现向健侧旋转.实验组注射侧黑质TH阳性神经元数量1,7,14,21 d组较对照组明显下降(P<0.01),且其数目的 减少随时间延长而愈加显著,21 d时下降到低;实验组的TNF-α、IL-6水平较对照组持续增高.结论 炎症因子TNF-α、IL-6参与6-OHDA制备帕金森病大鼠模型黑质多巴胺能神经元损伤过程.
-
去松果体与去势对帕金森病模型大鼠中脑多巴胺神经元的影响
目的 探讨去松果体(pinealectomy,PX)与去势(gonadectomy、GDX)对帕金森病(parkinson's disease,PD)模型大鼠中脑多巴胺(dopamine,DA)神经元的影响.方法 80只雄性Wistar大鼠按照随机数字表法分为NS组、N±6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)、PX+6-OHDA、GDX+6-OHDA、PX+GDX+6-OHDA5组,每组16只.术后60 d,于大鼠中脑黑质致密部(substantia nigra pars compacta,SNc)、腹侧被盖区(ventral tegumental area,VTA)注入6-OHDA,14 d后处死取材.HE染色观察胶质细胞增生情况,胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)染色观察星形胶质细胞数量,Tunel染色观察细胞凋亡数量,免疫组化SP法检测酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)阳性细胞和纤维及凋亡相关蛋白Bax、Bcl2的变化.结果 (1)SNc、VTA胶质细胞增生数按照组NS、N+6-OHDA、PX+6-OHDA、GDX+6-OHDA、PX+GDX+6-OHDA顺序依次增加(HE染色:Hc=280.178,P＜0.01;Hc=334.260.P＜0.01)(GFAP染色:Hc=367.081.P＜0.01;Hc=376.049,P＜0.01);(2)SNc、VTA细胞凋亡数按照组NS、N+6-OHDA、PX+6-OHDA、GDX+6-OHDA、PX+GDX+6-OHDA顺序依次增加(Hc =344.401,P＜0.01;Hc=326.198,P＜O.01);(3)SNc、VTA TH(+)阳性细胞数按照组NS、N+6-OHDA、PX+6-OHDA、GDX+6-OHDA、PX+GDX+6-OHDA顺序依次显著减少(Hc=366.532,P＜0.01;Hc=372.565,P＜0.01);(4) SNc、VTA TH(+)阳性细胞和纤维灰度值按照组NS、N+6-OHDA、PX+6-OHDA、GDX+6-OHDA、PX+GDX+6-OHDA顺序依次增加(F=517.239,P＜0.01;F=526.758,P＜0.01);(5) Bax表达:NS组弱阳性,N+6-OHDA组阳性,余三组强阳性;Bcl2表达:各组均弱阳性.结论 PX、GDX显著加重6-OHDA神经毒性,GDX作用大于PX,PX+GDX作用强.
-
切断交感神经小鼠在情绪应激中免疫功能的改变
目的了解交感神经系统在情绪应激中的免疫调节作用.方法采用本实验室建立的情绪应激的动物模型和肾上腺素能神经毒剂6-羟多巴胺(6-OHDA)选择性损毁外周交感神经,检测小鼠免疫功能的变化情况.结果每天20分钟,持续6天的情绪应激可显著提高小鼠血清中糖皮质激素的含量,抑制体液免疫,使血清中抗体水平明显下降,并且可导致胸腺萎缩,脾脏结构破坏,胸腺、脾脏指数下降.应用6-OHDA处理后,应激小鼠的抗体水平增加,胸腺、脾脏结构和胸腺指数与对照组相比没有明显差别.结论交感神经系统在应激引起的抑制作用中发挥了重要的调节作用.
-
热休克蛋白70在大鼠黑质多巴胺神经元损伤中的表达
目的:探讨热休克蛋白70(HSP70)在大鼠黑质多巴胺(DA)神经元损伤中的表达以及在帕金森病(PD)诊断中的意义.方法:将48只大鼠随机分为黑质DA神经元损毁组(PD组)和对照组各24只.PD组注射6-羟多巴胺(6-OHDA)损毁大鼠黑质DA神经元,对照组仅注射6-OHDA溶媒.于注射后1、7、14及21 d采用免疫组织化学、尼氏染色、电镜手段动态观察HSP70在损毁的DA神经元中的表达以及DA神经元形态学变化.结果:在6-OHDA损毁黑质1～21 d,对照组黑质HSP70表达和尼氏细胞计数差异无显著性(P>0.05).PD组HSP70表达在1 d高,7 d锐减,14和21 d则逐渐减少,分别为25%、74%、87%及88%;尼氏细胞计数在4个时间点分别减少1%、13%、35%及48%;超微结构损伤程度呈进行性加重.结论:PD渐进性发病具有其形态学基础,HSP70可作为DA神经元存活的指标和早期诊断PD的指标.
-
谷胱甘肽对黑质多巴胺能神经元保护作用的研究
目的探讨谷胱甘肽对多巴胺能神经元保护作用.方法用还原型谷胱甘肽和6-羟多巴胺孵育大鼠脑片1小时,用抗酪氨酸羟化酶免疫组织化学法观察黑质阳性神经元胞体及突起的变化.结果 6-羟多巴胺使脑片黑质酪氨酸羟化酶阳性神经元突起明显减少,而胞体不变;谷胱甘肽单独不影响多巴胺能神经元,但却阻止6-羟多巴胺引起的神经元突起减少.结论谷胱甘肽能阻止6-羟多巴胺导致的多巴胺能神经元的变性,对多巴胺能神经元具有保护作用.
-
偏侧帕金森病大鼠黑质胶质细胞变化的实验研究
目的:探讨偏侧帕金森病(Parkinson's disease,PD)大鼠黒质致密部(SNpc)胶质细胞的变化.方法:6-羟多巴胺(6-OHDA)立体定向注射制备偏侧PD大鼠模型.采用免疫组化方法观察大鼠黒质致密部酪氨酸羟化酶(TH)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、增殖细胞核抗原(PCNA)和S-100蛋白免疫阳性细胞并对其面密度进行定量分析. 结果:帕金森病组大鼠毁损侧SNpc部位的TH免疫阳性面密度较正常组大鼠明显减少(P<0.01),而GFAP、PCNA、S-100免疫阳性面密度则明显增多(P<0.01).结论:PD大鼠毁损侧SNpc部位存在明显的胶质细胞增生;SNpc部位的胶质细胞可能影响着PD的发生及其严重程度.
-
6-羟多巴胺及囊泡单胺类转运功能抑制对PC12细胞凋亡的影响
目的 探讨6-羟多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)及囊泡单胺类转运体(vesicular monoamine transporter,VMAT)功能抑制对大鼠嗜铬细胞瘤PC12 细胞细胞凋亡的影响.方法 不同浓度6-OHDA(25、50、100、200 μmol/L)及VMAT功能抑制剂利血平(50、100、400、1 600 nmol/L)与6-OHDA(100 μmol/L)作用于PC12细胞,于不同时间点(12、24、36、48 h)用流式细胞仪检测细胞凋亡率,并用Western blot 法检测PC12细胞Bcl-2蛋白及Bax蛋白活性.结果 加入不同浓度的6-OHDA时PC12细胞凋亡随6-OHDA浓度增加显著上升,并且引起Bcl-2蛋白表达抑制,Bax蛋白表达上升,具有时间依赖性.加入利血平后,相应的细胞凋亡增多,Bcl-2蛋白表达降低明显,Bax蛋白表达增多,差异有统计学意义.结论 研究提示6-OHDA能诱导PC12细胞凋亡,并呈剂量及时间依赖性,其作用机制涉及到VMAT功能抑制触发了6-OHDA的内源性毒性,抑制Bcl-2蛋白的表达,促进细胞内Bax的表达,进而诱发多巴胺能神经元的凋亡.
-
重复注射6-羟多巴胺建立帕金森病动物模型
目的 探讨通过大鼠中脑内重复注射6-羟多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)建立高效、稳定、可靠的帕金森病动物模型.方法 将60只雄性SD大鼠随机分为一次打击组和二次打击组,经腹腔注射4%水合氯醛(40 mg/100 g)麻醉,脑立体定位仪固定,于左侧黑质致密部(SNC)和中脑腹侧被盖区(VTA)分别注射6-羟多巴胺(6-OHDA,2 g/L,2μl),二次打击组一周后在相同位置重复注射同剂量的6-OHDA,建立帕金森模型,观察其行为改变,通过HE、TH和DIG-dUTP染色观察其细胞形态的改变及凋亡情况.结果 经过二次打击的大鼠,模型成功率(旋转周数＞7 r/min)为86.7%,明显多于一次打击组的33.3%;HE染色显示,二次打击组凋亡细胞的阳性率(37.12%)明显多于一次打击组(21.25%);DIG-dUTP染色显示,一次打击组大鼠左侧中脑黑质区神经细胞肿胀的数量多,凋亡数量少,凋亡细胞阳性率为20.73%,二次打击组细胞凋亡数显著增多,凋亡细胞阳性率达36.03%;TH染色显示,二次打击组TH阳性细胞数明显减少,TH细胞阳性率(18.61%)显著低于一次打击组(36.55%).结论 通过二次打击建立帕金森病动物模型成功率高于一次打击.
-
帕金森病常用动物模型制作及其进展
多种帕金森病(PD)动物模型已建立,其中常用动物模型为6-羟多巴胺(6-OHDA)大鼠PD模型和MPTP灵长类PD模型,其病理改变以及行为学表现与人类PD表现相类似,是研究PD的病因、发病机制、药物治疗、神经组织移植和基因治疗的较可靠实验模型.
