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针灸及其血清对荷瘤小鼠CD4~+CD25~+Treg细胞体外增殖的影响
目的:观察针灸治疗对H22荷瘤小鼠CD4~+CD25~+ Treg细胞(CD4~+CD25~+regulatory T cells)体外增殖的影响和针灸血清刺激下的CD4~+CD25~+Treg细胞的体外增殖变化,探讨针灸及其血清对荷瘤小鼠免疫调节细胞的干预作用.方法:48只小鼠随机分为电针治疗组、艾灸治疗组、肿瘤对照组、正常对照组.采用H_(22)肿瘤细胞移植性实体瘤模型,电针和艾灸"大椎"治疗后,磁珠分离CD4~+CD25~+Treg细胞,氚标记胸腺嘧啶核苷掺入法观察不同组小鼠CD4~+CD25~+Treg细胞体外增殖能力和针灸血清对CD4~+CD25~+Treg细胞体外增殖的影响.结果:肿瘤对照组CD4~+CD25~+Treg细胞增殖水平比正常对照组明显增高(P<0.05);电针治疗组和艾灸治疗组CD4~+CD25~+Treg细胞增殖水平与肿瘤对照组比较均明显降低(P<0.01).电针治疗组和艾灸治疗组1:1、1:8稀释度血清刺激正常小鼠CD4~+CD25~+Treg细胞体外增殖,较正常对照、肿瘤对照组血清显著增高(P<0.05),各组1:16、1:32稀释度血清对Treg细胞作用的差别无统计学意义(P>0.05).结论:针灸治疗能下调荷瘤小鼠CD4~+CD25~+Treg细胞体外增殖能力.不同浓度针灸血清体外刺激CD4~+CD25~+Treg细胞增殖表现出不一致的效应.
关键词： 肿瘤 针灸 针灸血清 CD4~+CD25~+Treg细胞 免疫 -
松果体褪黑素对大鼠胸腺CD4~+CD25~+调节性T细胞发育及其相关基因Foxp3 的影响
目的 研究松果体摘除及补充褪黑素对大鼠胸腺CD4~+CD25~+ 调节性T 细胞(Treg 细胞)产生、输出及其相关基因叉状头/翅膀状螺旋转录子(Foxp3)表达的影响.方法 选用雄性清洁级SD 大鼠120只,分为正常组、假手术组、松果体摘除组、松果体摘除+褪黑素低剂量组[腹腔注射7.5mg/(kg.d)]和松果体摘除+褪黑素高剂量组[腹腔注射15mg/(kg.d)],术后4、8周取材.应用流式细胞检测技术、RT-PCR法及免疫组织化学染色法观察并分析松果体摘除及补充外源性褪黑素后胸腺及外周血CD4、CD25双阳性细胞数量及胸腺Foxp3表达的变化.结果 松果体摘除术后无论4周或者8周胸腺CD4~+CD25~+Treg 细胞数量均无明显变化,补充褪黑素后双阳性细胞数量呈时间、剂量依赖性明显增加;松果体摘除术后4周外周血CD4~+CD25~+Treg 细胞数量明显增加,但补充褪黑素后恢复正常,而术后8周各组之间无显著性差异;半定量RT-PCR 及免疫组织化学结果显示,松果体摘除后4周大鼠胸腺Foxp3 表达水平明显升高,补充高低两种剂量褪黑素后均有所下降并达到正常水平,而松果体摘除后8周各组之间Foxp3的表达无明显差异.结论 松果体摘除对胸腺CD4~+CD25~+Treg 细胞的产生无明显影响,但导致大鼠胸腺Foxp3 的转录和翻译明显增加,胸腺CD4~+CD25~+ Treg 细胞的输出增加,而补充外源性褪黑素后能逆转上述异常,长时间作用则其影响逐渐消失.
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AIRE通过调控Notch1表达影响CD4~+CD25~+Treg的作用及其机制
目的:研究AIRE基因是否可通过调控Notch1的表达而影响CD4~+ CD25~+ Treg细胞的诱导及功能,探讨AIRE在外周免疫耐受中的作用机制.方法:将RAW264.7细胞分为转染组和未转染组,采用脂质体法将pEGFPC3-AIRE质粒转入RAW264.7细胞,采用RT-PCR法检测各组AIRE mRNA的表达及Notch1 mRNA表达的变化.将RAW264.7细胞分为转染组、转染并经Notch1抗体阻断组、阴性对照组及未转染并经Noteh1抗体阻断组,分别采用FACS法及RT-PCR法检测各组RAW264.7细胞对CD4~+CD25~+Treg细胞数量及Foxp3mRNA表达的影响.结果:质粒成功转入RAW264.7细胞内.AIRE转染组较未转染组Notch1 mRNA表达增加.AIRE转染组较未转染组CD4~+CD25~+Treg细胞的数量及功能相关基因Foxp3 mRNA的表达水平均增加,经Noteh1抗体阻断后,AIRE转染组与未转染组CD4~+CD25~+Treg细胞的数量及功能均较对照组降低.结论:AIRE可能通过上调RAW264.7细胞上Notch1的表达进而影响CD4~+CD25~+Treg细胞的诱导产生及功能,从而在维持外周免疫耐受方面发挥一定的作用.
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肿瘤细胞对CD4~+CD25~+Treg细胞数量和功能的影响
目的:探讨肿瘤细胞与免疫细胞相互作用对CD4~+CD25~+Treg细胞数量和功能的影响.方法:建立Lewis肺癌细胞与小鼠脾淋巴细胞共培养体系.Lewis肺癌细胞与不同浓度小鼠脾淋巴细胞共培养,分为4组:实验组Ⅰ(5×10~5个Lewis肺癌细胞与1×10~6个淋巴细胞共培养)、对照组Ⅰ(1×10~6个淋巴细胞单独培养)、实验组Ⅱ(5×10~5个Lewis肺癌细胞与2×10~6个淋巴细胞共培养)、对照组Ⅱ(2×10~6个淋巴细胞单独培养);Lewis肺癌细胞与淋巴细胞共培养不同时间,采用3个时间点:24、48和72 h;Lewis肺癌细胞培养上清与淋巴细胞共培养,选择培养上清浓度为20%和50%.采用流式细胞术检测了Lewis肺癌细胞与脾淋巴细胞共培养系统中CD4~+CD25~+Treg细胞数量变化,通过RT-PCR方法检测了共培养对Foxp3 mRNA表达的影响.结果:与对照组比较,实验组Ⅰ中CD4~+CD25~+Treg细胞数量和Foxp3 mRNA表达明显增强(P<0.05),实验组Ⅱ中CD4~+CD25~+Treg细胞数量和Foxp3 mRNA表达无明显变化(P>0.05);Lewis肺癌细胞与淋巴细胞培养24及48 h可见CD4~+CD25~+Treg细胞数量及Foxp3 mRNA表达明显升高(P<0.05),而72 h后变化不明显;20%和50%Lewis肺癌细胞培养上清均可明显提高CD4~+CD25~+Treg数量及Foxp3 mRNA表达(P<0.05).结论:肿瘤细胞及其培养上清可诱导CD4~+CD25~+Treg细胞数量增加、功能增强,由肿瘤细胞所引起的CD4~+CD25~+Treg细胞产生及功能增强可能是肿瘤逃避免疫监视机制之一.
关键词： CD4~+CD25~+Treg细胞 FOXP3 肿瘤免疫
