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猪溶素文献资料
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重组表达的猪溶素及其突变体诱导小鼠巨噬细胞的细胞毒性和IL-1β释放
目的 观察猪溶素(Suilysin,SLY)及其无溶血活性的突变体诱导小鼠腹腔巨噬细胞(peritoneal macrophage,PM)释放IL-1β和细胞毒的差异,为进一步研究SLY诱导炎性体激活通路奠定基础.方法 重组表达纯化SLY及第353氨基酸位点突变体rSLY353L,体外和小鼠PM相互作用,用乳酸脱氢酶释放法检测细胞毒作用,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-1β的水平.结果 不同浓度rSLY(0.1～10 μg)诱导小鼠PM细胞毒性呈现明显的剂量效应,rSLY(1μg/ml)诱导产生750 pg/ml的IL-1β同时细胞毒＜20％;rSLY(5 μg/ml)可引起大量的IL-1β释放但细胞毒高达90％.相同剂量的rSLY353L不能诱导可检测到的IL-1β和细胞毒性.rSLY与PM共孵育20 h IL-1β产量高,20 h后IL-1β产量下降但细胞毒性随孵育时间延长而增大.结论 1 μg/ml SLY和PM作用20 h可诱导较高的IL-1β产生同时细胞毒性较低,该实验条件适用于进一步进行SLY激活PM炎性体信号通路的机制研究.
