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人参皂苷Rg3逆转人胆管癌细胞多药耐药性的实验研究
目的 探讨人参皂苷Rg3逆转人胆管癌多药耐药细胞株QBC939/ADM的耐药性.方法 人胆管癌多药耐药细胞株QBC939/ADM的建立,主要采用阿霉素(ADM)持续接触浓度递增法,必要时结合高低浓度交替法诱导人胆管癌细胞QBC939产生多药耐药性(MDR).将三种不同浓度的化疗药物,即环磷酰胺(CTX)、丝裂霉素(MMC)、5-氟尿嘧啶(5-FU)分别作用于QBC939及QBC939/ADM,用CCK-8法检测不同化疗药物的细胞毒作用,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR法检测MDR基因的表达水平,将得到的数据运用统计学分析,并得出结果 ,从而证明人胆管癌多药耐药细胞株QBC939/ADM的建立.以中药人参的有效成分人参皂苷Rg3作为MDR逆转剂,逆转QBC939/ADM的MDR,用CCK-8法、流式细胞术、RT-PCR法检测其逆转作用.结果CCK-8法检测化疗药物作用于对照组和实验组的细胞毒作用,结果显示:实验组细胞的OD值(吸光度)明显低于对照组,P<0.05,差异有统计学意义;流式细胞仪检测化疗药物作用于对照组和实验组的细胞凋亡率:实验组的细胞凋亡率明显高于对照组,P<0.05,差异有统计学意义;RT-PCR法测定MDR基因的表达,结果显示实验组MDR基因的表达明显低于QBC939/ADM,P<0.05,差异有统计学意义.结论 人胆管癌多药耐药细胞株QBC939/ADM成功建立,并初步证明中药人参的有效成分人参皂苷Rg3能有效逆转其MDR,但其逆转机制尚未研究,需进一步探索.
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p27kip1真核表达载体的构建及其对人胆管癌细胞生长的影响
目的:构建p27kip1真核表达载体并进行基因转染,研究其对人胆管癌细胞生长特性的影响.方法:将人p27kip1 cDNA克隆至真核表达载体pClneo的Not I酶切位点中,然后应用DOTAP脂质体将重组质粒转染人胆管癌QBC939细胞中,用G418筛选抗性细胞克隆,采用PCR、RT-PCR和Western印迹法检测外源性目的基因在靶细胞基因组中的整合及表达,以及转基因细胞对裸鼠致瘤性能力的改变.结果:成功构建p27kip1基因真核表达载体,并将其导入QBC939细胞中.经G418筛选得到稳定表达p27kip1基因的细胞株,p27kip1基因转染细胞生长速度明显减慢,并出现分化的迹象,其裸鼠致瘤性能力明显降低.结论:p27kip1基因具有抑癌基因的作用,在未来胆管癌的基因治疗中可能具有应用前景.
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UPR在人胆管癌细胞株QBC939中的作用
目的:研究UPR(未折叠蛋白反应,unfolded protein response)在QBC939细胞中的作用,为临床治疗胆管癌提供新思路.方法:低剂量过氧化氢(H2O2、顺铂(DDP)作用于人胆管癌QBC939细胞系,MTT法测定不同处理组细胞生长曲线,western-blot法测定不同处理组IRElα、BiP蛋白表达情况.结果:低剂量过氧化氢诱导QBC939增殖,顺铂抑制QBC939细胞增殖,IREloα、BiP蛋白在过氧化氢组表达强阳性.结论:UPR促进细胞增殖,对细胞起保护作用,降低顺铂的抑制细胞作用.
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RNA干扰ANXA5表达对人胆管癌细胞QBC939的增殖和侵袭的影响
目的:探讨膜联蛋白A5(ANXA5)对人胆管癌细胞QBC939增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响.方法:构建3个沉默QBC939细胞ANXA5的shRNA质粒(ANXA5-sh1/2/3)和1个阴性对照质粒,慢病毒包装质粒后感染QBC939细胞,流式细胞仪检测感染效率.病毒感染QBC939细胞后,Western blotting检测细胞的ANXA5蛋白表达情况;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率变化;划痕实验和Transwell实验评估QBC939细胞迁移和侵袭能力的变化.结果:干扰组(KD)细胞中的ANXA5蛋白水平显著低于空白组(BC)和阴性对照组(NC)细胞中的ANXA5蛋白水平.与NC组和BC组细胞相比,KD组细胞中G0/1细胞的百分比和凋亡率增高,而细胞增殖活性降低.KD组细胞中的细胞迁移和侵袭能力也低于NC和BC组细胞.结论:RNA干扰QBC939细胞的ANXA5表达后,明显抑制其增殖、侵袭和诱导凋亡的作用.
关键词： Annexin A5 RNA干扰 人胆管癌细胞 QBC939 细胞功能 -
紫杉醇对人胆管癌QBC939细胞wnt/β-catenin信号通路基因和蛋白表达的影响
目的 探讨紫杉醇对人胆管癌QBC939细胞wnt/β-catenin信号通路中基因和蛋白表达的影响.方法 常规培养QBC939细胞,Westemblot检测0.1、1、10 nmol/L紫杉醇组和对照组细胞中β-catenin蛋白的表达量,Q-PCR检测10 nmol/L紫杉醇组和对照组细胞中P53和C-jun基因表达,干预时间均为24 h.结果 与对照组比较,紫杉醇各组β-catenin蛋白含量均有下降,当紫杉醇浓度达到10 nmol/L时,β-catenin蛋白表达明显降低(P＜0.05).与对照组比较,经10 nmol/L的紫杉醇干预24 h后,P53基因表达上升(P＜0.05),而C-jun基因表达下降(P＜0.05).结论 紫杉醇通过抑制QBC939细胞内β-catenin蛋白表达,阻断Wnt信号通路,诱导抑癌基因P53的表达,降低癌基因C-jun的表达.
