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砷体外诱导人Jurkat T淋巴细胞的差异表达cDNA文库的构建
目的了解三氧化二砷(As2O3)诱导人T淋巴细胞的差异表达基因,探讨砷的免疫毒性和免疫抑制的机制.方法在体外用As2O3处理人Jurkat T淋巴细胞(5 μmol/L,24 h)后,应用抑制性消减杂交技术(SSH)和克隆技术构建差异表达的cDNA文库,用聚合酶链反应技术和测序技术鉴定阳性克隆.结果用SSH技术成功地构建了由As2O3诱导的Jurkat T淋巴细胞的差异表达基因的正向消减cDNA文库.经测序分析该文库含有30个基因片段,其中仅有1个是重复基因片段.与基因库的序列比较显示,这些基因序列的同源性在95%～100%.该文库的基因有:氧化代谢基因(包括磷酸丙糖脱氢酶、酰胺腺嘌呤二核苷酸4亚单位、焦磷酸合成酶、16S核糖体、琥珀酰CoA合成酶和ATP合成酶6),转录和翻译基因(包括多聚腺苷结合蛋白、泛醌素特异性蛋白酶14、核糖体蛋白L23、核糖体蛋白S15a、真核翻译起始因子3、Rab5相互作用蛋白、剪切因子和ADP-核糖体因子6样相互作用蛋白),与氧化应激相关的基因(铁蛋白重链和高泳动类蛋白2),与细胞分化或凋亡相关基因(髓细胞分化初期应答蛋白和凋亡相关蛋白),参与蛋白活化或信号传导的基因(酪氨酸激酶、丝氨酸激酶和磷脂酰4磷接头蛋白-1相关蛋白);5个功能不详的基因是KIAA0092、CGI-147蛋白、GCI-35、核磷蛋白Nopp34和与骨骼肌部分mRNA假设蛋白同源基因.1个在基因库中无同源序列的新基因.结论应用SSH技术成功构建了As2O3诱导T淋巴细胞差异表达基因的正向消减cDNA文库.并且发现以往在砷的研究中从未涉及的基因.基因功能分析结果提示,As2O3在诱导T淋巴细胞凋亡的过程中不但有多种基因参与,而且还有一些未知的基因也参与细胞凋亡或(和)细胞抗砷毒性作用的应答过程.
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不同保存时间去白红细胞上清对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖和凋亡的影响
目的 采用体外实验研究不同保存时间去白细胞(去白)红细胞上清对人T淋巴细胞株Jurkat细胞增殖及凋亡的影响.方法 设含10％灭活胎牛血清的1640培养液为空白组,单纯Jurkat细胞培养为对照组,保存7d去白细胞悬浮红细胞上清与Jurkat细胞共培养为实验A组,保存30d去白细胞悬浮红细胞上清与Jurkat细胞共培养为实验B组.采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测各组培养24、48h后对Jurkat细胞增殖的影响.流式细胞术检测红细胞上清作用于Jurkat细胞48h后对细胞凋亡的影响.结果 在开始培养时各组生长抑制率无明显差异(P＞0.05);培养24、48h后,实验B组生长抑制率明显低于对照组[(5.72±0.76)％vs(8.42±0.73)％;(4.71±0.54)％vs(9.16±0.86)％;P均＜0.05].实验A组与对照组生长抑制率相当(P>0.05).在培养开始时各组Jurkat细胞凋亡率无明显差异(P>0.05);培养48h后实验B组凋亡率明显低于对照组[(6.71±1.14)％vs(10.12±1.67)％,P＜0.05],而实验A组与对照组细胞凋亡率相当(P>0.05).结论 新鲜去白红细胞上清对Jurkat细胞增殖和凋亡无明显影响,陈旧的去白红细胞上清对Jurkat细胞的增殖有促进作用,对其凋亡有抑制作用,且这种作用存在一定的时间依赖性.
关键词： 去白细胞红细胞上清 Jurkat 细胞 增殖 凋亡 急性T 淋巴细胞白血病 -
基于iTRAQ技术的伴放线聚集杆菌细胞致死性扩张毒素诱导Jurkat细胞的凋亡研究
目的：探索伴放线聚集杆菌（Aggregatibacter actinomycetemcomitans， A．a）的一种毒力因子（cytolethal distending toxin， CDT）诱导人T淋巴细胞发生凋亡过程中表达改变的信号分子。方法培养Jurkat细胞，并进行分组：不做处理的正常细胞对照组、野生型A．a CDT刺激Jurkat细胞的野生组、突变型A．a CDT刺激Jurkat细胞的突变组，应用iTRAQ技术检测A．a CDT作用Jurkat细胞24 h过程中表达差异蛋白。结果通过筛选，我们得到20个凋亡相关的蛋白（变化倍数＞1．3），其中表达上调的有8个（ CASP8／CD3E／YY1／SH3BGRL3／P53／CASP3／ UBE2I／ TNFRSF10B ），表达下调的有12个（ F5／RPL18A／DAD1／MTCH2／HIST1H1E／CNBP／RBM25／SLC16A1／KDM2A／CD99／RAC2／TMX1）。结论本研究检测出了伴放线聚集杆菌细胞致死性膨胀毒素诱导人 T 淋巴细胞凋亡过程中表达差异的蛋白，并筛选了一条可能的信号通路 UBE2I／P53／TNFRSF10B／CASP8／CASP3，为下一步研究及临床治疗局限型侵袭性牙周炎提供思路。
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夏枯草提取物对 Jurkat淋巴瘤细胞凋亡影响的体外实验研究
目的：探讨夏枯草提取物对 Jurkat 细胞凋亡的影响。方法琼脂糖凝胶电泳法检测 Jurkat 细胞发生的 DNA 降解；流式细胞仪分析 Jurkat 细胞经不同浓度夏枯草提取物处理48 h 后的细胞凋亡率。结果DNA 琼脂糖凝胶电泳结果显示：各实验组出现明显的 DNA 梯形凋亡条带，而空白对照组无 DNA 梯形凋亡条带出现；流式细胞 Annexin v/ PI 法检测细胞凋亡：夏枯草提取物（18μg · mL -1、26μg · mL -1、34μg·mL -1）处理 Jurkat 细胞48 h 后，凋亡早期细胞在空白对照组占3.07豫，在18μg·mL -1组占7.58豫，在26μg·mL -1组占19.39豫，在34μg·mL -1组占34.16豫。结论夏枯草提取物能够诱导 Jurkat 细胞的凋亡。
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CXCR4启动子报告载体的构建
目的：构建并鉴定含人 CXCR4基因启动子的荧光素酶的报告载体。方法采用克隆人 CXCR4基因启动子的序列，构建报告载体 PgL4.17-CXCR4，以其转染 Jurkat 细胞，然后测定荧光素酶的活性。结果扩增得到的 CXCR4启动子序列与克隆人 PgL4.17-CXCR4的 CXCR4启动子序列和 GenBank 报道的一致。实验组荧光素酶的表达活性是874809.0200±39510.6246，与空白组的465.9000±26.2501和对照组的37981.9800±2384.3412总体比较差异有统计学意义（F =4678.919，P <0.001）。结论按照本实验方案，含人 CXCR4基因启动子的荧光素酶的 PgL4.17-CXCR4报告载体被成功构建。
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大蒜素对 Jurkat 细胞 CXCR4表达的影响
目的：探讨大蒜素对体外培养的 Jurkat 细胞中 CXCR4启动子活性的影响。方法：克隆人 CXCR4启动子序列，构建报告载体 PgL4.17- CXCR4，转染 Jurkat 细胞，G418筛选分组后，大蒜处理分高、中、低浓度3组（40μg/ ml、20μg/ ml、10μg/ ml），以未做任何处理的转染细胞作为对照组，以注射用水处理的转染细胞作为注射水对照组，各组处理24h 后，在相应的条件下进行荧光素酶活性测定。结果：成功构建了含人 CXCR4启动子序列的 PgL4.17- CXCR4报告载体，6组荧光素酶活性比较，差异有统计学意义（P <0.001），其中大蒜素处理组荧光素酶活性均低于对照组（P <0.001）。结论：大蒜素能降低 CXCR4启动子的表达，有效抑制体外培养的 Jurkat 细胞中的 CXCR4启动子活性。
