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江苏省男性HIV感染者梨支原体16S rRNA基因片段序列分析
目的 了解梨支原体(Mpi)在男性HIV感染者中的流行情况,复核鉴定部分Mpi 16S rRNA基因片段序列.方法 以江苏省男性HIV/AIDS为研究对象,采集其首段尿,用巢式PCR法检测Mpi,并描述该人群中Mpi的感染情况.纯化PCR产物进行Mpi 16S rRNA基因片段序列测定,采用Mega 4.0软件的多序列排列程序对支原体临床株和下载序列进行同源位排列、比对,利用Neighbor-Joining构建系统发育树.将Mpi的pl基因序列信息输入Vector NTI Advance 11.0软件进行分析,并推算其编码的氨基酸序列,将推断出的理论氨基酸序列与其他支原体pl全序列进行同源性分析.结果 Mpi总感染率为21.5％.18株临床分离株几乎全部汇聚为一个分支,相似度＞90％,且与实验室保存Mpi标准株在同一分支,Mpi的pl蛋白与穿通支原体HF-2同源关系较近.结论 Mpi的感染率与以往调查结果相比明显增高,且临床分离株具有较高同源性.
关键词： 梨支原体 HIV感染者和艾滋病患者 p1基因 16S rRNA基因 -
衡阳地区儿童肺炎支原体流行状况及3种基因分型方法比较
目的 了解2013—2016年湖南省衡阳地区儿童肺炎支原体(Mp)感染情况,用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)、巢式PCR(nPCR)和快速循环PCR(Rapid-Cycle PCR)对Mp p1基因进行分型研究.方法 收集2013—2016年衡阳市4家三甲医院儿童急性呼吸道感染咽拭子标本,PCR扩增16S rRNA基因鉴定Mp临床株.用PCR-RFLP、nPCR和Rapid-Cycle PCR对临床株进行p1基因分型,分析2013—2016年衡阳地区Mp的流行情况.结果 从984例咽拭子标本中共鉴定出109株Mp菌株.PCR-RFLP和nPCR对109例Mp菌株分型的敏感性为100％(109/109).Rapid-Cycle PCR分型法的敏感性为98.17％(107/109),3种方法基因分型的特异性均为100％.109例Mp临床株中Ⅰ型分离率为78.90％(86/109),显著高于Ⅱ型菌株检出率(21.10％,23/109,t=93.239,P=0.01).2013—2016年,Ⅰ型逐年检出率分别为93.10％、87.50％、76.92％和65.79％,Ⅱ型逐年检出率分别为6.90％、12.50％、23.08％和34.21％,MpⅠ型菌株检出率逐年减少,而Ⅱ型Mp菌株逐年增加.结论 PCR-RFLP、nPCR和Rapid-Cycle PCR均对Mp分型具有敏感性和特异性,2013—2016年衡阳地区分离的109例Mp临床株主要为Ⅰ型,且逐年由Ⅰ型向Ⅱ型转换.
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沈阳地区肺炎支原体分离株P1蛋白基因限制性酶切图谱分型研究
目的：根据肺炎支原体（MP）P1蛋白基因限制性酶切图谱分类MP临床分离株，调查沈阳地区肺炎支原体流行情况。方法：多聚酶链反应扩增MP FH标准株和MP临床分离株的P1基因片段，扩增产物用限制性内切酶Hea III消化，1.5%琼脂糖凝胶电泳分析。结果：肺炎支原体临床分离株和FH标准株酶切图谱相同。结论：沈阳地区肺炎支原体分离株属于Ⅱ型。
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IL-2增强肺炎支原体P1C核酸疫苗的肌注免疫效果
目的:研究IL-2对肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)P1C核酸疫苗经肌注免疫BALB/c小鼠后的免疫应答水平和免疫保护作用.方法:将P1C-IL-2核酸疫苗肌注免疫BALB/c鼠,ELISA检测疫苗免疫后56天小鼠血清IgG和IgG亚类、支气管灌洗液中SIgA、IFN-γ和IL-4的水平;用2×107 Mp菌落形成单位鼻饲感染BALB/c鼠,建立感染小鼠模型,病理切片检测Mp感染后小鼠肺部炎症病理改变;将系列10倍稀释的支气管灌洗液接种于SP4固体平板,并进行菌落计数.结果:P1C-IL-2核酸疫苗免疫组小鼠血清中的总IgG、IgG1、IgG2a、IFN-γ和IL-4水平均较P1C单基因疫苗组显著增高(P＜0.05),但两组支气管灌洗液中SIgA差异无显著性(P＞0.05).Mp感染后第1、3、6天P1C-IL-2双基因疫苗组小鼠肺组织病理评分(HPS)较P1C单基因疫苗免疫组显著增高,但支气管灌洗液中的Mp菌落数明显减少;第9天后两组HPS和Mp菌落数差异无显著性.结论:IL-2能显著增强P1C疫苗肌注的免疫保护作用和免疫应答水平,但同时在Mp感染早期激发了较重的肺组织炎症.
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肠道病毒71型类病毒颗粒在昆虫细胞Sf9中的表达
目的 构建含有肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)P1和3CD基因的嵌合型重组杆状病毒质粒,探讨3CD蛋白酶对P1蛋白的切割作用及形成类病毒颗粒(Virus-like particles,VLPs)的可能性.方法 将EV71的P1和3CD基因克隆至同一pFastBac Dual质粒上,转化感受态大肠杆菌DH10,构建重组杆状病毒质粒Bac-P1-3CD,转染昆虫细胞Sf9,制备重组杆状病毒,经SDS-PAGE、Western blot及电镜对目的 基因表达产物进行分析.结果 重组杆状病毒质粒Bac-P1-3CD经PCR鉴定证明构建正确.重组杆状病毒感染的Sf9细胞经SDS-PAGE分析,可见相对分子质量约39 000、32 000和26 000的特异条带,大小与EV71的VP1、VP0、VP3蛋白相符;Western blot分析可见与EV71 VP1蛋白大小相近的特异条带;电镜观察可见EV71类病毒颗粒.结论 EV71的P1和3CD嵌合基因可以通过重组杆状病毒在昆虫细胞中表达,3CD蛋白酶可以切割P1蛋白得到VP1抗原,并能形成类病毒颗粒.
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口蹄疫病毒衣壳蛋白前体P1基因和蛋白酶3C基因的克隆及序列分析
目的对口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白前体P1基因和蛋白酶3C基因进行PCR扩增、克隆和序列分析,了解FMDV基因型与血清型的相关性及分子免疫机理,便于疫苗株的选择.方法应用RT-PCR方法扩增了CC-1毒株的衣壳蛋白前体P1基因和蛋白酶3C基因,并将其克隆到pGEM-T easy载体上,分别构建含有P1基因和3C基因的两个重组质粒pGEMP1和pGEM3C,并进行核苷酸序列分析.结果 CC-1株与相同血清型毒株P1基因核苷酸序列和氨基酸序列存在较高的同源性,与不同血清型毒株P1基因氨基酸序列的同源性差异显著,而不同血清型毒株的蛋白酶3C基因氨基酸序列的同源性均在90%以上.结论成功地克隆了FMDV P1区基因和蛋白酶3C基因,为选择口蹄疫病毒疫苗株提供了背景材料.
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肺炎支原体流行株基因分型研究
目的：了解肺炎支原体(MP)感染患儿MP流行株基因分型及其流行趋势变化。方法采集2012年2月至2013年12月住院MP感染患儿的鼻咽分泌物，采用基于MP P1基因的巢式PCR及多重PCR方法进行MP基因亚型的监测，并分析其流行趋势。结果在313例标本中检出P1-I型304例(97.12%)，P1-II型8例(2.56%)，V2型变异株1例(0.32%)，基因测序结果与巢式多重PCR结果相符合。结论巢式多重PCR方法能够直接有效地对MP进行P1基因分型，研究期间MP感染株以P1-I型为主，发现1例V2变异株。
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肺炎支原体耐药性及分子流行病学研究进展
肺炎支原体是临床上非典型性肺炎常见的致病菌,主要采用大环内酯类抗菌药物治疗.近年来,肺炎支原体对大环内酯类耐药性日趋严重,且全世界各地耐药率存在差异,目前认为其耐药机制主要与23SrRNA V区基因位点突变(2 063位和2 064位)相关.根据肺炎支原体菌株P1基因序列的不同,应用聚合酶链式反应-限制片段长度多态性分析(PCR-RFLP)可分为Ⅰ型和Ⅱ型,其流行基因型随地区和时间的不同而不同.另外,为了解肺炎支原体耐药菌株之间是否存在克隆传播,可采用多位点可变数量串联重复序列分析(MLVA)方法分析肺炎支原体克隆型.加强肺炎支原体的耐药性及流行基因型的监测,有助于了解肺炎支原体的流行病学特点,为新型抗菌药物及疫苗的研发提供依据.
关键词： 肺炎支原体 耐药 p1基因 多位点可变数量串联重复序列分析 -
肺炎支原体P1C-IL-2融合基因疫苗鼻饲对小鼠免疫效果的检测
目的 研究肺炎支原体(Mp) P1C-IL-2融合基因疫苗经鼻饲免疫小鼠后的免疫应答水平和免疫保护作用,了解IL-2对P1C核酸疫苗的免疫佐剂效应.方法 将构建的P1C-IL-2核酸疫苗鼻饲免疫BALB/c鼠,ELISA检测免疫小鼠血清IgG滴度、IgG亚类和支气管肺泡灌洗液中IgA及IFN-γ、IL-4的水平；建立小鼠Mp感染模型,观察Mp攻击后小鼠肺组织炎症情况和支气管肺泡灌洗液中Mp菌落数的变化.结果 P1C-IL-2双基因疫苗组小鼠血清中的总IgG、IgG1、IgG2a亚类和支气管肺泡灌洗液中IFN-γ和IL-4水平均较PIC疫苗组小鼠显著增高(P＜0.05),但两组支气管肺泡灌洗液IgA差异无显著性(P＞0.05).用Mp滴鼻感染免疫小鼠,第1、3、6天P1C-IL-2双基因融合疫苗组小鼠肺组织炎症病理评分显著高于P1C单基因疫苗免疫组小鼠,两组小鼠支气管肺泡灌洗液中的Mp菌落数差异无显著性(P＞0.05).结论 IL-2能显著增强PIC疫苗的免疫应答水平,但在感染早期也激发了较强的肺组织炎症.
